【商检行业标准(SN)】 大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2124—2008

大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范

Protocol of quarantine for Gyrodactylosis of Atlantic salmon（Gyrodactylus salaris）

前 言

本标准修改采用了国际兽医局(OIE)《水生动物疾病诊断手册》(2006版)的第2.1.14章。

本标准与《水生动物疾病诊断手册》(2006版)的第2.1.14章相比，主要差异如下：

• ——对聚合酶链式反应和扩增产物的电泳过程进行了优化；
• ——重新编排了格式。

本标准的附录B是规范性附录，附录A、附录C、附录D、附录E、附录F、附录G是资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：刘荭、邱杨、江育林、史秀杰、何俊强、高隆英、叶奕优。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范

1 范围

本标准规定了大西洋鲑鱼三代虫显微镜检和聚合酶链反应(PCR)检测方法。

本标准适用于大西洋鲑鱼三代虫的检疫。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682—2008,ISO 3696;1987,MOD)

3 概述

大西洋鲑鱼三代虫简介参见附录A。

4 试剂和材料

• 4.1 水：符合GB/T 6682中一级水的规格。
• 4.2 甲醛：分析纯。
• 4.3 乙醇：分析纯。
• 4.4 Taq酶：-20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。
• 4.5 dNTPs：含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10 mmol/L。
• 4.6 引物：浓度为40 μmol/L。其序列如下：
  ITS-1:5'-TTT CCG TAG GTG AAC CT-3'
  ITS-2:5'-TCC TCC GCT TAG TGA TA-3'
  扩增内部转录间隔区(ITS)中的1300 bp片段，退火温度为50℃。
  IGS-1:5'-CTG GCT ATA ATC ACG TAA GAC TGC-3'
  IGS-2:5'-AAG ATA CTC ATT TGA CTC GGT GTG-3'
  扩增基因间隔区(IGS)中的738 bp片段，退火温度为55℃。
  LA;5'-TAA-TCG-GCG-GGT-TCG-GTA-A-3'
  HA 5'-GAA-CCA-TGT-ATC-GTG-TAG-CA-3'
  扩增线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ基因中的893 bp的片段，退火温度为50℃。
• 4.7 异丙醇：分析纯，使用前预冷到-20℃。
• 4.8 矿物油：要求无DNA酶和RNA酶，用于无热盖的PCR扩增仪。
• 4.9 相对分子质量标准。
• 4.10 其他试剂见附录B。

5 器材和设备

• 5.1 解剖镜。
• 5.2 水浴锅。
• 5.3 恒温箱。