【国家标准(GB)】 饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹的测定

GB/T17814---1999
随着我国饲料工业的不断发展，抗氧化剂在饲料中的使用逐渐增加。考虑到抗氧化剂在饲料中用量的多少所带来的利擎，必须建立检测其含量的方法。我国食品中抗氧化剂BHA、BHT的检测已有国家标准。气相色谱法单项测定BHA、BHT或EQ的方法已有介绍。国外检测抗氧化剂的方法很多，主要是气相色谱和高压液相色谱法。但在我国目前还未见检测饲料中抗氧化剂的方法的报导，更没有制定国家标准。根据我国复核检验不同品种的国外进口抗氧化剂以及我国目前使用抗氧化剂的情况来看，主要是复合型抗氧化剂或复配使用。因此，建立能同时检测多组分复合型抗氧化剂的检测方法势在必行。鉴于此，特制定本标准。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人：谢发明、宋荣、韩华琼、范理。252
1范围
中华人民共和国国家标准
饲料中丁基羟基香醚、二丁基
羟基甲苯和乙氧喹的测定
Determination of butyl hydroxy anisole,dibutylhydroxy toluene and ethoxyquin in feedsGB/T17814.1999
本标准规定了饲料中抗氧化剂丁基羟基菌香醚（BHA)、二丁基羟基甲苯（BHT)和乙氧喹（EQ)测定方法的试剂、仪器、设备、操作方法和注意事项。本标准适用于配合饲料、鱼粉中抗氧化剂BHA、BHT、EQ的测定。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T14699.1-—1993饲料采样方法3原理
样品中BHA、BHT、EQ用正已烷提取，离心分离后（如遇干扰待测组分的样品，则需取上清液，用柱层析净化处理）,取上清液用气相色谱、FID检测器检测，外标法定量。4试剂
除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，分析用水为蒸馏水（或离子交换水）。4.1正已烷。
4.2丙酮。
4.3二氯甲烷。
4.4二氯甲烷-丙酮（9+1)混合液。4.5无水硫酸钠：500℃烘4h。
氟罗里硅土：孔径177149μm（80~100目），550℃烘4h，存于于燥器中。4.6
助滤剂 Celite 54520~~45 μm。4.8医用脱脂棉。
4. 9 BHA标准物：纯度 98%。
4.10BHT标准物：纯度98%。
EQ标物：纯度95%。
2BHA、BHT、EQ混合标准溶液：称取上述标准物各500.00mg（视其纯度，换算成100%再称样），4.12
置于50ml.棕色容量瓶中，以正已烷溶解并定容。此液为10mg/mL。然后稀释成系列标准液：1. 00 mg/mL、0.50 mg/mL、0. 10 mg/mL.0.05 mg/mL.0.01 mg/mLc国家质量技术监督局1999-08-10批准2000-02-01实施
5仪器、设备
5.1气相色谱仪：带FID检测器。5.2氮气钢瓶：氮气纯度为99.99%。5.3氢气发生器：氢气纯度为99.99%。5.4空气钢瓶：般压缩空气。
5.5离心机：4000r/min。
5.6粉碎机：粉碎粒度达40目。
超声波处理机。
微型混合器。
5.9分析天平；感量0.0001g。
5.10具塞刻度玻璃试管：10mL。5.11
铝制试管架。
具活塞层析柱：15cm×cm。
GB/T17814—1999
旋转蒸发器：带抽真空装置（或真空泵）。5.14浓缩烧瓶：150mL，带5mL刻度尾接管。6样品
6.1按GB/T14699.1取得样品。
6.2配合饲料：以四分法缩分样品至约250g，粉碎，过孔径420μm（40自）筛，混匀，装入密闭广口瓶中，避光低温保存备用。
6.3鱼粉：如为均勾粉状，可直接取样。7测定步骤
7.1试样制备
7.1.1提取
