【农业行业标准(NY)】 食品中草甘膦残留量测定

ICS67.040
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1096-2006
食品中草甘麟残留量测定
Determination of glyphosate residues in food2006-07-10发布
2006-10-01实施
中华人民共和国农业部
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（湛江）。本标准主要起草人：陈鹰、程雪梅、黄和、周敏、叶英httn：//foodmateNY/T1096—2006
1范围
食品中草甘麟残留量测定
本标准规定了食品中草甘膦及其代谢物残留量的测定方法。本标准适用于蔬菜、水果和粮食类等产品中草甘麟及其代谢物残留量的测定。2规范性引用文件
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下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T8855新鲜水果和蔬菜的取样方法3原理
试样中草甘膦及其代谢物氨甲基麟酸（AMPA）以水提取，粗提液经二氯甲烷液分配和离子交换柱（CAX）净化后用三氟乙酸酐和七氟丁醇的混合液衍生。氨基基团被衍生成相应的三氟乙酰衍生物，羧基和麟酸基团被衔生形成相应的七氟丁酯。衍生物用气相色谱一质谱联用仪器定性，采用离子选择模式外标法定量，测定结果以草甘麟和AVIPA的浓度之和计。4试剂
除注明外，使用试剂均为分析纯，用水符合GB6682中二级水要求。4.1乙酸乙酯
重蒸馏。
4.2甲醇
重蒸馏。
4.3二氮甲烷
重蒸馏。
4.4七氟丁醇
纯度≥99%。
4.5三氟乙酸酐
纯度≥99%。
4.6柠檬醛
纯度95%。
4.7盐酸（市售）
4.8磷酸二氢钾
4.9CAX洗脱液
160mL水+2.7mL盐酸+40mL甲醇。4.10酸调节液
合品体伴网http：
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16g磷酸二氢钾+160mL水+40mL甲醇+13.4mL盐酸。4.110.2%柠檬醛乙酸乙酯溶液
200μL柠檬醛+100mL乙酸乙酯，储于<5℃冰箱保存1个月。4.12草甘麟（glyphosate）标准品：纯度≥99%。4.13草甘膦标准溶液
准确称取50.0mg草甘标准品（4.12）于塑料烧杯中，加适量的水和2滴~3滴盐酸溶解，转移到50mL聚四氟乙烯或聚丙烯容量瓶，定容配制成质量浓度为1.0g/L的标准储备液，并储于<5℃，保存6个月。
4.14AMPA(aminomethyphosphonicacid）标准品纯度299%。
4.15AMPA标准溶液
准确称取50.0mAMPA标准品（4.14）于塑料烧杯中，加适量的水和2滴~3滴盐酸溶解，转移到50mL聚四氟乙烯或聚丙烯容量瓶，定容配制成质量浓度为1.0g/L的标准储备液，并储于<5C，保存6个月。
4.16草甘麟及AMPA标准混合工作液取适量草甘膦和AMPA标准储备液，用CAX洗脱液（4.9）配制成适当浓度的标准工作液，当日配制。
4.17阳离子交换(CAX)柱
LC-WCX（500mg，3mL）或等效柱，使用前用10mL水预处理，保持柱体湿润。4.18衍生试剂
在聚丙烯塑料瓶（5.5）中加人七氟丁醇（4.4）和三氟乙酸酐（4.5）（1+2），轻轻混匀，得到混合衍生试剂，现用现配。
5仪器设备
5.1气相色谱-质谱联用仪
带四级杆质量分离器、电子轰击源（EI)。5.2色谱柱
弹性石英毛细管柱，DB-5MS(30m×0.25um×0.25mmi.d)，或与DB-5MS极性相当的色谱柱5.3衍生用玻璃瓶
4mL，具螺纹口空心塞，配聚四氟乙烯垫。5.4组织捣碎机
5.5聚丙烯塑料瓶
5.6高速均质机
10000r/ming
5.7具塞聚丙烯离心管
5.8具塞刻度试管
5.9高速冷冻离心机
2.000r/min。Www.bzxZ.net
5.10旋转蒸发器
5.11恒温水浴锅
5.12移液器
10μL~100L200L-1000pL
6取样和制样
6.1取样
粮食样品按照GB5491取样；水果、蔬菜样品按照GB/T8855取样。6.2试样制备
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粮食样品经粉碎机粉碎，过20目筛制成试样备用，水果、蔬菜样品擦净，晾干表面水分，取可食部分经组织捣碎机（5.4）捣碎，制成试样备用。7分析步骤
7.1提取
7.1.1蔬菜、水果类样品
称取25g均匀试样，精确到0.01g，置于塑料瓶（5.5）中，加入105mL的水，在均质机（5.6）上高速浸提3min，转移约50mL勾浆到50mL离心管（5.7）离心10min，取上清液20.00mL到另一50mL聚丙烯高心管（5.7）。加人15.00mL二氯甲烷，振摇2min-3min，离心10min，取上清液4.50mL于10mL具塞试管（5.8）中，加入0.50mL酸调节液（4.10），轻轻振摇，离心10min，上清液供净化用。7.1.2粮食类样品
