【农业行业标准(NY)】 肉制品中苯并(α)芘的测定 高效液相色谱法

ICS67.120.10
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1666—2008
肉制品中苯并[a]花的测定
高效液相色谱法
Determination of benzo [a] pyrene in meat productsHigh performance liquid chromatography method2008-07-15发布wwW.bzxz.Net
2008-08-10实施
中华人民共和国农业部发布
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。言
本标准起草单位：农业部肉及肉制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：戴廷灿、李伟红、卢普滨、周瑶敏、罗林广、王冬根、严寒。NY/T1666—2008
1范围
肉制品中苯并a茂的测定
高效液相色谱法
本标准规定了熟肉制品中苯并[a]芪的高效液相色谱检测方法。本标准适用于烧烤、油炸、烟熏等肉制品中苯并[a]的检测。本方法的检出限为0.5μg/kg。
2规范性引用文件
NY/T1666-2008
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法3原理
试样加环已烷匀浆、超声提取，用二甲基亚反萃取。在二甲基亚矾相中加人水溶液，用环已烷反萃取，浓缩近干，用甲醇溶解，供高效液相色谱测定(荧光检测器）。外标法定量。4试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；实验用水应符合GB/T6682中一级水规定。4.1无水硫酸钠
于450℃焙烧4h后备用。
4.2环已烷：色谱纯
4.3二甲基亚砜：色谱纯
4.4甲醇：色谱纯
4.5乙睛：色谱纯
4.6硫酸钠溶液：2.0g/L
称取0.20g无水硫酸钠（4.1)，溶于100mL水中。4.7苯并[a]芪标准储备液
准确称取苯并[a（又名3，4-苯并花，标准品，含量≥99%）0.0150g于1000mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。该储备液浓度为15μg/mL。置4℃冰箱中保存。4.8苯并[a]花标准工作液
准确量取1mL标准储备液（4.7），用甲醇稀释至10mL，从中准确量取1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释成150ng/mL浓度的苯并[a花标准工作液。5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：附荧光检测器5.2分析天平：感量0.0001g
NY/T1666-2008
5.3天平：感量0.01g
5.4组织匀浆机：转速不低于10000r/min5.5超声波提取器
5.6离心机：转速不低于3500r/min5.7旋涡混合器
5.8旋转蒸发器
5.9氮气吹干装置
5.10离心管：50mL
5.11茄形瓶：50mL
滤膜：有机相，0.45μm
6试样制备
6.1样品制备
取适量代表性样品，绞碎均匀。6.2样品的保存
应常温或冷藏下保质的产品于4℃保存，应冷冻保质的产品在一18℃以下保存。7测定步骤
7.1提取
准确称取试样（6)5.00g于50mL离心管（5.10）中，加人5.0g无水硫酸钠（4.1)，加入15mL不三烷（4.2)，匀浆处理2min，超声提取5min，离心2min，收集上清液于50mL茄形瓶（5.11)中，残落分别用10mL环已烷重提2次，合并环已烷提取液，用旋转蒸发器浓缩到1mL左右，转移浓缩液到另一个50mL的离心管中，用环已烷清洗茄形瓶，合并环己烷液，保持体积5mL左右，分别加人5mL二甲基立砜萃取2次，每次旋涡混合2min，离心2min，用吸管吸出二甲基亚砍，合并2次二甲基立双萃取液亏50mL离心管中，待净化处理。
7.2净化
在二甲基亚砜萃取液（7.1）中，加人15mL2.0g/L硫酸钠溶液（4.6），分别加入5mL环已烷反至取3次，每次旋涡混合2min，离心2min。吸出环已烷，合并环已烷于20mL刻度试管中，月氢气吹干装置（5.9）吹至近干，用甲醇溶解，定容到1.0mL，过0.45um滤膜（5.12)，供高效液相色谱检测分析。7.3测定
7.3.1仪器条件
色谱柱：Cg柱，5μm，4.6mmX250mm。流动相：乙十水（88+12)，用前过滤膜，脱气。流速：l.2mL/min。
荧光检测器：激发波长384nm；发射波长406nm。柱温：30℃。
进样量：10μL。
7.3.2标准曲线的绘制
待仪器基线稳定后，分别吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.0cmL标准工作液用甲醇定容至1mL（其浓度分别为0ng/mL、30ng/mL、60ng/mL、90ngmL、120ng/mL、150mgmL），分别吸取10L进样，以峰面积为纵坐标，以苯并[a芪浓度为横坐标作图，绘制标准曲线，2
7.3.3样品测定
NY/T1666—2008
取样液（7.2)10uL进样，得出峰面积。采用单点或标准系列比较定量。苯并[a花的响应值均应在标准曲线的线性范围内，否则，应加大样液最终定容体积。在上述色谱条件下，苯并[a]花的保留时间在13.4min左右。标准工作液和样液的色谱图见附录A。7.3.4空白测定
除不加试样外，采用与7.1和7.2相同的步骤平行操作。8结果计算
8.1单点校准结果计算
苯并[a]芪的含量以X计，数值以微克每千克（ug/kg)表示，按式(1)计算。AxCsxV
式中：
A样液中苯并[a]芪的峰面积；
As—标准工作液中苯并[a]花的峰面积；Cs标准工作液中苯并[a]芪的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；一样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m
一称样量，单位为克（g)。
8.2标准曲线校准定量结果计算
试样中苯并[a]的含量以X计，数值以微克每千克(ug/kg)表示，按式(2)计算。X-CxV
式中：
C标准曲线中查得的样液中苯并[a花的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);-称样量，单位为克（g）。
注：计算结果扣除空自值，保留二位有效数字9精密度
在重复性条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不大于两个测定值的算术平均值20%。(1)
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附录A
(资料性附录）
高效液相色谱图
A.17.7ng/mL苯并La]花标准工作液的液相色谱图见图A.1。3.00
Minutes
图A.17.7ng/mL苯并[a芪标准工作液的液相色谱图12.00
A.2熏烤火腿中加标苯并[a]芘液相色谱图（加标浓度为1.5ug/kg)见图A.2。20.00-
Minutes
图A.2需烤火腿中加标苯并La芪液相色谱图（加标浓度1.5μg/kg）-
NYIT1666-2008
中华人民共和局
农业行业标准
肉制品中苯井［a]芪的测定
高效液相色谱法
MY/T1656-2:08
中国农业出版社出版
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开本880mm×1230mm1/16
2008年8月第1版
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学效，于字
2005年8月北京第1次年
书号：16109：1751
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