【SN商检标准】 番茄灰斑病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4337—2015 番茄灰斑病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Stemphylium solani G.F.Weber 2015-09-02发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2016-04-01实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国南通出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、华南农业大学、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：肖杰文、孙民琴、徐宁、吴翠萍、林石明、冉俊祥、姜子德、习平根、彭仁、杨占臣、娄少之、李彬。 1 范围 番茄灰斑病菌检疫鉴定方法 本标准规定了进出境植物检疫中番茄灰斑病菌的检疫鉴定方法 SN/T4337—2015。 本标准适用于对番茄灰斑病发生国家和地区的寄主植物或产品上番茄灰斑病菌检疫和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1809 进出境植物种子检疫规程 SN/T2122 进出境植物及植物产品检疫抽样方法 SN/T2589 植物病原真菌检测规范 3 基本信息 学名：Stemphylium solani G.F.Weber。 异名：Stemphylium botryosum f. sp. 分类地位：无性型真菌（Anamorphic Copersicungi）的甸柄霉属（Stemphylium）。 传播方式：病菌以菌丝体在残体上越冬，或以分生孢子在种子上越冬，成为翌年的初侵染源。发病后产生的分生孢子随风雨、喷水及其他农事操作进行传播，成为重复侵染源。病菌通过自然孔口或伤口侵入，温度20℃~25℃、相对湿度80%以上时最易发生严重。当土壤肥力较差、植株生长不良时，病菌可直接穿透植物的表皮。 4 原理 番茄灰斑病菌的地理分布、寄主范围、为害症状等，以及病原菌的生物学特性、形态学特征等，是检疫鉴定该病菌的依据。番茄灰斑病菌的属种形态鉴定特征参见附录B。 5 仪器和用具 5.1 仪器设备 体视显微镜、生物显微镜（带显微照相装置）、超净工作台、生化培养箱、高压灭菌器、低温冰箱、普通天平（感量0.1g）。 5.2 试验用具 目镜和镜台测微尺、载玻片、盖玻片、培养皿、酒精灯、可调微量移液器、接种针、封口膜（Parafilm）、滤纸、镊子、解剖刀。 6 试剂和培养基 6.1 试剂 0.2%的2,4-D钠盐溶液、葡萄糖、琼脂、2%的次氯酸钠、75%乙醇等。 6.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)；马铃薯胡萝卜琼脂培养基 (PCA)（配方参见附录C）。 7 抽样与检查 7.1 现场抽样 按照SN/T1809及SN/T2122规定进行取样。 7.2 现场检查 种子取样时注意检查种子中有无可疑带病种子、残体；植株取样时注意检查有无可疑病株。若有可疑病株应将其挑出来，并送实验室做进一步检验鉴定。 8 制样 按7.1的要求抽取的每份样品应充分混匀，制成平均样品，从每份平均样品中取25g作为检验样品。 9 实验室检验 9.1 种子检验 9.1.1 吸水纸培养 用0.2%的2,4-D钠盐溶液浸渍灭菌的吸水纸，每个灭菌的培养皿铺3层。将抽取的种子（不经表面消毒）直接放置于吸水纸上，每皿均匀间隔放置50粒种子。将培养皿置于25℃生化培养箱中，8h光照/16h黑暗条件下培养。7d后取出培养皿，用体视显微镜逐粒检查种子，主要根据分生孢子、分生孢子梗及产孢结构形态等特征，挑选出疑似带灰斑病菌种子。 9.1.2 病原菌的分离培养 从疑似带灰斑病菌种子上挑取单个孢子，移至PDA平板上进行分离纯化。 9.1.3 病原菌的鉴定 将获得纯化的菌株转到PCA培养基上，置于25℃生化培养箱中培养，培养皿放于白炽灯下方35cm～40cm处，8h光照/16h黑暗培养，待充分产孢后，观察分生孢子、分生孢子梗及产孢结构形态等特征，并显微测量其大小。 9.2 种苗、植株的检验 9.2.1 症状检查 用肉眼查看种苗、植株样品，根据番茄灰斑病菌的症状挑选出怀疑发病的植株，带入实验室做进一步检验。 9.2.2 病原菌的分离培养 选取新鲜的带有典型病斑...