【商检行业标准(SN)】 出入境口岸肠出血性大肠杆菌0157:H7监测规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2075—2008
出入境口岸肠出血性大肠
杆菌O157:H7监测规程
Codes of surveillance for enterohemorrhagicEscherichia coli 0157:H7 at entry-exit port2008-04-29发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2008-11-01实施
本标准的附录A为规范性附录，附录B和附录C为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口SN/T2075—2008
本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国东莞出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：师永霞、幸芦琴、李祖海、洪烨、郭波旋、李小波、相大鹏、黄吉城、郑夔本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I
1范围
SN/T2075—2008
出入境口岸肠出血性大肠杆菌0157：H7监测规程本标准规定了出人境口岸肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的监测对象、监测内容及方法、结果判断、疫情报告、疫情处理和监测报告。本标准适用于出人境口岸肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的监测。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。SN/T1215入出境客运列车除虫规程SN/T1861—2007出入境口岸突发公共卫生事件应急处理规程总则肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻监测方案（试行）（卫生部）全国病媒生物监测方案（试行）（卫生部）3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
肠出血性大肠杆菌EnterohemorrhagicEscherichiacoli，EHEC能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌，以O157：H7血清型为代表菌株。肠出血性大肠杆菌感染后的典型临床表现为轻度腹泻、出血性结肠炎（HC）、溶血性尿毒综合症（HUS）、血栓性血小板减少性紫癜（TTP)等。其中HUS病程凶险，易造成急性肾衰竭乃至死亡。4监测对象
4.1出人境口岸出入境人员、交通员工、出人境口岸食品生产经营和公共场所服务行业从业人员。4.2宿主动物和媒介昆虫
4.3出人境口岸范围的水、食物。5监测内容
5.1人群监测
重点监测出人境人员、交通员工、出人境口岸食品生产经营和公共场所服务行业从业人员中的腹泻病人和带菌者。
5.2动物监测
监测动物种类以出入境口岸范围的家禽家畜为主，牛、羊、鸡、猪作为主要监测动物，在肠出血性大肠杆菌0157：H7感染流行区为提供出口产品的养殖场、奶牛养殖场也应列入监测范围之内。5.3媒介昆虫监测
蓝测出入境口岸内传播肠出血性大肠杆菌0157：H7感染性腹泻的医学媒介生物的分布与带菌情1
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况、主要是蝇类、董等。
5.4其他监测
主要包括出人境口岸内的水源和食品的污染情况。5.5监测指标
感染率、发病率、死亡率、病死率和罹患率6监测方法
6.1资料的收集和分析
6.1.1资料的收集内容
三间分布特征、疫情强度与流行趋势、与疫情相关的宿主动物、媒介和食品等信息。6.1.2疫情信息来源
国内外肠出血性大肠杆菌0157：H7的疫情资料来源有以下几种一通过世界卫生组织（WHO)网站（http：//who.int）、美国疾病预防控制中心（CDC)）网站（http：//cdc.gov）、国家质量监督检验检疫总局网站（http：//ciq.gov.cn）、《流行病学周报》及《国际传染病疫情》获得世界各国肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的疫情信息；通过中国卫生部网站（http：//moh.gov.cn）、中国疾病预防控制中心（CDC）网站（http：//chinacdc.net.cn）、国家质量监督检验检疫总局网站（http：//ciq.gov.cn）、中国CDC发布的《全国疫情周报》获得国内各省、市、自治区肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的疫情信息；
