【行业标准】 布氏杆菌病荧光偏振试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3506---2013
布氏杆菌病荧光偏振试验操作规程Procedure of flmorescence polarisation assay for brucellosis2013-03-01发布
2013-09-16实施
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
本标准按照（G3/T1.1—2009给凹的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并妇口。本标准起草单位：中华人民共和国天洋出人境检验检疫局。本标崔主要起草人平玉玲，來慎顺、柴铭骏SN/T3506-2013
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布氏杆菌病荧光偏振试验操作规程本标滤规定了布氏杆菌病荧光振试验技术要求。本标准适用于布氏杆菌病的检疫、筛查和监控，2规范性引用文件
SN/X3506—2013
下殖文件对于本文件的应是不少的。凡是注日期的引文件：仪注日期的版本适用于本文件。凡是不注几期的引用文件，其最新服本（包括所有的修改单)适用于本文件，GB/T6682分析实验究用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全道用要求3生物安全猎施
为了保护实验人员的安全，应由经过生物安全培训的工作人员进行布氏杆菌病的检测，成当采取预防气溶胶感染的安全措施。所有废弃物应按照GB19189中的有关定处置。4试验原理
溶液啡的分子作随机转动，分子的大小是影响转动速率的主要圆豪，与其成应比关系。函而小分了较大分子转动得快，如录给分了标记！荧光他素，通过68.5°角度的转动间即可通过测景水平和垂真的偏振光强度来确宠，因而，大分子比转快的小分子发射更多的偏据光，诊断布氏杆菌病时，布氏杆菌光滑型I.PS的小分了量片段OPS（平均22kD），标记上异硫氰荧光素（FITC)，用作抗源，然后加到待检肌清中，茗有抗体，与标记抗原结合后就会降低其转动遮度，用荧光偏振仪器测定出编振值,通过偏振值判定样品的阴、阳性。5试剂和材料
5.1阳性对照：布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂。5.2潮性对熙照；布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂，5.325×液缩的反应缓冲液：布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂。5.4结合物：标记有片硫氰荧光索的0型多糖（OPS)抗原，布氏杆菌病荧光偏振商品化试剂，5.596孔黑色平底微黑板。
5.6除另有规定，本方法斌验用水应使用符合（F13/个6682规定的三级水，6仪器和设备
6.1荧光偏振仪，
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6.2微量板振器。
6.3温箱：湿度范围应满足16℃-~25℃7被检样品
被检样品为血清样品。样品应避免含有题粒物,如出现颗粒物应作离心处理。溶血样品可用于本试验，冻栏品应用蒸馅水进行复原，冷冻样品需究全融化养混勾，8操作方法
8.1将试剂和样品恢复至案温（15℃～26C)8.2将25×浓缩反应缓冲液压蒸水作1：.25稀释；制备稀释的反扇缓冲液应避免有颗粒物.配制后的溶液放暨室温保存，并在1个月内使用，8.3取 20 r. 阴性对照灿人微量板 A1、H1、CI 孔中,取 20,μL 阳性对照加人微量板 1)I 孔中,段 20 μ1.血清样品加人其余相应孔巾。在向微拔加样或加液体时应避免气池产尘8.4取180μL稀释的反应缓冲液加人到微量板的每个反应子牛,暨振荡器上中速振葛2il8.5将反应板置室温（15℃~26℃孵育3min~5-mrt层，置费-光偏振仪（发波长485nm，发射波长528nm)上读缓冲被和样品的初始值，作为空户偏振值，8. 6取 10 μL 结合物t人到每个反应孔中,置娠荡器上中速振荡 2 min！8. 7 将反应板置室温(1.5 ℃~-26 ℃5孵育2 rtn--3-1nm,置荧光烷握仪上读取最终筛振值。9结果判定
对照战样品的偏振值计算见式(1)：A...
一对照或样品的偏握值1mp；
-对照或样品的最终编振值,mP
对照或样品的初始遍振值，nP。1
当阳性对照的偏振值在:120 m-~≥50 mP之间,阴性对照的编摄值个: 70 mP-~95 rP 之间时,方可过行被检样品的结巢判定：著阳雄对照或荫祥对照的侃振值超正规定的范国，需要根据仪器手册的说明聿新校正仪器。
结果判定计算贝式(2)：
AAFP-C
式中：
4—样品的偏振信与阴性对照平均偏振值的差值，mP；F
一对照或样品的偏振值，mP：
-阴性对照平药偏振值,mP,
被检样品为三血清时,4L0mP,样品判为阴性:10mP≤△20mP,样品判为可疑;△20 mP,样品判为阳性。
被检样品为单血清时,4<10 P,样品判为阴性;10 mP≤△15 mP,样品判为可疑;A>15 mP,样战判为阳性
被检样品为猎前清时.410mP,样品判为阴性;10 mP4=2℃mP,样品判为可疑;420mP,样?
品别为阳性
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可疑样品应双份重复试验。如果两次样品的A均小于0m，判为阴性；若有一次样品的△介丁可疑值范围或大于阳性值范阅，判为可疑，应采用其岱试验进行确证：若两次样鼎的么大于阳性值范调,别为阳性。
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