【YY医药标准】 眼科光学接触镜护理产品 第7部分:生物学评价试验方法

ICS11.040.70
中华人民共和国医药行业标准
YY0719.7--2011
眼科光学
接触镜护理产品
第7部分：生物学评价试验方法
Ophthalmic optics-Contact lens careproducts-Part 7.Biological evaluation test methods2011-12-31发布
国家食品药品监督管理局
2013-06-01实施
接触镜护理产品》标准分为7个部分：YY0719《眼科光学
第1部分：术语；
第2部分：基本要求；
第3部分：微生物要求和试验方法及接触镜护理系统：第4部分：抗微生物防腐有效性试验及测定抛弃日期指南；第5部分：接触镜和接触镜护理产品物理相容性的测定；第6部分：有效期测定指南；
第7部分：生物学评价试验方法。本部分为YY0719的第7部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草YY0719.7—2011
本部分给出的生物学试验方法是根据GB/T16886.1《医疗器械生物学评价第1部分：评价与试验》的基本原则以及接触镜护理产品的特性，针对接触镜护理产品的生物学评价需求制定而成。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由全国医用光学和仪器标准化分技术委员会（SAC/TC103/SC1)提出并归口。本部分起草单位：国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心、浙江省医疗器械检验所。
本部分主要起草人：陈献花、姜晓路、方丽、李雪来。1范围
眼科光学接触镜护理产品
第7部分：生物学评价试验方法
YY0719的本部分规定了接触镜护理产品的生物学试验方法。本部分适用于接触镜护理产品。规范性引用文件
YY0719.7—2011
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。医疗器械生物学评价第1部分：评价与试验GB/T16886.1
GB/T16886.5
GB/T16886.10
医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验医疗器械生物学评价第10部分：刺激与迟发型超敏反应试验GB/T16886.11
医疗器械生物学评价第11部分：全身毒性试验GB/T16886.12
医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品GB/T28538眼科光学接触镜和接触镜护理产品免眼相容性研究试验GB/T28539
接触镜和接触镜护理产品防腐剂的摄入和释放的测定指南眼科光学
眼科光学
接触镜护理产品第1部分：术语
眼科光学接触镜护理产品第2部分基本要求3细胞毒性试验
3.1目的
本试验是评价接触镜护理产品，和（或）其附着于接触镜或渗人到接触镜中的残留物的潜在毒性。3.2试剂
小牛血清（胎牛血清）、细胞培养液（细胞生长液、细胞维持液、不含牛血清的细胞培养液）、胰酶溶液、苯酚、无Ca2+、Mg2+的磷酸盐缓冲液、青霉素、硫酸链霉素、组织培养用琼脂、双倍细胞培养液。所有试剂经过适宜的方法进行灭菌。3.3主要设备和器具
超净工作台、二氧化碳培养箱、压力蒸汽灭菌器、电热干燥箱、恒温水浴箱、冰箱、倒置显微镜、光学显微镜、移液管、细胞培养板（皿）、细胞培养瓶、一次性细菌过滤器等。所有器血经过适宜的方法进行灭菌。所有器血要符合组织培养级别的要求，并适用于哺乳动物细胞培养。3.4细胞株
可采用ATCCCCL1［NCTCclone929（小鼠成纤维细胞）或其他适宜的细胞株，试验采用传代48h～72h，形态良好，生长旺盛的细胞。1
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3.5对照样品
3.5.1阴性对照：无Ca2+、Mg2+的磷酸盐缓冲液。3.5.2阳性对照：5%的苯酚溶液或其他具有细胞毒性的物质。3.6供试液制备
直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液。3.6.1
3.6.2间接接触人眼的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最终接触人体的产物作为供试液。
试验前准备
将已培养48h～72h形态良好生长旺盛的细胞制成细胞悬液（可利用胰酶、乙二胺四乙酸二钠或胰酶十乙二胺四乙酸二钠的消化液），细胞计数测得细胞悬液浓度，并按试验方法要求配制成一定浓度的细胞悬液。
3.8试验方法
3.8.1制备
一琼脂扩散法
个/mL的细胞悬液。
3.8.2将细胞悬滤加到g60mm培养血中，每个
5mL，其6个培养。
培养血
3.8.3将所有培养Ⅲ放入5%
CO,培养箱（含体积分数
培养24h，细胞长成单层。
二氧化碳气体下同）（371）C饱和湿度3.8.4弃去原培养液，在每个培养血中加入4.5mL的”琼脂媒质”培养箱中培养约30min，
使其凝固。璟脂媒质为双倍细胞培养基与0.5%组织培养用琼脂等量混合
注：在混合后和加人到培养血中不得凝固，同时避免高温使培养基中的蛋白质变性或氨基酸降解等间题发生。人4.5mL新配制的中性红活性染色液（或其他细胞清性染色液），3.8.5在凝固的琼脂表面加
（37士1）℃下在暗处培美0.
