【国家标准(GB)】 饲料中细菌总数的测定

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中华人民共和国国家标准
GB/T13093—-2006
代替GR/1309--1991
饲料中细菌总数的测定
Examination of bacterial count in fccds2006-12-12发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局致码防练
中国国家标准化管理委员会
2007-03-01实施
木标准足对19199饲料中细菌总数的测定方法》的修订。本标准5GB/T13093—891州比要差异如下：GB/T 13093—2006
根据（B3/T4789.22003食品卫牛微牛物学检验菌总数测定补允了广“表1缔释度选择及圳菌总数报光方式”：
30℃时菌落计数落游原标准从稀舜液到倾根据1S02833：2003食品和动物饲料中微生物学注语养基之间,时间不能超过 15 min.修改为不能超过 s0 min将组菌总数的单位修改为：菌落形成单位每克（或每毫升），即CH/g（mI.）)未标雅的附录A为规范性除录，
至标准自实前之H起，613/T130931991同时止。本标准山伞国饲料「业标准化技术委员会提出并叫口。本标雅起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京)，本标滩主要起草人：李丽蓓、饶止:华、杨曙明、苏晓鸥本标准上186车次发布，1991年第一次修订，本次为第一次修订1
1范围
饲料中细菌总数的测定
木标准现定了铜料中细的总数的测楚方法GB/T 13093—2006
本标准适用于配合伺料、然缩词料、饲料原料（血粉等）、牛精料补充料中细菌总数的测定。2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标谁的引用而成为本标谁的条款，儿是注日期的引用文你，其随后所有的修改单（不包括谢设的内容)或修计版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标雅达战协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准，(13/16882分析实家水规格和试验方法GH/T14699.1铜料采样
GB/T201952006动物伺物
试样的制备
3术语和定义
下列术和定义适用于本标准，
细菌总数 hacterial enunt
制料试样经过处理、在一定条件下（如培养成分、培养温度和时等)培养后，所得1鸟rL)战伴中含组菌总数，
迁：主差作为别定简料枝汀染程度的踪源，也可以应川这-方法戏案菌在饲中整殖的动态，以使对被检样品进行卫半学评价时提供设据，
4原理
战岸经过处理，税释至适当浓度，在-定条件（如用特定的培养基，在温度)℃十1℃培养72h+3h等)下培养后.所得？(ml)试样中所含细菌总数，5设备及材料
5.1分析天半感量C.1g
5.2震器：往复式：
扮碎机:非旋风库,密闭要妇
5.4高压灭南器：火菌t:~3k/cm
5.5冰粘：普通冰箱
5.6恒温水溶锅:46℃:=1r。
5.7 温培养箱;3℃-1℃。
5.8微型混合器。
5.9炭卤-角瓶:100 mt.,2.0 ml.,5a0 ml5. 10灭菌移被管:1 nml,10 ml..5. 11火弟试管;it mm160) mm。5.12灭肉玻璃珠：直径5mm。
GB/T:13093—2006
5.13灭菌培养血：直径 9 mml
5.14火菌金属勺、刀等，
6 培养基和试剂
营养琼脂培养基：见附录 A.
磷酸盐缓御波（稀释液）：见附录A，6.30.85※生理盐水：见附录A
6.4水琼脂培养基：地附录A.
6.5实验室常见消毒药品：
试样的制备
按照（GB/1146199，1进行采样，采样时成特别洋意样品的代表性和避免采花时的污染。按照H/T201952005进行样品的制备，蘑碎过0.43tnm孔径筛。样品应尽快检验，8测定程序
细菌总数测定程序见图1.
块状饲料、颗粒饲料
夺物饲料、原料
做儿个适当倍数的释释波
选择2个--3个适亢释度
各取1 mL,分别加入灭菌培养IL 内平血内加入适基肾荞原胎
30±1℃72 h±3l
菌落计数
细菌总数测定程序
粉状饲料
9测定步骤
9.1试样稀释及培养
GB/T 13093—2006
9.1.1以元菌操作称取式样（第7章)25g（或10g)：放于含有225mL（或90mL）稀释液或牛理盐水的火菌三的瓶中（脏内预置适当数量的玻璃臻），胃振荡器上·振荡30 min：经充分振摇后.制战110的均勾稀释藏，最好置均质器中&000 /min-10 000 r/min的速度处埋1inim9.1,2用 1 ml.灭苗吸管吸取［:10 稀释液1 mnl.沿管降慢慢注人含有 9 ml.灭菌稀释液或生理盐水的试管中（汗意吸管尖端不要触及管内释液)，振摇试管，或政微型混合器上，混合3,混合均勾，成1：10的稀释液.