称取12.5g均勾试样，精确到0.01g，置于塑料瓶（5.5）中，加人125mL水，以下按7.1.1中的在均质机上高速浸提3min之后的步骤操作7.1.3豆类等蛋白质含量高的样品称取12.5g均勺试样，精确到0.018，置于塑料瓶（5.5）中，加人125mL水，在均质机（5.6）上高速浸提3min，转移约50mL匀浆到50mL离心管（5.7）离心10min，取上清液20.00mL到于另一50ml聚内烯离心管5.7），加人100LHC，盖上盖高心10min，取15.0mL上清液于另一离心管（5.7），以下按7.1.1中\加人15.0mL二氯甲烷\之后的步骤操作。7.1.4坚果等含油量高的样品
称取12.5g均勾试样，精确到0.01g，置于塑料瓶（5.5）中，加人125mL水，在均质机（5.6）上高速浸提3min，转移约50mL匀浆到50mL离心管（5.7）离心10min，取上清液20.00mL到另一50mL聚丙烯离心管（5.7），加人15mL二氟甲烷，报播2min3min，离心10min，弃去离心液申的有机层，再加人15.0mL二氯甲烧，以下接7.1.1中振摇2min~3min之后的步骤操作。7.2净化
移取1.00mL样品提取液过固相幸取柱（4.17），自然垂滴，待上清液完全流出后，用15mLCAX洗脱液（4.9）淋洗，淋洗液收集于50mL圆底烧瓶，在≤40C水浴中旋转蒸发至近干，用2.00mLCAX洗脱液（4.9）充分溶解残渣，待衍生。经CAX柱净化后的收集液和2.0mL溶解定容液均可在<5C保存7d.
7.3衍生化
移取1.6mL衍生试剂到衍生玻璃瓶（5.3）中，盖上盖，放置于干冰浴中冷却到-40℃～-60℃。用移液器取50.0样品净化液，将移液头伸人衍生瓶中液面以下缓慢释放样液，盖上盖，将衍生瓶再放人干冰浴中冷却，3min后取出，放至室温，在85℃~90C水浴反应1h，每隔15min振播一次。反应结束后取出衍生瓶，放至室温，在40C一50℃水浴中氮气吹干，继续通氮气30min后盖上盖。用注射器移取250.0处柠檬醛乙酸乙酯溶液（4.11）注射到衍生瓶内溶解残渣，此液供气质联用仪测定。3
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7.4测定
7.4.1气相色谱一质谱参考条件
色谱柱温度：90℃保持1.5min，20c/min程序升温到300℃，保持4min进样口温度：200C；
接口温度：250℃；
载气：氨气，纯度不低于99.999%，流速0.9mL/min；进样方式：分流进样，分流比为1+1：电离模式：电子电离（EI)
电离电压：70eV；
质谱调谐：做标准调谐后：在m/z350650范围进行手动调谐：检测用草甘麟衍生物和AMPA衔生物的特征质谱峰分别为：m/z611.5.584.460（m/z611.5为基峰离子）和m/z372、446、502（m/z446为基峰离子）；溶剂延退时间：3.5min。
7.4.2定性和定量
取合适浓度的草甘麟及AMPA混合标准工作液50.0pL，按7.3进行衔生反应。待仪器稳定后进行测定。取衍生后的标准液在m/z350～650范围内做全扫描（scan）得到总离子流色谱图，分别取1.0L行生后的混合标准液和样品液交替进样，选择离子模式（SIM）采集数据.以相对保留时间、特征离子的丰度比作为定性依据：用外标单点或多点校正法、峰面积或峰高定量。单点校正时选择的标准溶液响应值应在样品溶液响应值50%～200%范围内。同时做空白试验上述色谱一质谱条件下AMPA衔生物和草甘麟衍生物的相对保留时间分别为4.61min和5.49min。
8结果计算
样品中草甘麟残留量以质量分数w计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式(1)计算。(Pi+p2)xV
式中：
样品中草甘膦残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）：样液中草甘膦质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）：Pi
P2——样液中AMPA质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)V样液最后定容体积，单位为毫升（mL）；m
-试样的质量，单位为克(g)；
K稀释倍数。
结果以两次测定的算术平均值表示，测定值保留两位有效数字。9允许差
相对相差≤15%。
方法检出限和回收率
最小检出量为0.2pg，在称样量为25g时，方法检出限为0.02mg/kg。1
方法回收率：添加浓度0.05mg/kg~1.0mg/kg时，蔬菜回收率范围为86.7%~104.7%；水果回收率范围为84.2%~96.3%：粮食回收率范围为88.9%~101.8%。4
Thttn:
11色谱图
响应值
500e37
响应值
响应值
AMPA衍生物
NY/T1096—2006
草甘麟街生物
保留时间（min）
草甘麟衍生物和AMPA行生物标准溶液总离子流色谱图611
草甘麟衍生物质谱图
BAMPA衍生物质谱图
http://foodmate.ne600
质/荷比（m/z）
重/荷比（m/z）
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