【国家标准(GB)】 饲料中总砷的测定

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T13079—2006
代替GB/T13079-1999
饲料中总的测定
Determination of total arsenic in feeds2006-12-12发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-03-01实施
本标推是GB/T13079-1999&饲料中总碑的测定的修订版。本标准与GB/T13079—1999的主要技术差异如下：增加量低检测浓度：
增加硫酸铜，碱式氯化铜的前处理：修改分析结果的计算与表述：
一添加氢化物原子荧光光度法。本标准自实施之日起，同时代替GB/T13079—1999。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）成都蜀星饲料有限公司。本标准主要起草人：王形、田静、高生、范理、幸玉芳、苏晓鸥、王韶辉。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-GB13079-1991:
GB/T13079-1999
GB/T13079—2006
1范围
饲料中总砷的测定
本标准规定了饲料中总碑的测定方法。GB/T 13079-2006
本标准适用于各种配合饲料、浓缩饲料，添加剂预混合饲料，单一饲料及饲料添加剂。最低检测浓度：银盐法为0.04mg/kg硼氢化物还原光度法为0.04mg/kg原子荧光光度法为0.010mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标谁达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物料试样的制备
3采样
按GB/T14699.1执行：
4试样制备
按GB/T20195执行。
5银盐法（仲裁法）
5.1原理
样品经酸消解或干灰化破坏有机物，使砷呈离子状态存在，经碘化钾，氯化亚将高价碑还原为三价砷，然后被锌粒和酸产生的新生态氢还原为砷化氢。在密闭装置中，被二乙氨基二硫代甲酸银（Ag）DDTC)的三氧甲烷溶液吸收，形成黄色或棕红色银溶胶，其颜色深浅与砷含量成正比，用分光光度计比色测定。形成胶体银的反应如下：AsH,+6Ag(DDTC)=6Ag+3H(DDTC)+As(DDTC)a5.2试剂和溶液
以下试剂除特别注明外，均为分析纯，水应符合GB/T6682二级水要求。5.2.1硝酸。
5.2.2硫酸。
5.2.3高氧酸。
5.2.4盐酸。
5.2.5乙酸。
5.2.6碘化钾。
5.2.7L-抗坏血酸。
GB/T 13079—2006
5.2.8无碑锌粒，粒径3.0mm士0.2mm5.2.9混合酸溶液（A）：HNO,+H.SO.+HCIO,=23+3+4。5.2.10盐酸溶液：c(HCI)=1mol/L量取84.0mL盐酸（5.2.4）.例人适量水中，用水稀释到1L。5.2.11盐酸溶液：c(HCI)=3mol/L量取250.0mL盐酸（5.2.4），倒人适量水中，用水稀释到1L5.2.12乙酸铅溶液：200g/L
5.2.13硝酸镁溶液：150g/L
称取30g硝酸镁LMgNO），·6H.O1溶于水中，并稀释至200mL5.2.14碘化钾溶液：150g/L起
称取75g碘化钾溶于水中，定容至500mL，存于棕色瓶中。5.2.15酸性氧化亚锡溶液：400g/L称取20g氯化亚锡（SnCl·2HzO）溶于50mL盐酸中，加人数颗金属锡粒，可用一周。5.2.16二乙氨基二硫代甲酸银（Ag-DDTC)-三乙胺-三氧甲烷吸收溶液：2.5g/L。称取2.5gC精确到0.0001g）Ag-DDTC于干燥的烧杯中，加适量三氧甲烷待完全溶解后，转人1000mL容量瓶中，加人20mL三乙胺，用三氛甲烷定容，于棕色瓶中存故在冷暗处。若有沉淀应过滤后使用。
5.2.17乙酸铅棉花：将医用脱脂棉在乙酸铅溶液(100g/L）没泡约1h，压除多余溶液，自然晾干，或在90℃100℃烘干，保存于密闭瓶中。5.2.18砷标准储备落液：1.0mg/mL精确称取0.660g三氧化砷（110℃，干燥2h），加5mL氢氧化钠溶液（5.2.21）使之溶解，然后加人25mL硫酸溶液（5.2.20）中和，定容至500mL。此溶液每毫升含1.00mg砷，于塑料瓶中冷贴。5.2.19砷标准工作落液：1.0μg/mL。准确吸取5.00mL标准储各溶液5.2.18）于100mL容量瓶中，加水定容，此溶液含碑50pg/ml..
