【国家标准】 饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS65.120
CCSB46
中华人民共和国国家标准　
GB/T42956—2023
饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of tylosin, tylvalosin and tilmicosin in feeds-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry2023-08-06发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2024-03-01实施
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则起草。
GB/T429562023
第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。本文件起草单位：四川省饲料工作总站、四川省中安检测有限公司、新疆维吾尔自治区兽药饲料监察所。
本文件主要起草人：程传民、李云、许艳丽、王宇萍、达列亚、冯波、蒋福霖、程大顺、赵立军、张静、柏雪、宋彦琪、叶绿、樊淑娜、邝婷婷、徐定慧、陈飞、何利梅、夏子晴。I
1范围
饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T42956—2023
本文件描述了饲料中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中泰乐菌索、泰万菌素和替米考星的测定。
本文件的方法检出限为0.02mg/kg，定量限为0.05mg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195
3术语和定义
动物饲料试样的制备
本文件没有需要界定的术语和定义。4原理
试样中的待测物用乙溶液提取，经混合型阳离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。
5试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1水：GB/T6682，一级。
5.2乙：色谱纯。
5.3甲酸：色谱纯。bzxz.net
5.450%乙腈溶液：取500mL乙腈，加水稀释至1000mL，混匀。5.50.1%甲酸溶液：取1mL甲酸（5.3），加水稀释至1000mL，混匀。5.6磷酸二氢钾溶液（0.1mol/L)：称取磷酸二氢钾13.61g，加水溶解并稀释至1000mL，混匀。5.75%氨化甲醇：取氨水5mL，加甲醇稀释至100mL，混匀。5.8标准贮备溶液（1mg/mL）：称取泰乐菌素A（CAS号：1401-69-0，含量≥98.0%）、泰万菌素（CAS号：63409-12-1，含量≥97.0%）、替米考星标准品（CAS号：108050-54-0，含量≥94.0%）各10mg（精确至0.01mg），用甲醇溶解，分别转移至10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀。一18℃以下保存，有1
GB/T42956—2023
效期3个月。
注：如所用标准品为相应的盐，折算成有效成分。5.9混合标准中间溶液（10μg/mL）：准确移取标准贮备溶液（5.8)各1mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释、定容，混匀。一18℃以下保存，有效期3个月。5.10内标贮备溶液（0.5mg/mL）：称取替米考星-dg（CAS号：108050-54-0，含量≥98.0%）5mg（精确至0.01mg），用甲醇溶解，转移至10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀。一18℃以下保存，有效期3个月。
5.11内标工作溶液（5ug/mL）：准确移取1mL内标贮备溶液（5.10）于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，混匀。一18℃以下保存，有效期3个且5.12混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（5.9）和内标工作溶液（5.11)于容量瓶中，用5%氨化甲醇（5.7）稀释定容，配制成质量浓度分别为0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/ml和内标质量浓度均为5ng/mL的混合标准系列溶液。临用现配。5.13混合型阳离子交换固相萃取柱：60mg/3mL，或性能相当者。5.14微孔滤膜.0.22
6仪器设备
um，有机系。
6.1液相色谱串联质谱仪配毛喷雾6.2分析天平精度为0.1
n和lmg
6.3旋涡混合器。
6.4振荡器。
6.5离心机：转速不低于
6.6固相萃取装置。
7样品
按GB/T20195制备试样。取样品至少200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充分混匀，装入密闭容器中备用。
8试验步骤
8.1提取
平行做两份试验。称取试样2g（精确至0.1mg）于50mL离心管中，准确加入内标工作溶液（5.11)100μL、50%乙睛溶液（5.4)10mL，300r/min振荡提取15min，7000r/min离心5min，移取上清液至另一50mL离心管。残渣用50%乙腈溶液（5.4)10mL重复提取一次，合并两次上清液，混勾。准确移取混合上清液1mL，加入磷酸二氢钾溶液（5.6)5mL，混匀，备用。8.2净化
混合型阳离子交换固相萃取柱（5.13)依次用甲醇3mL、水3mL和磷酸二氢钾溶液（5.6)3mL活化。取全部备用液（8.1)过柱，流速小于2mL/min。依次用磷酸二氢钾溶液（5.6）和水各3mL淋洗，抽干。准确移取5%氨化甲醇（5.7)5mL洗脱，收集洗脱液，混匀，用微孔滤膜（5.14)过滤，作为试样溶液，待测。
8.3测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
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色谱柱：C1s色谱柱，柱长50mm，内径2.1mm，粒径1.8um，或性能相当者；柱温：35℃；
进样量：5uL；
流动相：A相为乙腈，B相为0.1%甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序
8.3.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
mL/min
a）电离方式：电喷雾电离正离手模式b)
检测方式：多反应蓝测MRM
毛细管电压：3.5
离子源温度：350
干燥气流速：L/min：
雾化气压力：351
si(241kPa)
化合物多反应监测（MRM)离子对、定量离表2
子对、锥孔电压及碰撞能量见表2。B
化合物多反应监测(MRM)离子对定量离子对、锥孔电压及碰撞能量的参考值化合物名称
泰乐菌素A
泰万菌素
替米考星
替米考星-d;
监测离子对
916.5>772.5
916.5>174.2
1042.5>814.4
1042.5>174.1
869.5>696.3
869.5>174.2
872.6>696.5
定量离子对
916.5>174.2
1042.5>174.1
869.5>174.2
872.6>696.5
锥孔电压
碰撞能量
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