9.1.3另取一只1 nL灭茵吸管,按上述操作方法,作10培递增稀释，刘此每递增稀释-次，即史换支灭菌暇管。
9.1.4根斯料卫牛标准要求或对试样浮来我度的估诈，选择2个~.3个适亢稀释度，外别行准0倍递增稀释的问时,即以吸取该稀释的吸管移1 ml,黏辞液引灭菌平Ⅲ内,每个稀释度作两个培养Ⅲ。9. 1. 5稀释液够人培养血后,成及时将凉至46%.±1℃的培养基(可改置46℃二1%:水浴钢内保湿)汗人培养而约ml.小心转动培养血使试样与培养充分混。从稀释试样到懒注培养之间时间不能超过30tun，
妇估计试样小所含微生物可能在培择基平正表面牛长时待培养基完全凝阅后.叮在培养表倾凉至45℃三1r的水晾脂培养基 ml9. 1. 6得琼脂凝固斥.倒置平Ⅲ于 30℃士1C恒温培养箱内培养 72 h±3 h 凹-计算平板内细菌总数日，细菌总数乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。9.2细菌总数计算方法
微平板菌落计数时，可用肉眼观察，如菌落形态小时可估助小段大镜检查，以防遗溺，在门算出各平板细凿总教后，求出问稀释度的两个平板菌落的平均值9. 3细菌总数计数的报告
9.3.1平板细菌总数的选择
选挥细菌总数在39-～300之间的平板作为细菌总数测定标准。律：释度使月必个平板菊落的平均数,两个平板其中一个平板有较人片状菌落尘长时,则不宜深用,而应以北片状菌落生长的平校曾落的平乌数作为该释度的细菌总数，若片状菌落不到平板的一半，而另。半菌落分布义很均勾，即可计算半个平板后乘2以代表全平川细菊总数。9.3.2稀释度的选择
9.3.2.1应选择平均细菌总数在3030)之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表1中例次1)，9.3.2.2若有两个稀释，其生长的细萄总数均在30-~303之.则视两者之比如何来决定，考其比值小丁或等于2.应报告其平均值：大于2则报告其巾较小的数字（见表1中例次2及例次3），9.3.2. 3若所有稀释度的均细菌总数均大于300,则应按稀释度最高的平均细菌总数以稀释倍数告之见表 1中例次1)。
9.3.2. 4若所有轿释度的平均细菌总效均小于30,则应按稀释度最低的平均继菌息数以烯释倍数报告之[见表【中例次5]。
9.3.2.5若所有稀释度均无苗落生长,则以小于：乘以最似稀释倍数报告之（见表1中彻次6)。9.3.2.6装所有稀释度的平均细案总数均不在30~300之叫，其中一部分大于300或小于30列.则以最接近30或500)的平均细随总数乘以稀释倍数报告之（况表1中例次7）9.3.3细菌总数的报告
细菌总效在100以内对,按其实有数报告，大于100时.采用两位有效数,在两位有效数学后而的数值以叫舍丘人方法修约。为了缩短数字后面的数·也可用10的指数表示（见表1）：3
GB/T13093--2006
多不可计
多不可计
率本可计
多不可计
多术可计
稀释度选择及细菌总数报告方式表1
稀释液及细菌总数
多不可计
稀释液之比
细菌总数/
LCFU/g( mI)]
37 750
31300:
30 500
报方式/
IGFU?g( mL)]
116c00或1.6×10
38 000 载 3. 9x:1
27 006 或 2.7× 10*
31C 060 或 3.1×10
270 或2. 7×102
31 000或3. 1×:3
附录A
《规范性附录)
培养基和试剂
除非特殊法明，所用试剂均为分析纯:水符合（B/T6682兰级水规格：4.1营养琼脂培养基
A.1.1成分
牛肉宵
氯化钠
蒸馏水
4.1.2制法
GB/T13093-2006
15 g--20 g
I 00o ml.
将除晾脂以外的各成分淬下蒸增水中,加人15%氢氧化钠溶液约2ml.校正pH牟\.2~7.4：加人琼脂，加热煮沸，使琼脂淬化。分装三角瓶，121高压灭菌20mlit1：江：此培养基供一般纠菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如菌落计数,琼脂量为1.5元；如推成平板或斜击,则应为
A.2磷酸盐缀冲液（稀释液）
A.2.1储存液
酸二氨钾
1ml/L氨氧化钠溶液
蒸馏水
4.2.2制法
1000 ml
先将磷酸盐溶解下 500 ml,蒸馅水巾,用1 mol/L氢氧化钠溶液较正 pII7. 1- 7. 2 后.再用蒸馏水稀释至 1 000 inL。
A.2.3稀释液
取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000ml：分装每瓶或每管9mL.121℃高压灭菌20minl。A. 3 0. 85%生理盐水
称取氯化钠（分析纯）8.5g，溶于1000ml.蒸馏水中：分装三角瓶，121七高压灭菌20min，A.4水琼脂培养基
A.4.1成分
蒸馅水
4.4.2制法
9 g18g
1 00o ml.
加热使琼脂化，校正pHs,8~-7.2。分装三角瓶中121℃高压灭菌20 min。5
GE/T13093—2006
[1] GB/T4789.2—2003
藝考文献
食品.L生微生物学检验
细菌总数测定二S书京，中国标雅出版GB/T13093-2006
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国家标准
饲料中细菌总数的测定
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2007年1月第一版
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