一通过所在省、市、自治区疾病预防控制中心的网站及其发布的《疫情信息》获得本省、市、自治区肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的疫情信息。6.1.3疫情信息分析
系统地对国内外肠出血性天肠杆菌O157：H7感染的疫情信息进行汇总分析，预测当地出入境口岸肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的流行趋势，为口岸加强流行区进出口食品和家禽家畜监测以及制定预防控制措施提供依据。
6.2人群监测方法
6.2.1现场监测
对出入境人员进行现场检疫监测，通过医学观察、健康咨询、体温监测并结合出人境健康声明情况进行流行病学情况分析，对原因不明的腹泻病人进行登记，采集粪便和血液标本送检，以期早期发现感染者。
6.2.2日常监测
对出入境口岸食品和公共场所从业人员、出人境交通员工，通过日常监督，发现可疑的肠出血性大肠杆菌0157：H7腹泻感染对象并及时确诊。6.3宿主动物和媒介监测方法
6.3.1对出人境口岸地区进行鸡、牛、羊、猪等家禽家畜的监测（见《肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻监测方案（试行）》）
6.3.2对出人境口岸地区进行蝇类、董嫌等昆虫的监测（见《全国病媒生物监测方案（试行）》）。6.4食品、水源等监测方法
6.4.1在肠出血性大肠杆菌O157:H7流行季节，对疫点周围及相关的水源进行重点监测，对其他易受污染的水源应加强监测，定期采样检测。6.4.2对易受污染的鸡、猪、牛、羊等禽畜生、熟肉等食品采样检测。6.5流行病学调查
6.5.1接到病例报告后，监测人员应及时开展现场流行病学调查。2
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6.5.2对疑似、原因不明的发热腹泻者、临床诊断和确诊病人应及时采集粪便送检并填写个案调查表（见SN/T1861一2007附录B），以确定密切接触者，追踪传染源，确定传播途径。6.6实验室检测
6.6.1标本的采集和送检
标本的采集和送检要求见附录A，检验单的填写参见附录B。6.6.2实验室检测
实验室检测方法见《肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻监测方案（试行）》的附件2。肠出血性大肠杆菌O157:H7毒素基因的PCR检测参见附录C。7结果判定
7.1疑似病例
符合以下条件之一者，即为疑似病例：一有鲜血便、低烧或不发烧、挛性腹痛的腹泻病例：一腹泻若干天后继发少尿或无尿等表现的急性肾功能衰竭病例；腹泻病人粪便标本O157抗原免疫胶体金检测阳性者7. 2确诊病例
疑似病例或其他腹泻病患者，具有以下条件之一者即为确诊病例：从粪便标本中检出产生志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157：H7：或恢复期血清O157脂多糖(LPS)IgG抗体呈4倍升高；或经蛋白印记试验证实血清标本有与O157LPS、或肠出血性大肠杆菌溶血素、或志贺毒素分子量一致的特异性抗体；从粪便标本中检出不产生志贺毒素1（Stx1）、志贺毒素2（Stx2）及其变种的肠出血性大肠杆菌O157:H7,亦为确诊病例；
一一在流行区内，经专家组确认，符合流行病学诊断，并排除其他疾病的疑似病例，为临床符合病例。
8疫情报告
8.1报告时限
监测中发现肠出血性大肠杆菌O157：H7感染者和疑似感染者，应在24h内向上级检验检疫机关报告，同时向当地卫生行政部门通报。8.2报告内容
主要包括传染病报告卡、病人个人资料、流行病学资料、临床资料和实验室检测结果8.3死亡与订正报告
8.3.1原报告的肠出血性大肠杆菌0157：H7感染病人死亡时，应立即向原报告的机构发出死亡报告。
8.3.2原报告的肠出血性大肠杆菌O157:H7感染病人应尽快确诊或排除，并在确诊或排除后立即向原报告机构发出疫情订正报告。9疫情处理
9.1医学措施
9.1.1病人或受染者
检验检疫机关应将肠出血性大肠杆菌O157：H7病人和受染者转移至口岸隔离留验室或相对独立的区域进行隔离留验，并尽快通知定点医疗机构接运病人或受染者进行进一步诊治。经过治疗，病人和受染者在临床症状、体征消失后，连续3次粪检阴性方可解除监管。隔离治疗期间，应对病人的排泄物3
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随时进行严格消毒和处理
9.1.2染疫嫌疑人
应注意个人卫生防护，进行自我监视和医学观察，防止接触、控制来访者。9.1.3染疫动物或来自疫区的动物对染疫动物或来自疫区的动物应移交动物检疫部门处置9.1.4蝇类、董等昆虫
按照SN/T1215的杀虫剂的剂量、使用范围和特点除虫。9.1.5食物和水
