【其他行业标准】 大豆食品中异黄酮含量的测定

ICS 67.060
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5397—2019
大豆食品中异黄酮含量的测定
Determination of soybean isoflavones in soyfoods2019-08-02发布
割涂层查真伪
中华人民共和国工业和信息化部发布
2020-01-01实施
品标准
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由中国食品工业协会提出并归口。QB/T5397—2019
本标准起草单位：苏州金记食品有限公司、中国食品工业协会豆制品专业委员会、国家大豆产业技术研发中心加工研究室、吉林农业大学食品科学与工程学院、四川省食品药品检验检测院、祖名豆制品股份有限公司、上海清美绿色食品（集团）有限公司、深圳市福荫食品集团有限公司、山东禹王生态食业有限公司、长春维石检测技术服务有限公司、上海市豆制品行业协会、合肥市豆制品行业协会。本标准主要起草人：吴月芳、金兴仓、于寒松、曾祥博、岳清洪、韩晓华、张凡芝、杨金平、刘军、王猛张建秋、张之斌、孙玉坤。
1范围
大豆食品中异黄酮含量的测定
QB/T5397—2019
本标准规定了大豆食品中异黄酮（大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、黄豆黄素、黄豆黄苷)含量测定的高效液相色谱法。
本标准适用于原料大豆及豆浆、豆腐、腐乳等大豆食品中异黄酮含量的测定本标准测试方法的线性范围：0.5μg/mL～100μg/mL。本标准测试方法的检出限：2.5μg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
大豆异黄酮
同soybeanisoflavones
大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，以异黄酮葡萄糖苷和相应苷元形式存在的物质，包括大豆苷（Daidzin）、染料木苷（Genistin）、大豆苷元（Daidzein）、染料木素（Genistein）、黄豆黄素（Glycitein）、黄豆黄苷（Glycitin）。其分子式如下：大豆苷（C2H2.O。）、染料木苷（C2H2O1o）、大豆苷元（CisH1oO）、染料木素（C1sH1。O）、黄豆黄素（C16H12Os）、黄豆黄苷（C22H22O1o）。4原理
样品经过乙腈-水溶液振荡提取，提取液经离心、浓缩后用甲醇溶液（体积分数80%）定容、过滤，经高效液相色谱分析（Ci8柱分离），在260nm条件下测定，依据保留时间定性，用外标法定量。5试剂和材料
本标准使用符合GB/T6682一2008规定的一级水。除另有规定仅使用分析纯试剂。5.1试剂
5.1.1甲醇（Methanol,CH.OH)：色谱纯。5.1.2乙腈（Acetonitrile，C,H.N)：色谱纯。3二甲基亚砜（DMSO,CzH.OS)。
冰醋酸（AceticAcidCH：COOH)。5.1.4
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5.2试剂配制
甲醇溶液（体积分数80%）：取800mL甲醇（5.1.1)用水定容至1000mL，混匀。5.2.1
二甲基亚矾-乙睛-甲醇溶液（1：2：2体积比）：取10mL二甲基亚矾（5.1.3）和20mL乙（5.1.2）5.2.2
用80%甲醇（5.2.1)定容至50mL，混匀。5.2.3乙酸溶液（体积分数0.1%）：取1mL冰醋酸（5.1.4)用水定容至1000mL，混匀。5.2.4
乙酸乙腈溶液（体积分数0.1%）：取1mL冰醋酸（5.1.4），用乙（5.1.2）定容至1000mL，混匀。5.3标准品
大豆苷元（Daidzein，CisHi。OCAS号：486-66-8，纯度：≥98%）。染料木素（Genistein.CnsHi.Os，CAS号446-72-0.纯度：≥98%黄豆黄素（Glycitein,Ci6HaOs，CAS号：40957-83-3,纯度：≥98%）大豆苷（Daidzin，C2HO，，CAS号：552-66-9，纯度：≥98%）。染料木苷（Genistin，C2H2。O1oCAS号：529-59-9，纯度：≥98%）。5.3.5
黄豆黄香（Glyeitin，C22H22O1o，CAS号：40246-10-4，纯度：≥98%）。5.4标准品配制
豆异黄酮标准储备浴液便用分
76.2芬别准面称取6种大支异黄标准品5mg分别置于容量瓶中，加入5mL
单基亚码艺睛-思解溶液（5.2.2）充分溶解配制成1mg/ml的单标标准有效斯个月
C避光保存
储备液。
大豆异黄酮单标棕灌希简溶液：分熟5.4.2
数为80%的甲醇溶液（5.
