【行业标准】 食用油脂中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测方法

中华人民共和国出人境检验检腔行业标准SN/1203---2010
代SN/『【23·2003
金基医精物成分
实光PC法
kHh or tlie rei-he Fenesaremnee gesesiatve slyenerse tinairaartro Tr etentsre Berelachny noeliet haRunt cainpnenhs Er cahie ss2010-11-07发布
国威馨验检
2011-05-01实施
本标照.给的规则起章
$/1203-2070
本标准代降/下1203200食周油销中转精因成物质众定性P双检方读票。本准用6N/T203--2003剂比，主要技术变化奶下：量新规范工使用范闹为食用抗物油器重新确定了食用油脂的实酸提方法；-限代R检技术4管规P服及费造R物人法）为实资光R：一-调整了定性PR新制叫物、练乳序列：··学新滴定了检测霜业炮断依据，本你雅出阅家认证认的盗督理爱质会提出再烂宏标雅起章典位：中人民共非行国；尔出人境检验险疫励、北京率尔维物技实有眼公司，本你宝婴通单天：李丹宁高余徽谢力钟消、纯国强，密额、方宇平，兼漳、非鸿冷，马发、张气。陈源樹，谢倾心
本标流所代标准的店次版本发布情况为：-SN/132093
1范园
金南脂国精物成务
实装性测法
本标资期定了食用油猫中转基两抛物成分实时荧光PR究性检测方法答标准适儿食旧润据中转基调模物感分实时装光定性我检测。布标涤不后用十动场源性油胜中整离固植顺原分塞附光定性卫检。2规范性引用文件
B/T1203--2010
下列文件附，术文件的应用是必不可安的：风是这日箕能引用点降，仅注用瞬的版本适用子本文伴。是不注间期的引文件。滨毁新意心但据所有游修政单)适用正本文件。GB/T6682分概实验室用火规格实验方G/T202：检测动液准戏实能的练用求(3/19495.2转张医p能检实链控表提求SV/20植物及其加产品较糖质股公领装况PeF定性检验方3术谱、凝义和缩略谐
3.1术讼利定义
列术谱有建义造国于本文
DA的摄取和纯化，DAitaua
从测试样品的舒冲成分P率故.随综花DNA.去除R技应抑领剂，3. 1.2
exORSTEs Ce
外源萄
利用生物汇程技术转人的其他经物密，使该生物品需现新的生物学性状。3.2翻略谱
下列缔略谱适用于本文件
Fpsps(emlpyruvyis:kunaie-3pt:ospha.ssyn:hnsegte奔岸酸3瞬合的热因rAM(s carhoxyirorescir);t-俊基爽光素Aosterminatorofnopaiiueynthr.segene：服脂减合弱基因终l了TAMRA(arhoxy-Litin:nehyl-rtoriatmime):滋想国学聚区明tkNALeI：绿体离酸转滋该糖核基因4原理
本本证游及食用消脂是油料外物加产品减学在常溺下为润体在活脂的压深、驰提过棉中：部分核略等极性组分会随扯料格物纠胞的被坏间进人指澈。采适当的核酸禄取技本类得道服至SN/n1203--2010
实时宽光R检测陷NA，道过实时类光PCR检测其中是香含有各神外源基固·达到对食用非脂民排究城分求以测的的
5树料与试剂
设利材料
高速冷你资心机（最高转速5%000）台试离心挑(最离转速100Cg）
冰箱:2 - ---0 80
剐源机
超纯水发准器（分生物学级期）双燕水器.
核慢贯案下燥系统，
核履留白分析仪。
实时装光PCR仪
. :..3 ml..2 rl..13 ml,50 ml..比添仪：
电热恒温干焕设备或其非决速下燥设备。表通m：5cm热cn
5.2试剂
除刃有规定外，斯续验恢用的试等线应为不含NA和Na的分桥纯成生化试剂，条件5.2.1
许间情况下推持待用级纯试剂，截剂的选购、验收，储存成销合G13/T27025规范。5.2.2实酸用水应符合G3/T668中缎水的规格，离了水附应送对18.20.523激油脂中植物感内组以A凝最化武盒5.2.4F0×R缓冲液（不含流化）5.2.5氯化线济液：25 nmol/
5.2.6dNTP游液(rlAPrlcIPdP.TTP战 dUTP):各2.5 mml/L酶以dU代替
5. 2. 8Tm 酶
引物和探针：食用池指中转因机物成分实时费光PR定性检测所川引物序列和探针序列则5.2.9
表1部分来列山外源基国可参见N/个1204。表1实时荧兆R所用引物和探针序列检滤因
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低引油脂中植物整网组NA提取纠化战剂念出非其望参生物技术有限公司提供，给出议會息是为了方便本标游的使用，并不表长对该产品的认定，如果具物等效产幅具有相间的效果，划可使洲这穿效产品NG酶准活化条件下可改降解备有！的效候战德次A。准比求排治度应液中加人润而或有效防以前以代荐dT合戏能CR扩增产物所致的微荫污染哈理料
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表1（续）
躲计序列
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$N/7 1203—2010
汕菜籽内源蛋園
高等植物内源望因
转感凋大草服来
泊家机外源基内
转基国注器车外源基国
转尘因大影、米
汕荣籽源固
转统国卡米汕深等
外源流测
转机内主及、动蔡究
外源琪照
