【商检行业标准(SN)】 大西洋鲑三代虫病检疫技术规范

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

大西洋鲑三代虫病检疫技术规范

Quarantine protocol for infection with Gyrodactylus salaris

前 言

本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。

本标准参考了世界动物卫生组织(OIE)的《水生动物疾病诊断手册(2011版)》中2.3.03大西洋鲑三代虫病的有关章节，并结合了国内外的文献资料报道以及起草单位多年的检疫工作经验。

本标准代替SN/T 2124—2008《大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范》。

本标准与SN/T 2124—2008相比，主要技术变化如下：

• ——简化了形态学鉴定方法，不再将其作为种类判定的主要依据；
• ——删除了IGS序列PCR鉴定方法；
• ——增加大西洋鲑三代虫结构图，标注其后吸器的结构，增加虫体消化及基于钩镰的种类鉴定方法。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：吴绍强、林祥梅、刘荭、王彩霞、吕继洲、岳志芹、刘建、王建峰、张永宁、贾广乐、张旻、邓俊花。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

• ——SN/T 2124—2008。

大西洋鲑三代虫病检疫技术规范

1 范围

本标准规定了大西洋鲑三代虫病检疫时的样品采集、形态学检查、聚合酶链反应(PCR)初筛以及种类鉴定方法。

本标准适用于大西洋鲑三代虫病的检疫以及流行病学调查。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 18088 出入境动物检疫采样

3 缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ITS:扩增内部转录间隔区(internal transcribed spacer)

CO I :线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ基因(mitochondrial cytochrome C oxidase Ⅰ )

4 病原概述

大西洋鲑三代虫(Gyrodactylus salaris)是引起大西洋鲑三代虫病的一种淡水胎生寄生虫。从形态上看，大西洋鲑三代虫与同属三代虫 G. teuchis(主要寄生于褐鳟、大西洋鲑和虹鳟)和 G. thymalli(主要寄生于河鳟)十分相似,容易彼此混淆,具体情况参见附录A。

5 材料

除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯。试验用水要达到 GB/T 6682 中一级水的要求。

1. 苦味酸铵-甘油(APG)溶液:配制方法见附录B的 B.1。
2. 软组织消化液、消化终止液:配制方法见B. 2, B.3。
3. 裂解液;配制方法见 B.4。
4. 引物;浓度为 10 μmol/L,其序列如下:
   ITS-up;5'-TTTCCGTAGGTGAACCT-3'
   ITS-lp;5'-TCCTCCGCTTAGTGATA-3'
   CO I -up;5'-TAATCGGCGGGTTCGGTAA-3'
   CO I -lp;5'-GAACCATGTATCGTGTAGCA-3'
5. PCR 缓冲液、dNTP,DNA聚合酶、DNA Marker、电泳上样缓冲液等,均为商品化试剂盒中成分。
6. 电泳缓冲液:配制方法见B.5。