【SN商检标准】 出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定液相色谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4065—2014
出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定
液相色谱法
Determination of methyl hydrogen fumarate and dimethyl fumarate in botanicChinesemedicinalmaterialforexportLiquid chromatographymethod2014-11-19发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-05-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T4065—2014
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：唐柏彬、曹淑瑞、郑小玲、邓晓军、都存显、张雷、王国民。I
1范围
出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定
液相色谱法
SN/T4065—2014
本标准规定了出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的液相色谱测定方法。
本标准适用于出口植物性中药材五味子、陈皮、枸杞、苦杏仁、决明子、、山茱黄、豆蔻和牛蒡子中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是在日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样中富马酸单甲酯和富马酸
乙酸乙酯提取，提取液经离心、过滤、浓缩后，经氨基复合石甲酯用
夜经浓缩、定容后，用液相色谱仪测定，外标法定量，
墨碳柱固相萃取分离、净化，淋洗液4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GBT6682规定的一级水。4.1
甲醇：色谱纯。
乙酸乙酯：色谱纯。
冰乙酸：色谱纯。
磷酸。
4.5无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。0.05%磷酸：移取0.5mL磷酸，用水稀释至1000mL。4.6
液相色谱流动相：甲醇-0.05%磷酸（35+65，体积比）。冰乙酸-乙酸乙酯溶液（2+98，体积比）：移取2mL冰乙酸用乙酸乙酯稀释至100mL。标准品和标准储备液：富马酸单甲酯标准品（Methylhydrogenfumarate，C,H.O。，CAS号27564.9
87-8）：纯度大于等于99%；富马酸二甲酯标准品（Dimethylfumarate，CH.O.，CAS号624-49-7）：纯度大于等于98%。准确称取适量标准品，用甲醇配制成1000g/mL的单个标准储备溶液，0℃～4℃保存。
4.10混合标准中间液（10μg/mL）：分别移取1.00mL富马酸单甲酯储备液和富马酸二甲酯标准储备溶液（4.9）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，0℃～4℃保存。4.11混合标准工作溶液：临用前取适量10μg/mL混合标准中间液（4.10），用流动相（4.7）稀释成1
SN/T4065-2014
0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL.0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL和5.0μg/ml的标准工作液。
4.12氨基复合石墨碳固相萃取柱：各0.5g，6mL，或相当者。使用前用10mL甲醇、10mL冰乙酸-乙酸乙酯溶液（4.8)活化，保持柱体湿润4.13微孔滤膜：0.22μm，有机系。5仪器和设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量0.00001g、0.01g。5.3
高速粉碎机。
5.4二号筛：24目，850μm±29μm。5.5振荡器。
离心机：转速不小于7000r/min。固相萃取装置。
氮吹仪。
减压旋转蒸发器。
具塞离心管：50mL。
浓缩瓶：150mL。
试样制备与保存
五味子、陈皮、苦杏仁、决明子、豆蔻、牛劳子等取不少于200g样品，用高速粉碎机粉碎，过二号筛，取通过筛网的药材粉末装人洁净的容器内，密闭并标明标记，于0℃～4℃保存。6.2
枸杞、山茱英等
取不少于200g样品，于一18℃冷冻2h以上，取出后迅速进行高速粉碎，粉碎后的样品再装入洁净容器内，密闭并标明标记，于-18℃保存7测定步骤
7.1提取
称取2.5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加人5g无水硫酸钠和20mL乙酸乙酯，振荡提取30min，7000r/min离心5min，将上清液过滤至150mL浓缩瓶中，用20mL乙酸乙酯再重复萃取1次，合并萃取液，于35℃减压浓缩至约1mL，加入4mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8），待净化7.2净化
将7.1所得待净化溶液全部转移至活化好的氨基复合石墨碳固相萃取柱（4.12)中，收集流出液，并用5mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8）分两次洗涤浓缩瓶，洗涤液合并上柱，再用5mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8）淋洗固相萃取柱，收集全部流出液于刻度试管中，于35℃水浴小心氮吹至近干，用5mL流动相（4.7)溶解残渣，4000r/min离心3min，取下层溶液过0.22um微孔滤膜，用液相色谱仪测定，2
7.3测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Cls柱，250mm（柱长）×4.6mm（内径），粒度5μm，或相当者；流动相：甲醇-0.05%磷酸（35+65，体积比）；流速1.0mL/min；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
波长：210nm。
液相色谱测定
SN/T4065—2014
按7.3.1液相色谱条件测定标准工作液和样液，以外标法测定样液中的富马酸单甲酯和富马酸二甲酯含量。如果样品中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的含量超出标准曲线范围，应用流动相稀释后再进行分析。在上述色谱条件下，富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的色谱峰参考保留时间分别为6.0min和12.1min。富马酸单甲酯和富马酸二甲酯标准色谱图参见附录A中图A.1。7.4平行试验
按以上检测步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5
空白试验
除不加试样外，均按上述检测步骤进行。7.6结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯含量：(c-co)×V.
式中：
试样中待测物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c
试样终溶液中待测物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；空白试验溶液中待测物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；试样终溶液代表的试样量，单位为克（g）。测定低限、回收率
测定低限
本方法测定低限为0.1mg/kg。
回收率
.......
富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的添加水平及回收率数据参见附录B中表B.1。.......(1)
SN/T4065—2014
附录A
（资料性附录）
标准溶液高效液相色谱图
富马酸单甲酯和富马酸二甲酯标准溶液高效液相色谱图（0.25μg/mL）图A.1
五味子
决明子
牛劳子
山茱英
白豆蔻
化合物
富马酸单甲酯
富马酸二甲酯
富马酸单甲酯
富马酸二甲酯
富马酸单甲酯
富马酸二甲酯
富马酸单甲酯
富马酸二甲酯
富马酸单甲酯
富马酸二甲酯
附录B
（资料性附录）
不同基质回收率
不同基质回收率
添加水平
回收率
82.8~93.5
88.9~96.6
80.9~90.4
80.8~89.7
84.6~88.1
85.3~93.3
86.8~94.4
80.8~90.6
82.7~88.5
82.6~86.3
SN/T4065—2014
相对标准偏差（RSD）
SN/T4065—2014
化合物
富马酸单甲酯
苦杏仁
富马酸二甲酯
富马酸单甲酯
富马酸二甲酯
富马酸单甲酯
富马酸二甲酯
表B.1（续）
添加水平
回收率
84.7~93.1
86.8~93.5
89.2~93.6
81.2~90.7
84.4~90.2
84.3~93.4
88.5~95.0
79.6~90.0
80.2~91.3
84.0~93.6
88.9~95.5
88.8~95.3
82.7~91.5
82.5~88.3
相对标准偏差(RSD)
Foreword
ThisstandardisaccordancedwithGB/T1.1-—2009of requirementsdraftedSN/T4065-—2014
Please note that someof the elements of this standard may involve patents,but the Standards Organizationdoes notassumeresponsibilityforidentifyingthesepatents.This standard was proposed by and isunder the charge of the Certification and Accreditation Administration of the People's Republic of China.This standard was draftedby the Chongqing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of thePeople's Republic of China,Shanghai Entry-Exit Inspectionand Quarantine Bureauof thePeople's Repub-lic of China.bzxz.net
This main drafters of this standard are Tang Bobin,Cao Shurui,Zheng Xiaoling,Deng Xiaojun,XiCunxian,ZhangLei,WangGuomin
Note:ThisEnglishversion，atranslationfromtheChinesetextis solelyforguidance7
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