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中华人民共和国进出口商品检验行业标准
SN 0347—95
出口饲料中棕曲霉毒素 A 的检验方法
Method for the determination of ochratoxin A
in fodders for export
| 1995-05-29发布 | 1995-11-01实施 |
中华人民共和国国家进出口商品检验局 发 布
中华人民共和国进出口商品检验行业标准
出口饲料中棕曲霉毒素 A 的检验方法 SN 0347—95
Method for the determination of ochratoxin A
in fodders for export
1 主题内容与适用范围
本标准规定了出口饲料中棕曲霉毒素 A 检验的抽样、制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于出口豆粕粉、玉米粕粉、菜籽粕粉等饲料中棕曲霉毒素 A 的检验。
2 抽样和制样
2.1 检验批
以不超过 250 t(口岸 500 t)为一检验批。
同一检验批的商品应具有相同的特征,如包装、标记、产地、规格、等级等。
2.2 抽样数量
按一批总袋数的平方根[式(1)]抽取。
a = \sqrt{N} \quad \dots\dots\dots\dots\dots\dots\dots (1)式中：$N$ ——全部袋数；
$a$ ——抽样袋数。
注：$a$ 值取整数,小数部分向前进位为整数。
2.3 抽样工具
2.3.1 金属单管抽样器：全长 $65 \sim 75\text{ cm}$，槽口长 $50 \sim 55\text{ cm}$，口宽 $1 \sim 1.8\text{ cm}$，头尖形，最大外径约 $2.5\text{ cm}$，或其他等效抽样器。
2.3.2 取样铲。
2.3.3 分样器、混样布、分样台和分样板等。
2.3.4 样品筒(袋)：可密封。
2.4 抽样方法
2.4.1 袋内抽样：按 2.2 规定的抽样袋数(扣除倒包抽样袋数)，在堆垛四周上、中、下各部位以曲线形走向，随机抽取。将扦槽向下，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后将杆槽旋转朝上，抽出扦样器，立即倒入盛样容器内。每袋抽取样品数量应基本一致。
2.4.2 倒包抽样：从堆垛的各部位随机抽取 2.2 条规定的应抽样件数的 $10\%$(不少于 3 包)，将袋口缝线全部拆开，平置于分样布或其他洁净的铺垫物上，双手紧握袋底两角提起约 $50\text{ cm}$ 高，倒拖 $1.5\text{ m}$ 长，全部倒出后，检查货物的外观、气味、有无发霉、变质等，并查看货内和货间品质是否均匀。确认情况正常后，用取样铲随机在各部位抽取样品，每包取样数量应一致。
2.4.3 大样缩分：集中袋内和倒包所取的样品，倒于分样布上，混匀，使用分样板按四分法缩分样品不少于 $4\text{ kg}$，倒入盛样容器内，加封后，标明标记并及时送实验室。
2.5 试样制备
SN 0347—95
将样品缩分到1 kg，全部磨碎，通过20目筛，混匀，均分成两份，装入洁净容器内，密封，标明标记。
2.6试样保存
将试样于5℃下避光保存。
3 测定方法
3.1方法提要
样品中的棕曲霉毒素A经提取、净化、浓缩后，以乙腈-1.5%乙酸为流动相，采用高效液相色谱仪荧光检测器进行测定，外标法定量。
3.2 试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。
- 3.2.1 乙腈。
- 3.2.2 三氯甲烷。
- 3.2.3 石油醚（沸程30～60℃）。
- 3.2.4 盐酸。
- 3.2.5 硫酸，优级纯。
- 3.2.6 乙酸。
- 3.2.7 碳酸氢钠溶液：50 g/L。称50 g碳酸氢钠溶于1 000 mL水中。
- 3.2.8 氯化钾溶液：40 g/L。称40 g氯化钾溶于1 000 mL水中。
- 3.2.9 氯化钾-硫酸溶液：在600 mL氯化钾溶液(3.2.8)中加入400 mL浓硫酸。
- 3.2.10 提取剂：乙腈-氯化钾硫酸溶液(3.2.9)(90+10)。
- 3.2.11 棕曲霉毒素A标准品：纯度≥95%。
3.2.12 棕曲霉毒素A标准贮备液：称取棕曲霉毒素A标准品(精确至0.000 1 g)配成5～10 μg/mL的乙腈溶液，作为贮备液。再用紫外分光光度法标定浓度（最大吸收峰波长333 nm，分子量403，摩尔消光系数为5 550）。
3.2.13 棕曲霉毒素A标准工作液：用乙腈将上述贮备液精确稀释成最终浓度为0.1 μg/mL的标准工作液。
上述标准溶液均需置于棕色瓶中，低温冰箱（-18℃）内保存。
3.3 仪器和设备
- 3.3.1 高效液相色谱仪并配备荧光检测器和自动进样设备。
- 3.3.2 粉碎机。
- 3.3.3 振荡器。
- 3.3.4 旋转蒸发器。
- 3.3.5 溶剂过滤器，附适用有机滤膜。
- 3.3.6 一次性滤膜0.45 μm。
- 3.3.7 全玻璃系统重蒸馏装置。
- 3.3.8 微量注射器：1 μL、10 μL、50 μL、100 μL。
3.4 测定步骤
3.4.1提取
称取约10.0 g（精确至0.1 g）试样，置于250 mL具塞锥形瓶中，加100.0 mL提取剂(3.2.10)，湿润瓶塞，盖紧，振荡30 min后，以快速定性滤纸过滤于100 mL容量瓶中，用提取剂洗涤滤渣数次，滤液最终定容至100 mL。取定容后的滤液50.0 mL于一分液漏斗内，用石油醚萃取两次（每次用量20 mL），弃去石油醚层。在乙腈-水层中加20 mL水，用三氯甲烷三次萃取毒素（用量依次为25、15、15 mL），弃去水层。将三氯甲烷溶液用5%碳酸氢钠溶液萃取三次（每次用量20 mL），收集水层合并液，并用6 mol/L
