【国家标准(GB)】 化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌

中华人民共和国国家标准
化妆品微生物标准检验方法
金黄色葡药球菌
Standard methods of microbiologicalexamination for cosmetics
Staphylococcus aureus
UDC 668. 58 : 576
.85.07
GB 7918. 5 --87
金黄色葡葡球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄球菌有重要意义。1方法提要
根据本菌特有的形态及培养特性，应用Baird Parker平板进行分离，该平板中的氟化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征，以兹鉴别。
2培养基和试剂
2.1培养基
2.1. 1SCDLP液体培养基
见GB7918.1-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。2.1.27.5%的氟化钠肉汤
成分：蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
1000ml
制法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121℃（151b）15min高压灭菌。2. 1. 3 Baird Parker 平板
成分：！
胰蛋白陈
牛肉膏
醇母浸膏
丙酮酸钠
甘氨氮酸
氯化锂(LiCI·6 H,O)
蒸馏水
pH7.0±0.2
增菌剂的配制:30%卵黄盐水 50ml 与除菌过滤的 1%亚碲酸钾溶液 10ml 混合,保存于冰箱内。制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25C校正pH。分装每瓶95ml，121℃高压中华人民共和卫生部1987-05-28批准116
1987-10-01实施
GB 7918.5—87
灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，每95ml加入预热至50C的卵黄亚碲酸钾增菌剂5ml、摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。2.1.4血琼脂培养基
成分：营养琼脂
脱纤维羊血（或兔血)
制法：将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右以无菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。
2.1.5甘露醇发酵培养基
成分：蛋白陈
氯化钠
甘露醇
牛肉膏
0.2%溴磷香草酚蓝溶液
蒸馏水
1000mlbzxZ.net
制法：将蛋白陈、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，115℃（101b）20min灭菌备用。2.1.6免（人）血浆制备
取3.8%柠檬酸钠溶液【121℃（151b）30min灭菌】1份加兔（人）全血4份，混勾静置，2000～3000/min离心3～5min。血球下沉，取上面血浆。3设备和材料
显微镜。
3.2培养箱。
3.3离心机。
灭菌吸管：1ml,5ml，10ml。
灭菌试管。
3.6载玻片。
3.7酒精灯。
4操作步骤
4.1增菌：取1：10稀释的样品10mi接种到90mlSCDLP液体培养基中（如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤），置37℃培养箱，培养24h。注：如无此培养基也可用7.5%氟化钠肉汤，检验含防腐剂的化妆品时，可在1000ml此培养基中加18卵磷脂、7g吐温80。
4.2分离：自上述增菌培养液中，取1～2接种环，划线接种在BairdParker氏培养基，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置37℃培养24～48h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37℃培养24h。
4.3染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5～lum。4.4甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37℃培养24h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。
4. 5 血浆凝固酶试验
GB 7918. 5 - 87
4.5.1玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均勺混浊无疑固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。4.5.2试管法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，放入灭菌小试管中，再加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml。混，放37℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5ml，分别加入灭菌小试管内0.5ml1：4血浆混匀，做为对照。
5检验结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。附加说明：
本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草。本标准主要起草人刘以。
本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释。148
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