【团体标准】 驴肉及其制品中马源性成分测定实时荧光PCR法

ICS 67.120
B 40

团 体 标 准

T/CAAA 060—2021

驴肉及其制品中马源性成分测定
实时荧光 PCR 法

Identification of horse derived materials in donkey meat and products—Real-time PCR method

中国畜牧业协会  发布

T/CAAA 060—2021

前 言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国畜牧业协会提出并归口。

本文件起草单位：山东省农业科学院生物技术研究中心、山东畜牧兽医职业学院、聊城大学、山东东阿国胶堂阿胶药业有限公司、山东东阿天龙食品有限公司、内蒙古阿鲁科尔沁旗太极天驴有限公司、山东骏驰牧业有限公司、山东阿多宝矿业产业科技有限公司、禹城市惠民农业科技有限公司。

本文件主要起草人：胡悦、张全芳、范阳阳、刘国霞、陈雪燕、刘艳艳、谭晴晴、杨雪、岳鸣鸣、郑艳玲、杜晓亮、提金凤、彭晓蓓、刘桂芹、李兰杰、李艳、卢宗福、钟勇、李建军、马骁、司家男、董书光、孟朝红、贾涛、王长法、步迅。

驴肉及其制品中马源性成分测定实时荧光 PCR 法

1 范围

本文件规定了驴肉及其制品中马源性成分测定的原理、试剂或材料、仪器设备、样品、DNA提取实时荧光PCR反应、数据处理和防止交叉污染。

本文件适用于驴生鲜肉、冷冻肉及肉制品中马源性成分的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

• GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
• GB/T 9695.19 肉与肉制品取样方法
• GB/T 27403 实验室质量控制规则食品分子生物学检测

3 术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理

根据驴、马ckm基因的序列差异，设计通用引物及不同荧光信号的驴、马特异性探针，采用TaqMan实时荧光PCR技术进行扩增，根据荧光信号及循环阈值，判定动物源性成分。

5 试剂或材料

5.1 试剂。除非另有规定外，仅适用分析纯试剂。

5.2 水。应符合GB/T 6682中一级水的要求。

5.3 生理盐水。称取29.2 g NaCl溶解于80.0 mL水中，加水定容至100.0 mL，103.4 kPa蒸汽压(121 ℃)灭菌20 min，室温保存待用。

5.4 动物组织DNA提取试剂盒。

5.5 实时荧光PCR检测试剂盒。TaqMan探针法。

5.6 实时荧光PCR引物和探针。实时荧光PCR引物和探针序列见附录A，目的基因扩增靶标参考序列见附录B。

5.7 内参质粒。利用水将人工合成的外源质粒稀释至2.0×10^-4 ng/μL，作为内参质粒，序列参见附录B。

6 仪器设备

6.1 荧光定量PCR仪。3通道以上，应能检测JOE、FAM及CY5荧光。

6.2 紫外分光光度计。

6.3 分析天平。感量0.01 mg。

6.4 离心机。最大转速不应小于13 000 r/min。

6.5 水浴锅。

6.6 高压灭菌锅。

7 样品