【商检行业标准(SN)】 自然杀伤细胞活性试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2242—2008

自然杀伤细胞活性试验

Natural killer cell activity assay

2008-11-18 发布2009-06-01 实施

前 言

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。

本标准由中国国家认证认可监督管理委员会归口。

本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。

本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所、江南大学和天津市检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：吕刚、张园、赵黎华、冯智劼、于智睿、赵琢。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

自然杀伤细胞活性试验

1 范围

本规范规定了自然杀伤细胞活性试验的测定方法、试验数据和评价。

本规范适用于检测实验动物一次或多次接触化学物质后，对 NK 细胞活性的影响。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB 14924.1 实验动物 配合饲料通用质量标准

GB 14925 实验动物 环境及设施

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1 自然杀伤细胞 natural killer cell, NK

在无抗原刺激下能够杀伤多种有核细胞的淋巴细胞，NK 细胞是一种能表达“天然细胞毒作用”的独特细胞。NK 细胞存在于血液和淋巴组织中，也存在于无胸腺个体的血液和淋巴组织中，它是抗自发性肿瘤细胞和病毒感染细胞的第一道防线，在免疫监视中起重要作用。

4 测定方法

4.1 乳酸脱氢酶（LDH）测定法

4.1.1 材料及仪器

靶细胞 K562 或 YAC-1、Hanks 液、RPMI1640 培养液、青霉素、链霉素、谷胺酰胺、二巯基乙醇、乳酸锂或 L 乳酸钠、硝基氯化四氮唑（INT）、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）、氧化辅酶 I（NAD）、0.2 mol/L Tris-HCl 缓冲液、可调微量加样器、96 孔平底板、CO₂ 培养箱、酶标仪。LDH 基质液的配置见表 1。

表 1 LDH 基质液的配制

4.1.2 操作方法

4.1.2.1 动物选择

选择健康 6 周龄～8 周龄，雌性 CBA、C3H 或 BALB/C 小鼠，试验前应在动物室适应 7d。试验动物的饲养和环境设施应符合 GB 14924.1 和 GB 14925。