【国家标准(GB)】 SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验

GB/T 17999. 7-1999
血清平板凝集试验是监测鸡白痢-鸡伤寒沙门氏菌感染的常规方法，但是某些其他细菌感染后，也可出现定的阳性反应，这就有赖于细菌分离，作为最终结果判定，为此本标准规定了SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验方法。
SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为《SPF 鸡鸡白痢沙门氏菌检验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分：GB/T 17999. 1---1999
GB/T 17999. 2-1999
GB/T 17999. 3---1999
GB/T 17999.4·1999
GB/T 17999. 5--1999
GB/T 17999. 6..--1999
GB/T 17999.8--1999
GB/T 17999. 9---1999
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF 鸡
红细胞凝集抑制试验；
血清中和试验；
血清平板凝集试验；
琼脂扩散试验；
酶联免疫吸附试验；
胚敏感试验；
试管凝集试验；
间接免疫荧光试验
本标准街中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位：中国兽药监察所、农业部实验动物研究中心。本标准主要起草人：张学琴、陈德威、赵立红。86
1范围
中华人民共和国国家标准
SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验
SPF chicken -Examination of Salmonella PullorumGB/T17999.7- ~1999
本标准规定了鸡白痫沙门氏菌检验所用试剂、材料，检验程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染鸡白痢-鸡伤寒沙门氏菌后的细菌分离和鉴定。2原理
取待检样品（肠内容物、有关脏器匀浆)接种于增菌培养基中进行增菌，然后将培养物转移到选择、鉴别培养基上培养，挑选可疑菌落接种于营养琼脂培养基上，取培养物进行生化试验与血清学试验，以确定鸡白痢沙门氏菌与鸡沙门氏菌。3引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T14926.1--1994实验动物沙门氏菌检验方法GB4789.4-1994食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验4材料和试剂
4.1营养肉汤培养基按GB4789.4执行。4.2改良亚硒酸氢钠增菌液（SF）按GB/T14926.1--1994中3.1的规定执行。4.3DHL琼脂按GB4789.4—1994中3.19的规定执行。4.4SS琼脂按GB4789.4--1994中3.21的规定执行。4.5亚硫酸铋琼脂（BS)按GB4789.41994中3.18的规定执行。4.6三糖铁培养基（TSI)按GB4789.4-1994中3.24、3.25的规定执行。4.7营
营养琼脂按GB4789.4--1994中3.7的规定执行。半固体琼脂按GB4789.4-1994中3.28的规定执行4.8
糖发酵管按GB4789.4--1994中2.2的规定执行。4.9
蛋白陈水按GB4789.4--1994中2.13的规定执行。4.10
硝酸盐培养基按GB4789.4-1994中2、17的规定执行。4.11
氧化酶试剂按GB4789.4--1994中2.18的规定执行。4.12
3氨基酸脱羧酶试验培养基按GB4789.4-1994中2.21的规定执行。4.13
4.14尿素培养基按GB/T14926.1--1994中3.7.1的规定执行。5革兰氏染色法按GB4789.4—1994中1.2的规定执行。4.15
6沙门氏菌诊断血清。
国家质量技术监督局1999-11-10批准2000-04-01实施
5检验程序
检验程序见图1。
卵巢、心包液、胆汁
肝、脾各10g~15g
纽织均浆
样品：茂养肉汤培养基
1 : 10
GB/T 17999.7—1999
盲肠、小肠5cm~7cm
组织幻浆
样品：SF增菌液
36±1'C,24h
SS或S和H
分离培养
43℃±1C，18h～24h
36C±1C,24h～~48h
挑选出3个~5个可疑菌落，接种于营养琼脂斜面培养基36 C±1C, 24h
涂片，革兰氏染色，镜检
“糖铁琼脂
生化试验
沙门氏菌A～F群
多价O血清
生化鉴别
图 1 沙门氏菌检验程序
6操作步骤
6.1采样：无菌采取有病变的卵巢、输卵管、睾丸、心包膜与心包液、胆汁、肝、脾以及小肠和盲肠。6.2将肝、脾、胆汁、心包膜、心包液、输卵管、睾丸混合样品，放入灭菌乳钵或均浆器中研磨成匀浆，加入少瑾营养肉汤稀释。取此匀浆10mL接种到100mLSF增菌液中，另取匀浆10mL接种到100ml营养肉汤培养基中1。采取的小肠与盲肠样品，按上述方法制成匀浆，取10mL接种到100mLSF增菌液中。分别将营养肉汤培养瓶置36℃±1℃培养24h，SF增菌液培养瓶置43℃±1℃培养18h～24h。6.3分离培养：用接种环取6.2培养物分别在SS或BS和DHL琼脂平板培养基上划线接种，置36C土1C培养24h~48h。如果经24h~48h培养后未发现可疑菌落，再取增菌培养物重复划线分离培养次。wwW.bzxz.Net
6.4挑选可疑菌落：从每块平板培养基上挑选沙门氏菌疑是菌落3个~5个，分别接种在营养琼脂斜面上，置36C士1C培养24h。鸡白痢沙门氏菌与鸡沙门氏菌的典型菌落是生长在DHL培养基上为黄褐色透明小菌落；生长在SS琼脂平板上为无色半透明圆形小菌落；生长在BS琼脂平板上为黑色或黑绿色小菌落。
6.5生化鉴定：取营养琼脂斜面培养物接种到下列培养基上。6.5.1接种TSI，斜面划线，底部穿刺，置36℃土1C培养24h。其生化反应为斜面呈红色，底层变黄，有或无气体，不产生硫化氢(H,S）。6.5.2接种生化培养基，经培养后检验结果。发酵葡萄糖产酸或产气，不发酵乳糖和蔗糖。触酶、赖氨酸脱羧酶、硝酸盐还原试验阳性。氧化酶、尿素酶、吲哚试验阴性。6.6取莺养琼脂斜面培养物，涂片作革兰氏染色，镜检可见革兰氏阴性杆菌，大小为0.3um～0.5umX1um～2.5m，无芽孢，多单个散在，经接种半固体培养基检查无动力。6.7应用生化试验进一步区别鸡白沙门氏菌与鸡沙门氏菌（鸡伤寒沙门氏菌)（见表1）。88
鸡白痫沙门菌
鸡沙门氏菌
GB/T17999.71999
表1鸡白痢沙门氏菌与鸡沙门氏菌的鉴别生化
葡葡糖
注：产酸产气；+产酸或阳性；一阴性或不分解结果报告
卫矛醇
麦芽糖
鸟氨酸脱羧
符合上述各项实验结果，为鸡白痢沙门氏菌或鸡沙门氏菌（鸡伤寒沙门氏菌)检出阳性，否则结果为阴性。
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