准确吸取50μg/mL砷标准落液2.00mL，于100mL容量瓶中，加1mL盐酸，加水定容，据匀，此溶液每毫升相当于1.0g神。
5.2.20硫酸溶液：60mL/L。
吸取6.0mL硫酸，缓慢加人到约80mL水中，冷却后用水稀蜂至100mL5.2.21氢氧化钠溶液：200g/L。5.3仪器
5.3.1砷化氢发生及吸收装置（见图1)。5.3.1.1种化氢发生器：100mL带30mL40mL.50mL刻度线和侧管的锥形瓶。5.3.1.2导气管：管径为8.0mm~8.5mm尖端孔+为2.5mm~3.0mm.5.3.1.3吸收瓶：下部带5mL刻度线。5.3.2分光光度计：波长范围360nm800nm5.3.3分析天平：感量0.0001g。5.3.4可调式电炉。
5.3.5瓷地璃：30mL
5.3.6高温炉：温控0℃~950℃。2
5.4分析步骤
5.4.1试料的处理
5.4.1.1混合酸消解法
155±3
434-35
040±1
砷化氢发生及吸收装置
GB/T13079—2006
配合饲料及单一饲料，宜采用硝酸-硫酸-高氧酸消解法。称取试料3g~4g（精确到0.0001g），置于250mL凯氏瓶中，加水少许湿润试样，加30mL混合酸溶液（A）（5.2.9），放置4h以上或过夜，置电炉上从室温开始消解。待棕色气体消失后，提高消解温度，至冒白烟（SO）数分钟（务必赶尽矿硝酸），此时落液应清亮无色或淡黄色，瓶内溶液体积近似硫酸用量，残渣为白色。若瓶内溶液呈棕色，冷却后添加适量硝酸和高氧酸，直到消解完全。冷却，加10mL盐酸落液（5.2.10）煮沸，稍冷，转移到50mL容量瓶中，用水洗涤凯氏瓶3次～5次，洗液并人容量瓶中，然后用水定容，摇勾，待测。试样消解液含种小于10rg时，可直接转移到砷化氢发生器中，补加7mL盐酸，加水使瓶内济液体积为40mL，从加2mL碘化钾起以下按5.4.3操作步骤进行。同时于相同条件下，做试剂空白实验。5.4.1.2盐酸溶样法
5.4.1.2.1矿物元素饲料添加剂不宜加硫酸，应用盐酸溶样。称试样1g~3g（精确到0.0001g）于100mL高型烧杯中，加水少许湿润试样，慢慢滴加10mL盐酸溶液（5.2.11).待激烈反应过后，再缓慢加人8mL盐酸，用水稀释至约30mL煮沸。转移到50mL容量瓶中.洗涤烧杯3次~4次，洗液并人容量瓶中，用水定容，摇勾，待测。试样消解液含碑小于10g时，可直接转移到发生器中，用水稀释到40mL并煮沸，从加2mL碘化钾起以下按5.4.3操作步骤进行。另外，少数矿物质饲料富含硫，严重干扰碑的测定，可用盐酸溶解样品后，往高型杯中加人5mL乙3
GB/T13079—2006
酸铅溶液（5.2.12）并煮沸·静置20min，形成的硫化铅沉淀过滤除之，滤液定容至50mL，以下按5.4.3规定步骤进行。
同时于相同条件下，做试剂空白实验。5.4.1.2.2硫酸铜、式氧化铜溶样：称取试样0.1g~0.5g（精确到0.0001g）于种化氢发生器中（若遇砷含量高的样品时，应先定容，适当分取试样，使试液中碑含量在工作曲线之内），加5mL水溶解，加2mL乙酸（5.2.5）及1.5g碘化钾（5.2.6）放置5min后，加0.2gL-抗坏血酸（5.2.7）使之溶解，加10mL盐酸，然后用水稀释至40mL，摇匀，按9.3规定步骤操作。同时于相同条件下，做试剂空白实验。5.4.1.3干灰化法