3.8.6用直径0.9cm的滤膜吸取试验液100μL，轻轻将滤膜放在琼脂表面，限性对照组、阴性对照组和供试液组各平行操作2血。
3.8.7在5%CO，培养箱中（371）℃饱和湿度培养24h～48h。3.8.8结果分析：在倒置显微镜下观察阳性对照组、阴性对照组和供试液组滤膜正下方和周围细胞的生长状况以及染料脱色情况。用表1一表3评分系统表进行评分表1评分系统（区域指数）
区域指数（Z)
区域描述
在样品的周围和下面没有能观察的区域区域限定在样品正下方
样品周围区域<5mm
样品周围区域>5mm，≤10mm
样品周围区域>10mm，但没有覆盖整个平板区域覆盖整个平板
脱色区域中细胞溶解（如果有）的程度可用表2来评价：2
溶解指数(L)
表2评分系统（溶解指数）
溶解程度描述
没有观察到溶解
达到20%的细胞溶解
细胞溶解在20%~40%之间（含40%）细胞溶解在40%~60%之间（含60%）细胞溶解在60%~80%之间（含80%）超过80%的细胞溶解
表3评分系统（反应程度）
反应程度
无细胞毒性
轻微细胞毒性
中度细胞毒性
重度细胞毒性
：如果反应系数0.5/0.5是从两个1/1和0/0的结果平均获得，则试验需重做注：其他可参照的试验方法见附录A。结果评价
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反应指数R(Z/L)
0/0~0.5/0.5
1/1~1.5/1.5
2/2~3/3
4/4~5/5
接触镜护理产品按其预期用途选择不同试验方法并进行相应的结果评价。3.10
试验报告
试验报告应给出下列信息：
供试品名称；
生产批号或生产日期；
供试液制备方法：
试验用培养基、细胞株和阴性、阳性及其他对照品；试验步骤；
细胞形态描述、测定数据和其他情况。皮肤刺激试验
本试验是对接触镜护理产品在试验条件下产生皮肤刺激反应的潜在性做出评价。注1：基于动物福利要求，依据GB/T16886.2，供试品若存在皮肤刺激性，则不再进行眼刺激试验注2：如制造商使用了与目前市售等同或相类似的接触镜护理产品，可直接进行眼刺激试验。4.2主要设备和器具
动物天平、注射器。
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4.3试验动物准备
按GB/T16886.10的规定。
4.4供试液制备
4.4.1直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液。4.4.2间接接触眼睛的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最终接触人体的产物作为供试液。试验步骤和结果评价
按GB/T16886.10中的单次接触试验方法进行操作和评价。4.6试验报告
试验报告中应给出下列信息：
a）试验样品
名称；
生产批毒或生
产日期
试验动物的述；
d）供试液制备：
e）试验步骤
观察记录
g）结果评价
5急性眼刺赢试验
5.1目的
本试验是评价接触童护理产品引起眼部刺激的潜在性。注1：如配方中含有已知的眼刺激成分，可不进行本试验。在这种情况下，可在产品标责中对展刺激性进行适当的警告，以替代本试验的实施
注2：如制造商使用了自前市售的接触镜护理产品中未使用过的新防腐剂或活性成分及化学成分，则需依据GB/T28538进行免眼相容量研究试验
5.2试验动物准备
按GB/T16886.10的规定。
5.3供试液制备
5.3.1直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液，5.3.2间接接触眼晴的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最终接触人体的产物作为供试液。
5.4试验步骤和结果评价
按GB/T16886.10中的急性接触试验方法进行操作和评价。5.5试验报告
试验报告中应给出下列信息：
试验样品名称；
生产批号或生产日期；
试验动物的描述：
供试液制备；
试验步骤；
观察记录；
结果评价。
急性经口毒性
本试验是评价接触镜护理产品在单次口服剂量时的经口毒性的潜在性。6.2主要设备和器具
注射器、灌胃针动物天平
试验动物准备
试验采用健康、初成年小白鼠，同一一品系并同
小白鼠适应实验
室环境。
每组试验用小白鼠10
供试液制备
堆雄各半
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来源，唯鼠无孕，体重17g23。不在试验前使
5只，并做好标记。
每个笼内饲养同性别的小鼠
6.4.1直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液。间接接触眼晴的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最终6.4.2
接触人体的产物作为供试液。
试验步骤
禁水。
用连有灌胃针的注射器或其他适宜的灌胃法进行灌胃。灌胃前需禁食4h8h，禁食期间不灌胃剂量为25mL/kg。
灌胃前、灌胃后7d和14d，称量动物体重。6.5.4
灌胃后每天观察动物毒性反应，毒性反应分级见表4。表4毒性反应分级
反应程度
