【行业标准】 转基因微生物定性检测方法

人民技和国人境检检焙行用标准SH2667.-2010
转基因微生物定性检训方法
CbrgHituive reiccdlan r serpeaiy Eri mlrmarasns2010-11-01发布
国家城医督检教检践总局
2011·05-01施
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3.1本谱和定义
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带有的特殊抗累特格，卡那舒紫（kaK）壮观罐系（sperirnyei，s）潮得数山ygromycin等式年素.小，成是实质命属等特点来用和度培养基进行培释筛选，从而对机应的转求周微作物进检测
4.2报替基图检测
4.2.概述
常所用的报片基用例如Lu,1Ix.EAc，xyF利&uA多选择性增熟1是高灵做和离度特异的：其中「之甚科是应用最为泛的一美报告基周。而年有生物发光是周的（M制以质用多于段如发步调实仪、文光股并以及（）战像等检测，利川转据翌微作物盐有的报告其码在落养堪所长配的不同表型对成法行检测。资监发型可以是某种代谢特性，或是不同的生物发光能力，4.2.2生化显色标记基園
平乳源件陈基然（是a练于19年第个采用范非抗益票标记情围，该品因的微物在含有旅物5-漫微子叫喉卡乳概者的2薇小战率液中试能落变成蓝绿色4. 2.3发光酶恶因
发光求国（A，心分别从发光海学服菊和载火虫中电降绿到，前者编鸿的发光海能作用下长能朋顺能门产升发光现象；者编码的酶在A「有新下雅化爽光素的氨化反应生成氧化装光紫剂遗绿色光。
1.2、绿色荧光熊白基因
绿仁蒙光策自基固（\）思关存准十包括水持，水螂和珊剧等控勤动物体内的编码车物发光张自的法用，（不受到紫外战蔬光激发时·发绿色凝光4. 3检测
大多数GMM均带有特殊的NA影列，如特亲的价性基因和报车基图，固北圳PR扩增方法进有检测：对转靠因微生物让行R检测，是针对转激国微生物的外源鞋闪序列区域设计对特异幅物，证过限书增即可判宠样晶中是各禽有特宏的外源基固，以而检测（MM5仪器和试剂
5.1仪器
5. 1. 1 D照样抗.
5. 1. 2 PR 仪.
5.1.3照净.1作育。
5.1.4消游灭菌锅，
5. 1. 5培养而.
5.1.6佰凝普养箱。
5.1.7制述机。
5.18核酸蛋伯分析仪。
51高理冷冻心研，百武小鸿离心桃M个人离心机。5.1.10嵌胶够像分积系统，
5.1.11低湿冰箱冷凝冷冻泳箱，5.1.12纯水帮，双蒸水塔，
5.1.13凝淤振拌。
5. . 14微避样举(2.5 ..10 u1..23 t,106 u,200 p.1 00 ).5.15PCR反成管
5.2试剂
除男有规定，所有武剂均为分析纯或生化试剂5.2.1实验用水：成符合G35682中级本的规格现宽热行SN/T2667---20:0
5.2. 2T级冲液:7.氧化销:0.28织化铆,0.客磷酸：氮印或449癣慢氢纳)和1.8品麟酸氮“钾m蒸留中用站腹调节溶液的链等，片抑蒸耀水楚容至15.2.3-80.
5.2.4破球
5.2.5DNA 思段液:2% Tron X .G,1SDs.loc mol/. 氯化销,1) u!ol/. TH:-C (p18. ):1 mmol/I. ETA
5.2.6CTAB提液:2%CTAB2g,20mo/1.EYIAC.725g00nmol/T[IC11.21e1.nml/月.条化钠8.18g，加水系100m高恶炎菌餐同，5,2.76 mol/1. 氧化销液，
5.2.8无水之醇70头醇,
52.9CTAB就淀液：TA3,0.0m/家化的,加水军[00高灭荫备而。5. 2. 10
Ts的销和/氛烧/戏掉（25：241）5. 2. 11
三氯甲烷/弄戊醇（24：1）。
TF f 液(:t mmol/. Tr, 1 mmol/l. FA.sR.0).RVas
P退注渡
急化钱。
cNTPsEAT,dCP.dGTP.UTP
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古实骑方法
6.1选择性培养
将取得的样品训鎏有3m稀释缓冲波！餐冲浚1滴吐醒)的0：m穿無，烈娠滋mn
！：的比例对样进行系列缔餐：收，斯得到的的雄都降翼整融信9体释缓洲液的！m.容量瓶中，振菌！mit：意复该步蝶选行系列蒂择。分别最0.最质饮系刻泽评所得的晶溶液均可准命有拥成抗集系读更金滤的音系平板表面。
根糖不尚MM的生长多件，选择最造的条件对进衔露养，观察窗落的年长懈况。
6.2报告基凶检测
将待测样品均匀涂范相应的磨辨淋上。N/ 2G7-201G
报框不GM的生长会件，选华原律的会性对GM谨行第养点全产生明显的为自落：资择不同的检测力法少谢落表型，印装，摄1转基闲微生物检测用报查基网及其南落装型非练
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6.3R检测
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5. 3. 2挂品0转领
6.3.2.1麦璃跌帮析法
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6.3.3.1反应条件
根据物的最火度租护兽开服肉小确授府，进行度6. 3.3.2反应邻系对照的设商
隔性对照：以不密GMM的国组A为模板N/!2667--2013
阳料双照：录舍行MM节A作为求反应的懒表或来用含有准溯基医序的的质粒等对照：用配置教尚体系的密验求造模被6. 3. 3. 3 1C限的质控标准
到样对服学台对照术现特科你带隔慢对照自期预期扩增多带。
7果别箱
7.1选揉性培养
者在和版的造着生增养上越
7.2报告基因检测
限期不间的限出，达祥价测行视务菌学装型下，出现了我中所指定的表里、握精品自各有7.3PR检测
对待给样品A提取波行PR测额试
能栏晶中含有MM
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