添加剂预混合饲料，浓缩饲料、配合饲料，单一饲料及饲料添加剂可选择干灰化法。称取试样2g~3g（精确到0.0001g）于30mL瓷甘埚中，加人5mL硝酸镁落液（5.2.13），混匀于低温或沸水浴中蒸干，低温碳化至无烟后，然后转人高温炉于550C恒温灰化3.5h~4h。取出冷却，缓慢加人10mL盐酸溶液（5.2.11），待激烈反应过后，煮沸并转移到50mL容量瓶中，用水洗涤地埚3次～5次，洗液并人容量瓶中，定容，摇勺，待测。所称试样含碑小于10μg时，可直接转移到发生器中，补加8mL盐酸，加水至40mL左右，加人1g抗坏血酸C5.2.7)溶解后，按5.4.3规定步骤操作。同时于相同条件下，做试剂空白实验。5.4.2标准曲线绘制
准确吸取碑标准工作溶液（1.0μg/mL）0.00mL.1.00mL2.00mL、4.00mL.6.00mL8.00mL10.00mL于发生瓶中，加10mL盐酸，加水释至40mL，从加人2mL碘化钾起，以下按5.4.3规定步骤操作，测其吸光度，求出回归方程各参数或绘制出标准曲线。当更换锌粒批号或新配制Ag-DDTC吸收液，碘化钾溶液和氧化亚锡溶液，均应重新绘制标准曲线。5.4.3还原反应与比色测定
从5.4.1.1.5.4.1.2.5.4.1.3处理好的待测液中，准确吸取适量溶液（含量应≥1.0μg）于砷化氢发生器中，补加盐酸至总量为10mL，并用水稀释到40mL，使溶液盐酸浓度为3mol/L然后向试样溶液，试剂空白溶液、标准系列溶液各发生器中，加人2mL碘化钾溶液（5.2.14），摇勾，加人1mL氯化亚锅溶液（5.2.15）.摇勾+静置15min准确吸取5.00mLAg-DDTC吸收液于吸收瓶中，连接好发生吸收装置C勿混气，导管塞有膨松的乙酸铅棉花），从发生器侧管迅速加人4g无砷锌粒，反应45min.当室温低于15C时，反应延长至1h。反应中轻据发生瓶2次，反应结束后，取下吸收瓶，用三氧甲烷定容至5mL，摇匀，测定，以原吸收液（5.2.16）为参比，在520mm处，用1cm比色池测定。5.5分析结果的计算与表达
5.5.1结果计算
试样中总砷含量X，以质量分数（mg/kg）表示，按式(1)计算：X=(A,-A,)×VX1000
mXV,X1000
V.一试样消解液定容总体积，单位为毫升（mL）：V.分取试液体积，单位为旁升（mL)A——测试液中含砷量，单位为微克(μg)：A试剂空白液中含钟量，单位为微克（ug）：m—试样质量，单位为克（g)。
若样品中碑含量很高，可用式（2）计算：（1)
式中：
X=(A,-A,)XVXVX1000
mXVXV.X1000
一试样消解液定容总体积，单位为毫升（mL）：分取试液体积，单位为毫升（mL）V一一分取液再定容体积，单位为毫升（mL）：V-一测定时分联V的体积，单位为毫升（mL）一测定用试液中含种量，单位为微克（rg）：A2
A试剂空白液中含碑量，单位为微克（μg）试样质量，单位为克（g）。
5.5.2结果表示
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每个样品应做平行样，以其算术平均值为分析结果，结果表示到0.01mg/kg。当每千克试样中含砷量≥1.0mg时，结果取三位有效数字，5.5.3充许差
分析结果的相对偏差，应不大于表1所列充许差表1分析结果充许差
饲料中含碑盘/（mg/kg）
1.00~5.00
5.00~10.00
6硼氢化物还原光度法（快速法）6.1原理
充许相对情差/（%）
≤20%
≤10%
样品经酸消解或干灰化破坏有机物，使砷呈离子状态存在，在酒石酸环境中，翻氢化钾将砷离子还原成氢化砷（AsH）气体。在密闭装置中，被Ag-DDTC三氯甲烷溶液吸收，形成黄色或棕红色银溶胶，其颜色深没与砷含量成正比，用分光光度计比色测定。6.2试剂溶剂
除下列试剂外，其他试剂同第5章。6.2.1混合酸落液(B):HNO,+HSO,+HCIO,=20+2+3。6.2.2甲基橙水溶液：1g/L:pH3.0红)~4.0橙)。6.2.3氨水溶液：1十1。
6.2.4酒石酸溶液：200g/L.
