【商检行业标准(SN)】 进出口食品沙门氏菌属检测方法 垂直膜过滤法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1059.6—2008
进出口食品中沙门氏菌属检测方法垂直膜过滤法
Determination of Salmonellae in food for import and export-Vertical membranefiltingmethod2008-07-17发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-02-01实施
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：吴斌、李叶、贾赞、王刚、孙杰。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。http：//foodmate.netSN/T1059.6—2008
1范围
进出口食品中沙门氏菌属检测方法垂直膜过滤法
本标准规定了进出口食品中沙门氏菌属-垂直膜过滤检测方法。本标准适合于所有进出口食品中沙门氏菌属的检测。2规范性引用文件
SN/T1059.6—2008
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准，SN0330出口食品中微生物学检验通则3方法原理
本方法是基于垂直过滤的方式使测试样品通过包被有特别沙门氏菌抗体的膜，样品中的沙门氏菌抗原与膜上抗体结合，通过酶偶合物将抗原抗体结合物显色。若是阳性样品，试剂中央就会出现蓝色的圆点，反之为无色或淡蓝色的圆点。4设备和材料
4.1滤器：一套，备有预滤器。
4.2滤膜：有机相或水相.孔径0.45um。4.3培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。4.4水浴箱：45℃±1℃.36℃±1℃。吸管：1mL、10mL，含有刻度。
4.6玻璃三角瓶和广口瓶：250mL、500mL。玻璃试管：17mm×170mm。
4.8玻璃珠：5mm。
4.9平皿：直径90mm。
天平：感量0.1g。
4.11均质器和均质杯。bzxz.net
5培养基和试剂
5.1缓冲蛋白陈增菌液：见第A.1章。5.2RVS肉汤：见第A.2章。
5.3XLD琼脂平板：见第A.3章。
5.4HE琼脂平板：见第A.4章。
5.5沙门氏菌检测试剂盒。
注：第9章中使用的试剂盒为美国BI.USPOT公司产品，其他公司等效试剂盒的操作步骤可能略有不间，应经试验评估验证后使用。
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SN/T 1059.6—2008
6抽样
按SN0330规定执行。
7样品制备和增菌培养
7.1无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
7.2固体、半固体食品：无菌操作取25g样品，放人装有225mL灭菌缓冲蛋白陈水增菌液的均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min，于37℃水浴培养18h士2h.进行前增菌：其后，移取0.1mL的前增菌液转种于盛有10ml.RVS肉汤的玻璃试管中，混合均勾.在41.5℃土1℃培养24h土3h，进行选择性增菌。
7.3干燥或干粉食品：无菌操作取25g样品，放人含适量玻璃珠的225mL灭菌缓冲蛋白陈水增菌液的玻璃三角瓶内，迅速振摇，幅度为30cm，7s内振摇25次，也可用机械振荡器振荡15s代替手摇，混勾样品后，37℃水浴培养18h士2h，进行前增菌：其后，移取0.1mL的前增菌液转种于盛有10mLRVS肉汤的玻璃试管中，混合均匀，在41.5℃士1℃培养24h士3h，进行选择性增菌。7.4液体食品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放人装有225mL灭菌缓冲蛋白陈水增菌液的玻璃三角瓶内，迅速振摇，幅度为30cm，7s内振摇25次，也可用机械振荡器振荡15s代替手摇，混匀样品后，37℃水浴培养18h土2h，进行前增菌；其后，移取0.1mL的前增菌液转种于盛有10mI.RVS肉汤的玻璃试管中，混合均匀，在41.5℃土1℃培养24h+3h.进行选择性增菌。8分离培养
8.1将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm接种环挑取一环划线于XI.D和HE琼脂平板，并于36℃±1℃，培养24h±3h。
8.2观察有无典型菌落或者可疑沙门氏菌菌落，如无典型或者可疑菌落，应再继续培养24土2h，然后再观察是否有可疑菌落。
9鉴定步骤
吸取250μL萃取剂至玻璃试管中。9.1
从选择性平板上挑取5个典型菌落，移至试管中，混合均匀，25℃培养10min。9.3
加800L中和剂，并均匀混合。
加200uL阴性质控液及样品萃取液到膜上加250偶合物。
加250μLTMB底物溶液。
加100μL的终止液。
着色后稳定几秒钟后判读结果：必须在5min内读取结果，否则无效。阳性质控按照9.1至9.8步骤操作。10结果判定
阳性质控结果应是蓝色，而且色度应明显比阴性质控的蓝色深；样品和阴阳性质控的颜色应是均匀的，没有斑点，可以看到整个测试区域表面；阴性质控结果应是无色或者是非常淡的蓝色。h
缓冲蛋白陈增菌液
蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钠（含12H2O）
磷酸二氢钾
蒸馏水
附录A
（规范性附录）
培养基
1000mL
SN/T1059.6—2008
将各成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至pH7.2士0.1，121℃高压灭菌15min。临用时，无菌操作分装至火菌玻璃瓶，每瓶225mL。2RVS肉汤
大豆蛋白陈
氯化钠
磷酸二氢钾
磷酸氢二钾
无水氯化镁
孔雀石氯
蒸馏水
1000ml
将各成分加人蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min.加热煮沸至完全溶解，调至pH7.2土0.1，121℃高压灭菌15min。临用时，无菌操作分装至灭菌玻璃瓶，每瓶225mL。A.3XLD琼脂
酵母提取汁
L-赖氨酸盐
脱氧胆酸钠
氯化钠
磷酸钠
柠檬酸胺铁
苯酚红
蒸馏水
1000ml
将各成分加入蒸馏水中，搅拌均勾，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至pH7.2士0.1，121℃高压灭菌15min。临用时，无菌操作分装至灭菌玻璃瓶，每瓶200mL。http：//
SN/T1059.6—2008
A.4HE琼脂
牛肉膏
水杨素
氯化钠
蒸馏水
0.4%溴麝香草酚蓝溶液
Andrade指示剂
18g20g
1000mL
将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液；将琼脂加人于600mL蒸馏水内，加热溶解加入甲液和乙液于基础液内，校正pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50℃～55℃，倾注平板。
甲液的配制
硫代硫酸钠
柠檬酸铁铵
蒸馏水
A.4.2乙液的配制
去氧胆酸钠
蒸馅水
A.4.3Andrade指示剂
酸性复红
1mol/L氢氧化钠溶液
蒸馏水
将复红溶解于蒸馏水中，加人氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液mL～~2 mL。
http：//
80029601/
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