【农业行业标准(NY)】 鸭病毒性肝炎诊断技术

ICS,11. 220
中华人民共和国农业行业标准
NY/T554—2002
鸭病毒性肝炎诊断技术
Diagnostic techniques for duck viral hepatitis2002-08-27发布
2002-12-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T554—2002
鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis，简称 DVH)是维鸭的一种急性接触传染性疾病,以肝炎为主要特征，世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英）,Office Intentional des Epizootic（法），OIEI把该病列为B类疫病，我国农业部列为二类疫病。DVH的病原为鸭肝炎病毒（DHV），根据病毒的特性不同,DHV分为3种类型(DHV，、DHV，、DHV,）。最常见的为DHV，属肠道病囊（我国仅有此型);DHV,为星状病毒;DHV 为小核糖核酸病毒。本标准规定的维鸭接种/保护试验和鸭(鸡)胚接种/中和试验与OIE推荐的相应方法一致。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标推由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：华南农业大学、江苏省农业科学院本标雅主要起草人：贺东生、黄引贤、张则斌、罗函禄、刘福安。428免费标准bzxz.net
1范围
鸭病毒性肝炎诊断技术
NY/T 554—2002
本标准规定了鸭病毒性肝炎的雏鸭接种/保护试验和鸭（鸡）胚接种/中和试验的技术要求。本标准适用于鸭病毒性肝炎的诊断及检疫。2维鸭接种/保护试验
2. 1 材料准备
2.1.1研钵或平血，玻璃匀浆器，10ml带胶塞玻璃瓶。2. 1.21 mL和5 mL注射器及针头。2.1.30.22μm微孔滤膜及滤头。2.1.4离心管、手术剪刀和手术锻子。2.1.50.85%生理盐水：在使用前加人青霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000IU/mL和2000μg/mL。
2.1.6DHV高免血清（在国内诊断检疫仅用 DHV，，对进境鸭的检疫还应加上DHV，、DHV抗血清）。2.1.7雏鸭：1～5日龄75只易感健康雏鸭。2.2操作方法
2.2.1病料处理
在无菌室内超净台上无菌采取数例病鸭的肝脏组织10g，于研钵或平血中剪碎，用玻璃勾浆器制备组织勾浆，按110(W/V)加人生理盐水。将勾浆液转至离心管中，3000r/min离心10min。弃去上层脂肪，抽取中间清亮的液体，再经过0.22um的灭菌微孔滤膜过滤，收集滤过的液体，作为病料样品直接接种；或装入10mL玻璃瓶中，盖上胶塞，置专用的密闭铁盒里，于一20℃保存待检，保存期不超过1年。
2.2.2试验
选取75只健康雏鸭，分为A、B和C三组，每组25只，做如下处理：A组（攻保护组）：每只鸭颈背部皮下注射1mIDHV高免血清。24 h后，每只鸭皮下注射0.2mL的待检样品。
B组（攻毒组）：每只鸭颈背部皮下注射0.2mL的待检样品。C组（对照组）：每只鸭颈背部皮下注射0.2mL的生理盐水。将上述三组鸭置于相同的管理条件下，隔离饲养，连续观察。2.3结果判定
当C组没有任何一只维鸭死亡时，对照试验才成立，可进行如下判定，否则应重检。阳性（+）：B组特征性死亡的鸭只总数达30%以上（含30%），而A组死亡的鸭只总数低于10%(含 10%)。
可疑（士）：B组特征性死亡的鸭只总数低于30%，而A组的鸭只不死亡。此可疑结果应重检，仍为可疑时则判为阳性。
1）特征性死亡指死亡的胚胎出现如下任何一种病变：尿囊液变绿。肝脏肿大、肝有出血斑点或有坏死灶。429
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阴性（一）:B组的鸭只均不死亡。3鸭（鸡）胚接种/中和试验
3.1材料准备
3.1.11mL注射器及针头4套。
3.1.2生理盐水：在使用前加人青霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000IU/mL和2000μg/mL。3.1.3DHV高免血清。
3.1.4鸭（鸡）胚：75枚12~~14日龄的易感健康鸭胚；也可选用9~~10日龄的无特定病原(SPF）鸡胚。3.2操作方法
3.2.1取0.5mL病料样品，加人4.5mL的生理盐水，制备成100倍稀释的待检病毒液。3.2.2选取75只鸭或鸡胚，分为A、B和C共三组，每组25只胚，处理如下：A组（中和试验组）：取2mL高免血清和2mL的待检病毒液，混合均勾。置于37℃温箱中作用30 min后，每胚经尿囊腔接种0.2mL。B组（接种试验组）：取2 mL的生理盐水，加人 2mL待检病毒液，混勾，每只胚经尿囊腔接种0.2mL。
C组，对照组：每只胚经尿囊腔接种0.2 mL的生理盐水。将上述三组接种的鸭（鸡）胚用石蜡或无菌胶布封口后，置于37℃孵化箱内继续孵化，每天照蛋2次，剔除接种后 24 h内A、B、C 三组因细菌污染而死亡的胚，分组记录其死亡情况及胚胎剖检病变。观察至第7d（如用鸡胚，则为10d）。3.3结果判定
当C组中没有任何胚胎死亡，才可进行如下判定，否则应重检。阳性（+）：B组特征性死亡的鸭（鸡）胚总数达20%以上（含20%），而A组的胚不死亡。可疑（士）：B组特征性死亡的鸭（鸡）胚总数低于20%，而A组的胚不死亡。此可疑结果应重检，仍为可疑时则判为阳性。
阴性（一）:B组和A组的胚均不死亡。430
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