【商检行业标准(SN)】 布氏杆菌病荧光偏振试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 3506—2013

布氏杆菌病荧光偏振试验操作规程

Procedure of fluorescence polarisation assay for brucellosis

2013-03-01 发布2013-09-16 实施

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：王玉玲、梁慎顺、柴铭骏。

布氏杆菌病荧光偏振试验操作规程

1 范围

本标准规定了布氏杆菌病荧光偏振试验技术要求。

本标准适用于布氏杆菌病的检疫、筛查和监控。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB 19489 实验室生物安全通用要求

3 生物安全措施

为了保护实验室人员的安全，应由经过生物安全培训的工作人员进行布氏杆菌病的检测，应当采取预防气溶胶感染的安全措施。所有废弃物应按照 GB 19489 中的有关规定处置。

4 试验原理

溶液中的分子作随机转动。分子的大小是影响转动速率的主要因素，与其成反比关系。因而小分子较大分子转动得快。如果给分子标记上荧光色素，通过 68.5°角度的转动时间即可通过测量水平和垂直的偏振光强度来确定。因而，大分子比转动快的小分子发射更多的偏振光。

诊断布氏杆菌病时，布氏杆菌光滑型 LPS 的小分子量片段 OPS（平均 22 kD），标记上异硫氰荧光素（FITC），用作抗原。然后加到待检血清中，若有抗体，与标记抗原结合后就会降低其转动速度，用荧光偏振仪器测定出偏振值，通过偏振值判定样品的阴、阳性。

5 试剂和材料

1. 阳性对照：布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂。
2. 阴性对照：布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂。
3. 25×浓缩的反应缓冲液；布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂。
4. 结合物：标记有异硫氰荧光素的 O 型多糖（OPS）抗原，布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂。
5. 96 孔黑色半微量底板。
6. 除另有规定，本方法试验用水应使用符合 GB/T 6682 规定的三级水。

6 仪器和设备

1. 荧光偏振仪。