【国家标准(GB)】 动物蛋白质饲料消化率的测定 胃蛋白酶法

GB/T 17811—1999
本标准等效采用美国公职分析化学家协会（AOAC）（1995年版）《动物蛋白质饲料的胃蛋白酶消化率测定方法过滤法》。
在技术内容上，原方法中所用的“恒温搅动器”，根据实际情况改用“恒温平转摇床”；再则，限于国内试剂条件，选用市场上易购的胃蛋白酶试剂（1：3000)代替原方法指定的胃蛋白酶试剂（1：10000）。本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归。本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人：屈利文、钱防。239
1范围
中华人民共和国国家标准
动物蛋白质饲料消化率的测定
胃蛋白酶法
Determination of digestibility in animalprotein feeds--Pepsin method本标准规定了动物蛋白质饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。GB/T 17811 --1999
本标准适用于所有动物性蛋白质饲料，不适用于植物性蛋白质或混合饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。
2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6432-1994饲料中粗蛋白测定方法GB/T6433—19941
饲料粗脂肪测定方法
分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682—1992
3方法原理
脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液，在恒温、持续不断地搅拌下消化16h，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的粗蛋白含量。同时，测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白含量。4试剂
本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。实验室用水应符合GB/T6682中三级水的规格。4.10.2%胃蛋白酶溶液：将6.1mL浓盐酸稀释至1000mL水中（溶液pH1~2），加热至42~~45C，加入2g活性为1：10000生化级胃蛋白酶(若活性不是1：10000，可使用活性1：3000生化级胃蛋白酶1°（不可使用非生化级胃蛋白酶），应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升20IU，并缓慢搅拌直至溶解。勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前配制。4.2乙醚。
4.3芮酮。
4.4定氮试剂：按GB/T6432中试剂及配制方法规定。采说明：
17A()AC:中指定为1：10000。
国家质量技术监督局1999-08-10批准211
2000-02-01实施
5仪器、设备
GB/T 17811-1999
5.1恒温式平转摇床\：温控范围20～50℃，水浴式或空气浴式均可，转速可调（15~～300r/min）。5.2实验室用样品粉碎机。
5.3索氏抽提器、脱脂设备：按GB/T6433中仪器、设备规定。5.4定氮仪器、设备：按GB/T6432中仪器、设备规定。5.5实验室常用仪器、设备。Www.bzxZ.net
6试样制备
取具有代表性试样，用四分法缩分至200g，然后粉碎至全部过0.90mm孔筛（20自），混匀装于密封容器，保存备用。
7测定步骤
7.1脱脂
称取1～2g试样用乙醚(4.2)脱脂（含脂肪小于1%可不脱脂，含脂肪1%~～10%建议脱脂，含脂肪大于10%则必须脱脂）。脱脂方法可参照GB/T6433中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后的样品需烘干。7.2胃蛋白酶消化
称取脱脂烘干（7.1)后的样品若干克（精确至0.0002g，含氮量约5~~80mg）于250ml带盖磨口瓶中，加150mI.新配制的并已预热至42～45℃的胃蛋白酶溶液（4.1），要确保样品完全被胃蛋白酶溶液漫湿，盖紧瓶盖，将瓶夹于恒温摇床（5.1)上，于45℃恒定搅动16h进行保温消化。7.3消化残渣的处理
从搅动器上取下磨口瓶，呈45°角放置，让残渣沉淀15min以上，随后在铺有快速滤纸的布氏漏斗上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸上，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。
当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入15mL丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸上。再用份15mL的丙酮进行洗涤，照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损地移入凯氏烧瓶中，并将凯氏烧瓶置于105℃烘箱内烘干。
7.4粗蛋白的测定
将上述（7.3)烘干的残渣按GB/T6432中方法测定粗蛋白含量（W2）。同时，称取脱脂烘干（7.1)后的样品若干克（精确至0.0002g，含氮量约5～80mg），直接按GB/T6432方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白的含量（W)。
8分析结果的计算及表示
8.1结果按式(1)计算
W,W2×100
X(%) =
式中X-试样的胃蛋白酶消化率，%，采用说明：
1)AOAC方法中，规定使用\恒温搅动器”。W
·（1）
GB/T17811—1999
W.脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量，%W,—-脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量，%。所得结果表示到小数点后一位。8.2充许差
每个试样脱脂后取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。测定结果的相对偏差按GB/T 6432 中粗蛋白测定的相对偏差允许范围。242
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