转基固显米注期将
虾源共南
转基内油术外源基限
转基内大夏外派基四
注：-RNA前作大总汕、K案滩、藻打油祥品备选内源基为及其他植物油脂样品内源基内。防止污染措施
虑止污染猎地成签全/119495.？的规。7检测
对照设暨
检测过程中应设按酸摄取空门对照、PCR机曾试剂对照、PCR护膚阴准I标DNA对照、PCR护增降性问频1NA对照，且体方武按照3/个19495.2中幅关规范。7.2样品前处理
7.2.1含用油脂中极性脱分的萃取取50ml.离心管4支，得支分别人约25ml.双蒸水，得支分别圳人等体根油样，充分振落2m3
5N/7 1203--2010
（约300次），7（00g空温商心51X弃大上层油滋，平次加人等体积油举，腾上练落心，开油液。滋[述操作度复春股登下层水深泌。夜收其程中，如来润和水拍界南间出现较密负物质，尚在弃上层湘滚后娠落以使压包物质分散，了acog签溃离心5nn用缩色物质廉消加人练伴积洲样继续器，如离心底房心物探感们形戒年需斜前·购虚用超真的器厚（烟：特德的不锈钢有等)尽常去除，并补足双蒸水至约m圾总量：初摔大豆洲为C0现棕渠穿为70000m初粹手米消为750 ml.1 00 nl名种翔炼油为3000 ~5 G00 ml霆汉用池最不超过5 c00 m1)7.2.2减液的激缩
金部转慈举液（下原水相）-百径15m20cn南中，造电熟南温鼓风十爆股备（设首游品7或其征次踪燥设密内东分下爆。电可用真经事规系统或其仙等效方治。7.3A提取和纯化
出议跳期北京望尔生物接术存限公司食剧涵期中循蜴您医组了尔提孜纯化国盒：街决用其他等效停试料密，探及和纯化届的DNA游长期康存应伴在20C威低于20，7.4 限A定量
DNA是欧方法孩GI/T19453.中新关定7.5时爽光&检测
5.1实时蒙张反应体弱
实时蒙究“R发成捧系表
我2实时款光乐质度体！
1大PCR续冲版不含激传
氧化游液(25 mmz
GNTP液(各2. /T)免费标准bzxz.net
+2c mot/)
授t2c no/1
探(3 :m/
DNA模表C00 nE/
皮成性系中的馨波项
2. 5. mme /1.
t- (. 2 1:7e1/1.
0. ? μmo:/..
.2 mo!/.
0. 1 mrl/..
注：G商在培化系件下市民降解合有的双研端学德NA：R护单度应微中业人UN心函可以有效止以前以代得合成的性诺密所效的湾线，实验车新果择举明件为济十果范箱证得淡R及应的设所本系中以化臀们并人UG谢：查，没应体系求必N器dVP游液为ATPCTIP的混测
7.5.2实时光R反应参数
SN/F1203—2010
实时炭光R成应器数现装，使不同实时获光：限求仪，可对客数作适当战表3实时荧光C及反应参数3
太污染
活化NA合成酶和锁定
PR个谢择】
注：授成体系中健片UNG酶时.皮虚舒数势按照表中条件7.5.3仪器检测通道的选择
设降PR度应微费光信导技集条件，应与探针标记的报告载团一致，其体设胃力法可参照仪器使说明
7.6结果分析、判断和表述”
7.6.1基线和阅侦的设貿
实时荧光PR发应结束并分折缩集时-应设霸书线利测值，基线范国设置在3个15个循环，紫线阀假设置在当线刚好超建正阴性称DNA对照护增血线最惠点E（A0，诉常情配下可以采开仪器认的基线侧笛，即采间3个15个循环的阴性门标1NA照的10倍标非关为阀值7.6.2质邀控制
7.6.2.1平行样品的设假
卖个样品进行实时炭光CR检测时应设置充必2个买7.6.2.2对照设置
实时炭光R检测过中度设晟PCR折增试剂对照、CR扩跑阴性标NA对照R护增图性尚标NA对照，并对DNA提最和纯化过程没盟的核酸提收空广对照用进行实时美流CR检测，具体方式按照（13/1995，2中利美规短。实验中设贸的各评对照1CR给测结染应符会7.6.2.37.6.。咨则，低对照妇聚现非下述正带练聚成重做实临，7.6.2.3核酸提取空白对照和Pc%扩增试剂空自对照外源基因检测结录（，内源据因检测结案C03，A1m77007000仅端献认原成参数。给出这假息提火了方便本标准的使用者，均不表本对该产品箱认，如果其地等效产品具有相间的效果制可使这些等效产品.以A131r1sm7790/78cO夜器的实验结票为例。答出这一任息是为！方仙本标准的假用者·准不举对该产品的认训，如渠试创综效产品！有相同的效，可慢用这归等效产品。F
SN/T1203~--2G10
7.8.2.扩增阴性当标1A对照
外源球闲输测结银（0，内潮盛因检测结限0367.6.2.5版扩增阳性尽标A对照
外源器闪检测结果36
7.7结鼎判断和递
7.7.1待测样品外源赛因2个平行检测纤果20.内源整8检测2001%36并出现其型的款增断线，码舒种实验对照结果正带，时叫以划定该格品来检出大头求鼎固续发然为未检出湛园，
77.2待测格品外源热1个平行样检测结果3640并出国卖型的扫整出续内源基因检测G算出源典的增由线，国时各种实验对股结果带此厨减量当增期NA模板球店做实付装造R险测：平次检测结票外源基透仍然正出现典罩脂汇增前约，同时各科家验对照结集正宫，可以划定该样品酸出文：其图：次检测销果外源基因（正价周时各种实验对照缝果证带以爆定该样点本检出入文基因，给果表递为求检品义义因7.7.3待测祥品外源整图2个平行样检测结尽C1.36消现典煌的铲增临线，内源满因将测2016关出现典型的价增出线，词时各神实验对照结果出常，比时可以判定该栏品检出区义大势因结熙装述为检出文陷
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