标准简介/下载中华人民共和国进出口商品检验行业标准
SN 0296—93
出口禽肉中莫能菌素残留量检验方法
生物自显影法
Method for the determination of monensin
residues in poultry meat for export
—Bioautography method
中华人民共和国国家进出口商品检验局 发 布
中华人民共和国进出口商品检验行业标准
出口禽肉中莫能菌素残留量检验方法
生物自显影法
SN 0296—93
Method for the determination of monensin residues in poultry meat for export —Bioautography method
1 主题内容与适用范围
本标准规定了出口禽肉中莫能菌素残留量的抽样、制样和生物自显影测定法。
本标准适用于出口冻鸡中莫能菌素残留量的检验。
2 抽样和制样
2.1 检验批
以不超过2500件商品为一检验批。
同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。
2.2 抽样数量
| 批量，件 | 最低抽样数，件 |
|---|---|
| 1～25 | 1 |
| 26～100 | 5 |
| 101～250 | 10 |
| 251～500 | 15 |
| 501～1 000 | 17 |
| 1 001～2 500 | 20 |
2.3 抽样方法
按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，原始样品总量不少于2 kg，放入清洁容器内，加封后标明标记，及时送交实验室。
2.4 样品制备
从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机中捣碎均匀，充分混匀，用四分法缩分出不少于1 kg试样。装入清洁容器内，加封后标明标记。
2.5 样品保存
将试样于—18℃冷冻保存。
注：在抽样及制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
3 测定方法
3.1 方法提要
用甲醇提取肉样中莫能菌素，经四氯化碳萃取后浓缩至干，以甲醇溶解残留物，用薄层分离，再用生
SN 0296—93
物自显影法测定。
3.2 设备和材料
3.2.1 微量注射器：50 $\mu$L。
3.2.2 薄层板：硅胶，Q/YT 257-85$SS_G \times 5\text{ cm} \times 20\text{ cm}$，使用前 $110^\circ\text{C}$活化 2 h。
3.2.3 展开缸：$240\text{ mm} \times 57\text{ mm} \times 32\text{ mm}$。
3.2.4 游标卡尺，测量范围 $0 \sim 200\text{ mm}$，精度 $0.02\text{ mm}$或使用抑菌圈测量仪测量。
3.2.5 离心机：转速 $3~000\text{ r/min}$。
3.2.6 旋转浓缩器。
3.2.7 恒温培养箱，$37 \pm 1^\circ\text{C}$。
3.2.8 高压灭菌器。
3.2.9 长方形培养皿：$20\text{ cm} \times 10\text{ cm} \times 5\text{ cm}$。
3.2.10 均质器，带均质杯 $250\text{ mL}$。
3.3 试剂和培养基
3.3.1 试剂
3.3.1.1 甲醇：分析纯。
3.3.1.2 四氯化碳：分析纯。
3.3.1.3 乙酸乙酯：分析纯。
3.3.1.4 莫能菌素标准品：$960~\mu\text{g}(\text{效价})/\text{mg}$（中国兽药监察所提供）。
3.3.1.5 试验菌种：枯草杆菌(Bacillus subtilis)，菌种号 ATCC 6633（卫生部药品生物制品检定所提供）。
3.3.2 培养基
3.3.2.1 菌种用培养基(见附录 A 第 A1 章)。
3.3.2.2 生物自显影用培养基(见附录 A 第 A2 章)。
3.3.2.3 肉汤培养基(见附录 A 第 A3 章)。
3.4 测定步骤
3.4.1 工作液制备
3.4.1.1 莫能菌素标准贮备液
准确称取适量的莫能菌素标准品，用甲醇溶解配制成浓度为 $500~\mu\text{g}(\text{效价})/\text{mL}$的莫能菌素标准溶液。配制后于冰箱中保存，一周内使用。
3.4.1.2 莫能菌素标准工作液
吸取标准贮备液，用甲醇分别稀释成 $2,3,4,5,10$和 $15~\mu\text{g}(\text{效价})/\text{mL}$的标准工作标准液。以上稀释液均须当日配制。
3.4.1.3 菌种培养及芽胞菌悬浮液制备
将菌种安瓿瓶的上部消毒后敲碎，加入少量肉汤培养基，使其溶解并移至肉汤管中混匀。置 $37 \pm 1^\circ\text{C}$温箱中培养 24 h。将培养物接种于菌种培养基中，置于 $37 \pm 1^\circ\text{C}$培养一周，镜检含芽胞菌数达 85%以上，便可制备芽胞悬浮液。
用适量灭菌生理盐水冲洗菌苔，然后将该菌液转移至离心管中，充分摇匀后，于 $3~000\text{ r/min}$离心 30 min。弃去上清液，再加入同样量的灭菌生理盐水重复离心一次。弃去上清液，再加入适量灭菌生理盐水，摇匀后于 $65^\circ\text{C}$水浴中加热 30 min，然后，于 $1~000\text{ r/min}$离心 5 min，取上清液并转入灭菌试管中，即为芽胞菌悬浮液。置于冰箱中保存，可使用一个月。
3.4.2 试液制备
准确称取绞碎试样 $10\text{ g}$(精确至 $0.1\text{ g}$)于均质杯中，加入 $20\text{ mL}$甲醇，均质 2 min后，移入离心管中，于 $3~000\text{ r/min}$离心 20 min。取其上清液 $15\text{ mL}$，转入盛有 $5\text{ mL}$蒸馏水的 $250\text{ mL}$分液漏斗中，混合后加入 $10\text{ mL}$四氯化碳，充分振摇，静置分层，放出四氯化碳层于 $150\text{ mL}$茄形瓶中。用四