按6.1或6.2称取样品2.000g于10mL具塞刻度试管中，加人少许无水硫酸钠，再加5.0mL正已烷，加塞，在微型混合器上混合0.5min，将试管放到试管架上，连同试管架一起放人超声波处理槽内，槽内水位以刚好与试管中试样液位取齐或稍过，超声提取15min。取出，将试管外水液擦去，放人离心机，以4000r/min离心2min，取出试管。上清液为待测溶液。7.1.2净化
7.1.2.1如遇干扰待测组分的样品，须作如下柱层析净化处理：首先按7.1.1提取样品，只是提取液由5.0mL正已烷改为10.0mL正已烷。7.1.2.2装柱：层析柱底先放少许脱脂棉，再加少许（约2g）无水硫酸钠，用正已烷调制氟罗里硅土适量（约4g，以装满柱为准），湿法填充于层析柱中，上端先加约5g助滤剂，再加约5g无水硫酸钠，铺平。7.1.2.3淋洗：用移液管准确吸取7.1.2.1所得上清液5.0mL上柱。先以30mL正已烷淋洗，再以80ml.二氯甲烷-丙酮（4.4)混合液淋洗，速度以大约每分钟2mL为宜。用旋转蒸发器浓缩至约1ml用正已烷定容至2.0ml，待测。
7.2测定
分别取系列混合标准溶液（4.12)1μL进样，测得不同浓度BHA、BHT、EQ的峰面积（或峰高）,以浓度为横坐标，峰面积（或峰高）为纵坐标，分别绘制工作曲线。同时取样品待测液1μL进样，测得峰面积（或峰高）分别与工作曲线相比较定量；或按式（1)计算求得。7.3计算
GB/T 17814--1999
BHA、BHT、EQ的含量w按式（1)分别计算：w
式中：--
A. Xms X V
Ast XmXV
每干克样品中含某组分的质量，mg；进样样液中BHA、BHT、EQ蜂面积（或峰高），μV·s（或mm）；m.t -
BHA、BHT、EQ标准物进样的绝对量，ng；样品提取定容体积，mL；
A—标准液的BHA、BHT、EQ峰面积（或峰高），μV·s（或mm)；m-
称样量·g；
V--样液的进样体积,μL。
如样品用柱层析净化处理，则结果按式（2）计算：AXmat XV
AmxV×V
式中：V，一→样品提取液分取过柱体积，mL；V,
样液进样前定容体积,mL。
其他符号同式（1）。
7.4气相色谱参考条件
7.4.1气相色谱仪，带FID检测器。色谱柱：HP-1石英毛细管柱，25mX.32mm。电心品心
o0ooeo6+0(2)
载气：氮气：2.0mlL/min；尾吹气：30mL/min；氢气：30mL/min；空气：350mL/min。隔垫吹扫：6mL/min。
分流比：20：1。
检测器温度：240℃。
进样口温度：210℃。
柱温：见图1。
25C/min
150℃
7.4.2气相色谱仪，带FID检测器。程序升温图
色谱柱：5%SE-30玻璃填充柱，2.5m×g3.5mm。气体流速：氮气：40mL./min；氢气：25mL/min；空气：250mL/min。进样口、检测器温度：230C。
柱温:见图 2。
GB/T17814—1999
200℃wwW.bzxz.Net
25C/min
170℃
图2程序升温图
7.4.3BHA、BHT、EQ气相色谱图（出峰顺序：BHA、BHT、EQ），见图3和图4。1
图3填充柱
8结果表述
图4毛细管柱
每个试样平行测定两次，以其算术平均值为结果。结果表示到小数点后一位。，9允许差
相对相差≤15%。
10注意事项
10.1本标准的特点之一，是以程序升温去除色谱图后面可能出现的杂质峰（避免干扰后续上机样品的测定）。如色谱图中，前面各待测组分不受杂峰干扰，则尽可不必采用净化处理，避繁求简。但要常注意清洗进样器
10.2本标准也适合于维生素预混料、单组分抗氧化剂BHA、BHT、EQ的测定，而且可免除程序升温，节省时间。
10.3本标准检测全过程，尽可能避光（或不在强光下）操作，以减少损失。10.4如遇较难提取的试样、可于头天称样，加正已烷浸泡过夜，第二天再提取测定。256
GB/T17814—1999
5如用柱层析净化时，定要注意氟罗里硅土的活性。550℃烘4h能保持3天，3天后，用前需在0.5
130C烘4h（特别是夏天湿度大时，更需注意）；活性太强，EQ过柱洗脱不下来时，可加分析用水脱活（加氟罗里硅土重量的2%的水，摇匀，过夜平衡）。10.6本标准以毛细管柱法为仲裁法。257
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