称取100g酒石酸加水适量，稍加热溶解，冷却后定容500mL.6.2.5硼氢化钾片：KBH，：NaCl-1.5将硼氢化钾和氯化钠按质量比1：5比例混勾，于90100℃干燥2h，压力为2kPa条件下，压制成直径10mm，厚5mm，每片质量为1.0g士0.1g。压制及贮存中应防潮湿。6.3设备
6.4分析步骤
6.4.1试料的处理
GB/T 13079—2006
6.4.1.1混合酸消解法
配合饲料及单一饲料，宜采用三酸消解法。称取试样2.0g~3.0g（精确到0.0001g），于250mL凯氏瓶中，加水少许湿润试样，加25mL混合酸溶液（B）（6.2.1），置电炉上从室温开始消解，待样液煮沸后，关闭电炉10min~15min，继续加热消解，直至冒白烟（SO）数分钟，此时溶液应清亮无色或淡黄色，体积近似硫酸用量，残渣为白色。稍冷，转移到100mL化氢发生器中，洗涤凯氏瓶3次一4次，用水洗液并人发生器中，使瓶内溶液体积为30mL左右。以下按6.4.2、6.4.3操作步骤进行。同时于相同条件下，做试剂空白实验。注，清解时赶尽硝酸，否期结果偏低。6.4.1.2盐酸溶样法
矿物元素饲料添加剂不宜加硫酸，应用盐酸溶样。称取试样0.5g~2.0g（精确到0.0001g）于发生器中，慢慢滴加5mL盐酸溶液（5.2.11），待激烈反应过后.再缓慢加人3mL~4mL盐酸，用水稀释至约30mL煮沸，试样溶解后按6.4.2.6.4.3操作步骤进行同时于相同条件下，做试剂空白实验。6.4.1.3干灰化法
添加剂预混合饲料、浓缩饲料、配合饲料、单一饲料及饲料添加剂可选择干灰化法。称取试样1.0g~2.0g（精确到0.0001g）于30mL瓷竭中，低温碳化完全后转人高温炉中，于550C恒温灰化3h。取出冷却，缓慢加人10mL盐酸溶液（5.2.11)，待激烈反应过后煮沸并转移到碑化氢发生器中，加水至30mL左右，加人1g抗坏血酸（5.2.7）溶解后以下按6.4.2.6.4.3操作步骤进行。
同时于相同条件下，做试剂空白实验。6.4.2氢水（1+1)调溶液pH值
发生器中加人2滴甲基检指示剂（6.2.2).用氨水（1+1)C6.2.3）调PH值至色，再滴加盐酸溶液（5.2.10）至刚好变红色。加人6.0mL酒石酸溶液（6.2.4），用水蒂释至50mL。6.4.3还原反应与比色测定
准确吸取5.00mL吸收液于吸收瓶中，连接好发生吸收装置（勿漏气，导管塞有膨松的乙酸铅棉花），从发生器侧管迅速加人酮氢化钾一片，立即盖紧塞子，反应完毕再加第二片。反应时轻轻据动发生器2次~3次，待反应结束后，以原吸收液（5.2.16）为参比，在520nm处，用1cm比色池测定。注：还原反应时，应防止有毒钟化氢气体泄摄。6.4.4标准曲线绘制
准确吸取碑标准工作落液（l.0μg/mL>0.00mL1.00mL.2.00mL4.00mL.6.00mL.8.00mL于发生瓶中，加水至40mL，加人6mL酒石酸溶液（6.2.4），以下按6.4.3规定步骤操作，测其吸光度，求出回归方程各参数或绘制出标准曲线。6.5分析结果的计算与表述
7氢化物原子荧光光度法（快速法）7.1原理
