【农业行业标准(NY)】 畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法

ICS 67.100.01
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1665—2008
畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定
酶底物法
Determination of total coliforms and escherichia coli in drinking waterfor livestock and poultry-Enzyme substrate method2008-07-14 发布
2008-08-10实施
中华人民共和国农业部发布
本标涤甲附录A为规范性附录。
本标中中华人民共和国农业部畜教业司提山本标雅自全国畜牧业标准化技术委员会归门本标准起芹单位：农业部食品质量监肾检验测试中心（上海）本标滩主婴起草大：而、郑冠树、张致.灵榕、郎爽爽、樊蕴秀、蒋碍光NY/T1665—2008免费标准bzxz.net
1范围
畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法
小标准规定了密禽饮刃水中总大肠菌群利大肠埃希氏菌的酶底物法测定方法。NY/T1665-2008
本标准适用厂密禽饮用水中总大肠菌群和人肠埃希天菌的最可能数（MPV)值的快速测定。本方法可同时检测案禽饮用水中的总大肠菌群和大肠埃希氏菌，2规范性引用文件
下刻文件中的条款道过本标雅引用而成本标雅的条款，凡是注期的引用文件，式随后所有的修改单（不包据勘误的内容)或修订版均不适用丁本标准.然而·殿励根据本标准达成协议的各方研究是否可使而这些文件的最新版本。凡,是不注口期的引而文件，其最新版本适月「本标准。B/T6682分析实验室用水规格和试验力法3原理
在选择性培荞基「总无肠莉罪产生的特异性生物酶-平乳糖百酶（)-多alaclosilase），将无色的底物水解为黄色的邻硝酚((NP）.依此测定密禽饮用水叶总大肠菌群最川能数（MPV)佰在选择性培基上大肠炭希民菊产牛的特是性生物酶3半乳铺有爵（3alactosiiaso，便无色的培养基旱现黄色,同时产牛的β葡菊糖醛峻酶(9glucuroniclase)分解4-甲基伞形酮-β-葡萄醛酸苷（MLIG），使4中基伞彤酮游离并产生爽光物质.在波长365In紫外光下产牛特征性蓝色炭光依些测定畜禽欲门水中人肠埃希氏菌最可能数（MP)值4培养基及试剂
除作另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂：实验用水应符（GR/T6682中级水的规定
4.1培养基
Minimal Medium OXPGMUG(MMO)-MUG)培养基~,称取以下试剂：硫铵（NHSO
硫酸锰（MnsO）
硫酸锌(2ns）
硫酸镁（MgSO,）
氯化钠(NaCI）
氯化钙(CaCl）
亚筑酸钠（NazS（）
两性素 B(ampholericin 3)
邻本些--［-楠平乳糖（NPG）
②可泌用（alilert或同类市售商品5.0g
50, 0 trg
VY/T1665—2008
1早基食形酮βD葡萄酵酸当（MUG）茄属植物萃取物（slanum萃最物）N-2羟乙基嗪V2乙磺酸钠(TIEPES钠盐）N-2-羟乙基赈嗪-N-2乙磺(HFPES’75.0mg
培养基纶过 121℃,5min灭菌后.适川于1000 mL水样的测定4.2灭菌生理盐水
称取8.5氟化钠(NaCI)，用适量蒸缩水溶解稀释垒100mL.泥勾后取9mL分装到稀释瓶内121℃、20 min 高前压灭菌
5仪器和设备
5.1范养箱：36%±1℃
5.2高乐蒸汽灭菌锅。
5.3烘箱。
5.4定虽盘：定量培养用无菌塑料盘，含51个孔穴，年孔穴可容纳2mL水样。5.5程控定量封口机
5.6紫外灯：波长356nm。
5.7天乎感0.01%。
6检验步骤
6.1试样制备
检测所需水样为100ml.。必要时.可对水样逃行10倍释.取10ml.水样，加人到90rL火菌牛理盐水(= 2)巾,混勾
6.2定性反应
量取 100 山二6. 5 mL水样(6. 1)于 1c0 mL无菌稀释瓶中,加入 2.7 g_0. g MMO-MIJG 培养基粉木(4.）.混和均匀.放人 36℃_1℃的培养箱（5.1)内培养24 h6.351孔定量盘法
6.3.1 量取100 mT.+0.rl.水样(6.1)十100 ml.无菌稀释瓶中,加人2.7g：0.5gMM(）MLG培养粉术(-1.1)，混摇均勾，使之完企溶解。6.3.2将水样（6.3.1)全部分装在宽量盘（5.)51个孔穴内，折平定量盘肯而以淤去孔穴内气泡，程控定量封1「机(5.5)封口，放人36℃二1℃的培养箱(5.)内培养21h，7结果报告
7.1结果判读
培养24h后的水样颜色变为黄色则为陷性反应，如果结果为叫疑阳性，可延长培养时间到28h，再进行结果判读。
7.2定性反应
7.2.1总大肠菌群：培养21h后的水样额色变为黄色则为阳性反应；否则为阴性反应。定性反成结果以I00mL水样巾总大畅菌群检山或未检山报告：7.2.2人肠埃希氏菌：培养24h后的水样颜色变为黄色的.在暗处川波长为3661m的紫外灯照射，有蓝色荧光产生判定为陷性反应；否则为阴性反应。定性反成结果以100ml.水样中人肠埃希氏菌检出或术检白报告，
7.351孔定量盘法
7.3.1总大肠菌群
NY/T 1665—2008
51孔定量盘巾黄色反应的孔穴计数，刘照驸录八巾表A，二香山其代表的总大场菌群最川能数(MPN)值，结果以MPN/100nL表示，注：稀释后检汇的水当.定量结果带乘以稀释告数7.3.2大肠埃希氏菌
51孔定最盘中荧光反应的孔穴数,对照附录A中表A.1套山其代表的大肠埃希氏菌最可能数（MPN)值，结架以MPN/10or1.表示汪：帮释后检测的水样，定量结果需渠以蒂释佑数，3
NY/T1665
附录A
【规范性附录】
51孔定量盘法不同阳性结果的最可能数(.MPN)及95%可信限A.151孔定量盘法不同阳性结果的最可能数（MPN及95%可信限表A.151孔定量盘法大肠菌群或大肠埃希氏菌最可能数(MIV)检索表阳性数
太肠菌拦战无虏埃希氏菌
(MP/200 r:L)
可低限
表A.１（续）
大场闲联或人肠希尚
(MPN/100 mL)
9元,7
95可信限
NY/T 1665-
—2008
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