【商检行业标准(SN)】 出口茶叶中黄曲霉毒素B1检验方法

中华人民共和国进出口商品检验行业标准

SN 0339—95

出口茶叶中黄曲霉毒素 B₁ 检验方法

Method for the determination of aflatoxin B₁
in tea for export

1995-05-29发布 1995-11-01实施

中华人民共和国国家进出口商品检验局 发 布

中华人民共和国进出口商品检验行业标准

出口茶叶中黄曲霉毒素 B₁ 检验方法 SN 0339—95

Method for the determination of aflatoxin B₁
in tea for export

1 主题内容与适用范围

本标准规定了出口茶叶中黄曲霉毒素 B₁ 含量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。

本标准适用于出口茶叶中黄曲霉毒素 B₁ 含量的检验。

2 抽样和制样

2.1 检验批

以不超过 2 000 件为一检验批。

同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。

2.2 抽样数量

2.3 抽样方法

从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取 2.2 规定的件数，逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上，用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约 500 g。将所取样品充分混匀，用四分法或分样器逐步缩分出 500 g，装入洁净密封的样品筒内，加封后，标明标记，及时送实验室。

2.4 试样制备

将所取回样品全部磨碎，通过 20 目筛，混匀，均分成两份试样。装入洁净容器内，密封，标明标记。

2.5 试样保存

将试样于室温下保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。

3.2 试剂和材料

所用试剂，除特殊注明外，均为分析纯，水为重蒸馏水。

3.2·1 三氯甲烷。

3.2-2 正己烷。

3-2-3 苯。

3.2-4 甲醇，紫外光谱级。

3.2·5 乙腈；紫外光谱级。

3.2-6 三氯乙酸。

3.2-7 乙腈-水溶液（1+1）。

3.2-8 三氯甲烷-甲醇溶液（95+5）。

3·2-9 苯-乙腈溶液（98十2）。

3.2-10 黄曲霉毒素B₁标准品：纯度≥99%。

3.2·11 黄曲霉毒素B₁标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B₁标准品，以苯-乙腈溶液（3.2.9）于棕色容量瓶中，配成浓度为 $10 \mu g/mL$ 标准贮备液。根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液。

3·3 仪器和设备

3-3·1 液相色谱仪，配有荧光检测器。

3.3-2 硅胶小柱：Waters Sep-pak Silica前处理小柱或相当的硅胶前处理小柱。

3.3·3 振荡器。

3·3-4 旋转蒸发器，配有100mL具尾管的圆底烧瓶。

3.3-5 微量注射器。

3.3-6 离心管：5mL具塞磨口。

3.3·7 粉碎机。

3·3-8 滤膜：有机系用，0.45 $\mu m$。

3.3·9 微孔滤膜过滤器；有机系用，0.5 $\mu m$。

3.4 测定步骤

3-4·1 提取

称取试样5.0g（精确到0.1g）置于100mL具塞锥形烧瓶中，加入15mL三氯甲烷，于振荡器上提取 $30 \min$，然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内，并用三氯甲烷洗涤滤渣，收集滤液至约20mL。

3.4-2 净化

用旋转蒸发器将上述滤液在 $50^\circ C$水浴中浓缩至约1mL，经 $0.45 \mu m$ 滤膜过滤后，注入硅胶小柱中。用2～4 mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱，弃去流出液。然后用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液（3.2·8）以每秒钟2滴的流速洗脱，收集洗脱液于离心管中。用氮气缓缓吹干，供衍生用。

3·4-3 衍生

3.4·3·1 试样

加 $200 \mu L$正己烷和50 $\mu L$三氯乙酸于上述离心管中，盖紧磨口塞，超声振荡 $1 \min$，静置 $10 \min$。打开磨口塞，缓缓通入氮气至干。用乙腈-水溶液（1+1）（3.2·7）定容至1.0mL，超声 $1 \min$，用 $0.5 \mu m$ 滤膜过滤，滤液供液相色谱用。

3.4·3-2 标准工作溶液

取1.0mL标准工作溶液，用氮气缓缓吹干，按3.4.3·1步骤操作。

3·4·4 测定

3.4-4·1 色谱条件

a. 色谱柱：NOVA PAK C₁₈, $300 \text{mm} \times 3.9 \text{mm}$（内径）。

b. 流动相：甲醇-水溶液（42+58）。