未见毒性反应
轻微运动机能减退，呼吸困难或腹部刺激明显腹部刺激，呼吸困难，运动机能减退，眼险下垂，腹泻虚脱、发绀、震颤，严重的腹泻，眼脸下垂或呼吸困难死亡
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6.6结果评价
6.6.1在试验观察期间，所有试验动物均未见毒性反应，则试验样品无急性全身毒性反应6.6.2如两只或两只以上出现重度或死亡，或3只及3只以上出现体重下降超过10%，则试验样品有急性全身毒性反应。
6.6.3试验动物仅显示轻微反应，且不多于一只动物出现毒性反应症状为重度或死亡，应重复试验。重复试验结果符合6.6.1要求，则试验样品无急性全身毒性反应。6.7试验报告
试验报告中应给出下列信息：
a）试验样品名称；
生产批号或生产日期；
试验动物的描述；
d）供试液制备；
试验步骤；
f）观察记录；
g）结果评价。
7皮肤致敏试验
7.1目的
本试验是采用接触镜护理产品的供试液与豚鼠皮肤接触，以评价接触镜护理产品在试验条件下引发皮肤致敏反应的潜在性。
7.2试剂bzxz.net
质量浓度为9g/L的氯化钠注射液、二硝基氟苯（DNCB）、十二烷基硫酸钠、弗氏完全佐剂。7.3主要设备和器具
压力蒸汽灭菌器、电剃刀、注射器、动物天平。7.4试验动物准备
按GB/T16886.10的规定。
7.5对照样品
质量浓度为9g/L的氯化钠注射液。7.6供试液制备
7.6.1直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液7.6.2间接接触眼睛的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最终接触人体的产物作为供试液。
7.7试验步骤和结果评价
按GB/T16886.10规定的“迟发型超敏反应最大剂量试验\进行操作和评价。6
7.8试验报告
试验报告中应给出下列信息：
试验样品名称；
生产批号或生产日期；
试验动物的描述；
供试液制备；
试验步骤；
观察记录；
结果评价。
8免眼相容性研究试验和防腐剂的摄入和释放的测定按照GB/T2538号GB/T28539进行。YY0719.7—2011
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A.1显微镜观察法
附录A
（资料性附录）
体外细胞毒性试验方法
A.1.1制备1X105个/mL的细胞悬液A.1.2将细胞悬液加到$35mm培养血中，每个培养Ⅲ2.5mL。A.1.3将所有培养血放人CO，培养箱（37士1）℃培养24h，细胞长成单层A.1.4弃去原培养液，分别加人阳性对照液、适宜浓度或浓度梯度的阴性对照液和与阴性对照组一致浓度的供试液，各平行操作2皿。A.1.5在COz培养箱（37士1）℃继续培养24h～48h。A.1.6结果分析：每组进行细胞形态学观察并作文字记录。阴性对照组应为0级反应，阳性对照组至少为3级反应。用表A.1分级系统进行评分。表A.1分级系统
反应程度
A.2增殖度法
反应观察
细胞形态正常，贴壁生长良好，胞浆内有离散颗粒，无细胞溶解至多20%的细胞呈圆形，疏松贴壁，无胞浆内颗粒，偶细胞溶解至多50%的细胞呈圆形，无胞浆内颗粒，明显可见细胞溶解和细胞间空间至多70%的细胞呈圆形或溶解
细胞层几乎完全破坏
制备1×10*个/mL的细胞悬液。
A.2.2在96孔细胞培养板中分别加人细胞悬液100μL，设空白对照（无细胞）、阴性对照、阳性对照和试验组，每组各设至少6孔，置CO培养箱（37士1）℃培养24h。A.2.3培养24h后弃去原培养液，空白对照组加人新鲜培养液，阴性对照组加人适宜浓度或浓度梯度的阴性对照品供试液、阳性对照组加入阳性对照溶液或阳性对照品供试液，试验组加人与阴性对照组一致浓度的供试液，每孔100μL置COz培养箱（37士1）℃培养24h～72h。A.2.4细胞形态学观察和计数方法如下：a）培养后，每组进行细胞形态学观察和测定细胞量。方法：在试验孔，阴性对照孔、阳性对照孔以及空白孔中加人细胞活性染色剂（如MTT试剂、CCK-8试剂等》，一定温度和时间后，在酶标仪上用相应波长进行检测吸光度。b）细胞形态用倒置显微镜观察并作文字记录A.2.5结果分析：根据细胞形态分析和细胞相对增殖率（RGR)对结果进行评价，细胞毒性反应分级见表A.2。
式中：
试验品吸光度；
阴性对照组吸光度。
细胞毒性反应分级
YY 0713.7—2011
相对增殖率（RGR)/%
≥100
YY 0719.7-2011
打印日期：2013年6月13日F055A中华人民共和国医药
行业标准
眼科光学接触镜护理产品
第7部分：生物学评价试验方法
YY0719.7—2011
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印张1字数18千字
开本880×1230
2013年2月第一版
2013年2月第一次印刷
书号：155066·2-24474定价24.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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