移取0.5m
豆异黄酮标准储备溶液（5.4.1）加入体积分mL容中定容
购，配制械
mg/mL单标标准中间溶液。
C冷藏避光保存，在效斯
至月。
0℃～4
主作溶液芬别吸取尖豆异黄酮标准循备溶液（1)0.0025mL、0.005mL、大豆异黄酮混合标准
、0.05ml.0.1ml01m益2m.童于ml容瓶中，用体积分数为80%的0.025mL、
甲醇溶液（5.21）定容，分别配制成客组分浓度丹mm5g/mL10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40g/ml.50μg/mL、100μg/mL系列大豆异黄酮混合标准工作液用以制作标准曲线。0℃~4℃冷藏避光保存，有效期1周。仪器和设备
高效液相色谱仪：配有四元梯度泵系统、柱温箱、紫外检测器、色谱工作站。分析天平：感量0.00001g和0.0001g。旋转蒸发仪。
恒温摇床。
冷冻离心机：转速不低于8000r/min。样品筛：60目。
超声波振荡器。
破壁料理机。
组织粉碎机。
滤膜：孔径为0.22μm的有机滤膜。真空冷冻干燥机。免费标准bzxz.net
液相进样瓶：带有预开口聚四氟乙烯盖的棕色瓶，1.5mL。7试样制备与保存
7.1试样制备
7.1.1大豆
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取样品200g～500g，用组织粉碎机（6.9）粉碎，使其全部通过样品筛（6.6），混匀，装人洁净而干燥的容器密封备用。
7.1.2豆浆
取100mL豆浆通过真空冷冻干燥机（6.11制成粉未并记录冻干粉质量，装入洁净而干燥的容器，密封备用。
7.1.3豆腐（干）、腐乳等大豆食品取一定质量的豆腐或其他豆制品经真空冷冻干燥机（6.11)制成粉末并记录冻东干粉质量，装入洁净而干燥的容器，密封备用。
7.2试样保
试样于4℃L
以下避光保
8操作步
8.1提取
准确称取试样o.1g~1精确至
0.5mL~5ml水，密封后靠券混药在率温案样备过禾
尊重博共重加人0
5mL乙腈（5.1.2）、
福温屋康靠300r/min的速度振荡提取2h。然后以10000r/min的速度，在25℃下离心5min，取上清液过滤。35℃旋转蒸发仪（6.3)浓缩至干，向其中加入5ml～10mL甲醇溶液（体积分数80%)以溶解干物质，通过针头式过滤器过0.22μm有机相滤膜（6.10)过滤上机待测同时，做试剂空白。
色谱参考条件
色谱参考条件如下：
色谱柱：C18柱（5μm、4.6mmX250mm），或相当型号色谱柱。b)
流动相A：含有0.1%乙酸溶液（5.2.3）。流动相B：含有0.1%乙酸乙溶液（5.2.4）。c)
流速：1.2mL/min。
柱温：35℃。
检测波长：260nm。
进样量：10μL。
梯度洗脱条件：见表1。
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时间/min
8.3测定
8.3.1定性
表1梯度洗脱条件
0.1%乙酸溶液/mL
0.1%乙酸乙腈溶液/mL
分别将大豆异黄酮单标标准中间溶液（5.4.2)按色谱参考条件（8.2)进行高效液相色谱测定，依据单一标准品的保留时间，对大豆异黄酮各组分进行定性分析，定性色谱图参照附录A。8.3.2定量
标准曲线制作
将不同浓度梯度大豆异黄酮混合标准工作溶液（5.4.3)按色谱参考条件（8.2)进行高效液相色谱测定，绘制以峰面积为纵坐标、各大豆异黄酮单体浓度为横坐标的标准曲线。8.3.2.2
样品分析
将已进行前处理的试样(7.1)按色谱参考条件（8.2)高效液相色谱测定，保证样品溶液各异黄酮单体浓度总和在标准曲线检出范围内，若超出线性范围则需要对样品进行适当稀释，得到检测结果后，对应标准曲线得到原样品溶液中各异黄酮单体的浓度。结果与计算
试样中大豆异黄酮各组分含量
按式(1)计算试样中大豆异黄酮各组分含量：(A.-b)×V×a
式中：
试样中各异黄酮单体含量，单位为微克每克（μg/g)；试样样品中各异黄酮单体的峰面积值；标准线性回归方程中的截距；
（1）
蒸干后重新溶解的体积，单位为毫升（mL）；稀释倍数；
标准品线性回归方程中的斜率，单位为毫升每微克（mL/ug)；样品取样质量，单位为克（g）。m
结果保留3位有效数字。
试样中大豆异黄酮总含量
试样中大豆异黄酮总含量按式(2)计算：X总=ZX
式中：
X总——试样中总大豆异黄酮含量，单位为微克每克（μg/g)；X；—试样中各异黄酮单体含量，单位为微克每克（μg/g）。结果保留3位有效数字。
9.3样品中大豆异黄酮含量
液体样品中大豆异黄酮含量按式(3)计算：X总Xm;
式中：
液体样品中总大豆异黄酮含量，单位为微克每毫升（μg/mL）；试样中总大豆异黄酮含量，单位为微克每克（μug/g）；液体样品冻干后质量，单位为克（g）；液体样品冻干时体积，单位为毫升（mL）。结果保留3位有效数字。
固体或半固体样品中大豆异黄酮含量按式（4)计算：X总Xm
式中：
精密度
固体或半固体样品中总大豆异黄酮含量，单位为微克每克（μg/g）；试样中总大豆异黄酮含量，单位为微克每克（ug/g)；固体或半固体样品冻干后质量，单位为克（g)；固体或半固体样品冻干时质量，单位为克（g）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的差值不应超过算数平均值的10%。QB/T5397—2019
（2）
·（4）
QB/T5397—2019
附录A
（资料性附录）
标准样品色谱图
大豆异黄酮标准样品的HPLC色谱图见图A.1。500
说明：
大豆苷（Daidzin）；
黄豆黄苷（Glycitin)；
染料木苷（Genistin)；
大豆昔元（Daidzein)；
黄豆黄素（Glycitein）；
染料木素（Genistein)。
保留时间/min
图A.1大豆异黄酮标准样品的HPLC色谱图40
QB/T5397-2019
专业食品标准
中华人养督有
行业标
大豆食品中异黄酮含量的测定
中国标准出版社出版发行
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印张0.75字数14千字
开本880×12301/16
2020年3月第一版
2020年3月第一次印刷
书号：155066·2-34898定价16.00元由本社发行中心调换
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