【商检行业标准(SN)】 猪水疱病病毒微量血清中和试验

猪水疱病病毒微量血清中和试验

Micro-serum neutralization test for swine vesicular disease virus

前 言

本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：杨家、潘文波、廖秀云、冯家望。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

猪水泡病病毒微量血清中和试验

1 范围

本标准规定了猪水泡病病毒微量血清中和试验方法。

本标准适用于猪水泡病病毒中和抗体的检测。

2 缩略语

下列缩略语适用于本标准：

• 2.1 CPE:致细胞病变作用。
• 2.2 TCID₅₀:半数细胞感染量。
• 2.3 SVD:猪水泡病。

3 原理

特异性的血清中和抗体与病毒结合后，能使病毒失去对敏感细胞的感染能力，从而阻止病毒的繁殖。这一反应不仅表现为一种病毒只能被相应的免疫血清所中和，而且还表现在中和一定量的病毒，必须有一定效价的免疫血清。本标准规定的中和试验是以定量病毒稀释血清为基础，当血清能阻止定量病毒50%致细胞病变型能力时，其血清的稀释度即为其效价。因而本中和试验是一种定量测定猪水泡病血清抗体的方法。

4 试剂和材料

• 4.1本标准所用试剂配制见附录A。
• 4.2本标准试剂除特殊规定外，均指分析纯试剂。
• 4.3本标准所用试剂、玻璃器皿除有特殊规定外，均需高压灭菌。
• 4.4病毒：用经蚀斑法纯化并经血清学鉴定的猪水泡病病毒作为标准病毒。
• 4.5标准血清：标准阳性血清采用无SVD病毒抗体的猪血清，标准强阳性和弱阳性血清采用SVD病毒感染发病后康复的猪血清。
• 4.6细胞系：PK-Rs-2传代细胞系。
• 4.7细胞培养液：含10%胎牛血清（经56℃，30 min灭能）及抗生素的细胞培养液。
• 4.8细胞维持液：含2%胎牛血清（经56℃，30 min灭能）及抗生素的细胞维持液。
• 4.9细胞分散液。
• 4.10固定液。
• 4.11染色液。

5 器械和设备

• 5.1二氧化碳培养箱、微量振荡器、倒置显微镜、冰箱、超声波细胞破碎仪。
• 5.2100 mL细胞培养瓶，96孔微量细胞培养板，吸头，多道可移液器，单道可调移液器。