样品经酸消解或干灰化破坏有机物，加人硫脲使五价砷预还原为三价碑，再加人翻氢化钠或翻氢化钾使还原生成砷化氧，由氢气载人石英原子化器中分解为原子态砷，在特制神空心阴极灯的发射光激发下产生原子荧光，其荧光强度在固定条件下与被测波中的种浓度成正比，与标准系列比较定量。7.2试剂溶液
7.2.1氢氧化钠溶液（0.5%）。
7.2.2硼氢化钠（NaBH.）溶液（1%）：称取硼氢化钠10.0g，溶于氢氧化钠溶液（7.2.1)1000mL中，6
混合（现用现配为宜）
7.2.3硫脲溶液（50g/L）。
7.2.4氧氧化钠溶液（100g/L）。7.2.5标准落液（5.2.18.5.2.19)。7.3仅器
原子荧光光度计。
7.4分析步骤
7.4.1试料的处理
7.4.1.1盐酸溶样法
GB/T 13079—2006
矿物元素饲料添加剂用盐酸溶样。称取试样1g~3g（精确到0.0001g）于100mL高型烧杯中，加水少许湿润试样，慢慢滴加10mL盐酸液（5.2.11)，待激烈反应过后，煮沸并转移到50mL.容量瓶中，向容量瓶中加人2.5mL硫腺溶液（7.2.3），用水洗涤烧杯3次~4次，洗液并人容量瓶中，用水定容，据匀，待调同时做试剂空自同时于相同条件下，做试剂空白实验。7.4.1.2干灰化法
添加剂预混合饲料，浓缩饲料、配合饲料，单一饲料及饲料添加剂可选择干灰化法。称取试样2g~5g（精确到0.0001g）于30mL瓷埚中，加人5mL硝酸镁溶液5.2.13），混匀，于低温或沸水浴中蒸干，低温碳化至无烟后，然后转人高温炉于550℃恒温灰化3.5h～4h。取出冷却，缓慢加人10mL盐酸溶液（5.2.11)，待激烈反应过后，煮沸并转移到50mL容量瓶中，向容量瓶中加人2.5mL硫腺溶液（7.2.3），用水洗涤璃3次~5次，洗液并人容量瓶中，用水定容，摇勺，待测。同时做试剂空白。
同时于相同条件下，做试剂空白实验。7.4.2标准系列制备
准确吸取碎标准工作溶液(1.0pg/mL)0.00mL.0.10ml.0.4mL.1.00mL.4.00mL.10.00mL于50mL容量瓶中各相当于种浓度0ng/mL.2.0ng/mL.8.0ng/mL.20.0ng/mL，80.0ng/mL200.0ng/mL）.各加1.5mL盐酸（5.2.4），2.5mL硫溶液（7.2.3），加水至刻度，摇匀，待测。7.4.3测定
7.4.3.1仪器参考条件
光电信增管电压：200V400V：
碑空心阴极灯电流：15mA~100mA：原子化器温度：200℃：
原子化器高度：8mm
载气流量：300mL/min600mL/min屏蔽气流量：800mL/min
读数时间：7.0s~15.0s：
延迟时间：1:0s~1.55。
7.4.3.2测定方式
荧光强度或浓度直读。
7.5分析结果的计算与表述
7.5.1计算公式同5.5.1。
7.5.2结果表示同5.5.2
7.5.3充许差：在相同条件下获得分析结果的相对偏差不得超过15%。
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