对被污染食物进行深理；
一对可疑被污染食物，尽早采取控制措施，采集样本后立即就地封存，追回并转移同批扩散在外的可疑食物；
一对被污染的水体应暂停使用，查出并排除污染源后，连续3次水样检测阴性方可恢复正常用水。
9.1.6口岸场所、交通工具等的消毒处理受污染的口岸场所、交通工具、货物和物品等不应移运并按照SN/T1861采取相应的消毒措施。9.2预防措施
检验检疫机关应加强出入境口岸出人境人员的卫生检疫查验；加强出入境口岸食品生产经营和公共场所服务行业的卫生监督。
监测报告
10.1监控结果报告
检验检疫机构应对出人境口岸地区肠出血性大肠杆菌O157：H7感染病例进行病原学、宿主动物与媒介生物及食品监测，并对数据和资料进行定期系统地收集、汇总、分析、解释和评价，将结果及时向上级主管部门报告。
10.2流行趋势分析和防控措施
根据监测信息预测出人境口岸地区肠出血性大肠杆菌O157：H7疫情发生的风险和流行趋势，及时发现监测系统出现的“盲区”和高危地区，有针对性地采取有关预防及控制措施，并为制定和调整防治肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的策略提供依据A.1标本采集、送检及菌株分离
附录A
（规范性附录）
标本的采集和送检要求
SN/T2075—2008
A.1.1病人粪便标本采集：以采集腹泻病人血性水样便为主。粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集，同时应采集新鲜粪便，选取有脓血、粘液部分的成形便3g～5g，水样便取含絮状物的1mL～3mL，盛于无菌容器中及时送检。若无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门3cm~5cm深处（小儿2cm～3cm），轻轻转动一圈，擦取直肠表面的黏液后取出，插人卡里-布莱尔（Cary-Blair）半固体保存培养基运送培养基或保存液中送检。注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集2支肛
A.1.2病人血液标本采集：采集患者急性发病期（3d内）和恢复期（2周左右)各3mL全血，分离血清送检。
腹泻病人粪便标本采集后，应在24h内送至实验室进行增菌、培养、分离和分子生物学鉴定。病人血液标本采集后，应在24h内送至实验室进行血清学的蛋白印记试验。A.1.4
水、食品、环境标本采集后，应在24h内送至实验室进行增菌、培养、分离和分子生物学鉴定。A.1.5
样品检验单应填写完整，与样品一起送实验室。样品检验单参见附录B。应提供与分离菌株相A.1.6
对应的患者的临床资料和流行病学资料。A.1.7使用免疫磁珠富集技术和山梨醇麦康开琼脂或科玛嘉琼脂分离肠出血性大肠杆菌O157:H7；按照山梨醇不发酵、O157：H7特异性血清初筛、生化反应鉴定和PCR鉴定的程序进行肠出血性大肠杆菌0157：H7的初筛和鉴定。初筛阳性的菌落和可疑菌落应该保存下来，交确诊实验室进行分子生物学鉴定和分型。
A.2送交鉴定和分型菌株的要求
经过分纯的没有污染的菌株应该用甘油半固体保存，A.2.1
A.2.2与分离菌株相对应的患者的临床症状和流行病学资料A.2.3当地的肠出血性大肠杆菌O157:H7或EHEC的分离率资料。5
SN/T2075—2008
送检单位：
姓名性别年龄
家庭住址
附录B
（资料性附录）
腹泻病人粪便样品采样登记表
临床症状
发病日期
（腹泻、腹
痛、呕吐等）
体温/
性状?
送检时间：
使用抗生
素（药名、
时间）bzxZ.net
采样时间
0157Stxl
注：适用于疑似病人、肾衰病人及密切接触者；大便标本、血标本和尿标本使用同样编号：关联者编号和与病人关系必须填写，不能遗漏。
脓血便；4——黑便；5—粘液便；6—米油水样便；7—水样便；al
鲜血样便；2—血便相混；3——8——稀便：9——正常。
附录C
（资料性附录）
肠出血性大肠杆菌0157:H7毒素基因的多重PCR检测SN/T2075—2008
C.1志贺毒素1(stx1）、志贺毒素2(stx2）、粘附抹平因子（eae)及溶血素（hlyA)毒力基因的PCR引物下列4对引物分别根据肠出血性天肠杆菌O157：H7的stxl、stx2、eae和hlyA毒素基因的序列设计（见表C.1)，具有高度特异性，可作使用时参考。表C.1引物序列及扩增片段大小
stxl-A
stxl-B
stx2-A
stx2-B
hlyA-A
hlyA-B
C.2多重PCR扩增
碱基序列
预期扩增长度/bp
取PCR管编号.PCR反应体积为25μL，含1×PCRbuffer、氯化镁（MgCl2）2.0mmol/L、dNTPs0.2mmol/L，4对引物各1μmol/L，Taq酶0.63U。充分混匀后，在离心机上将管内液体甩人管底。细菌转接普通营养琼脂平板，37℃生长过夜后，用接种针针尖直接挑取少量菌苔（菌量以肉眼可见即可）于PCR反应液内，进行PCR扩增。反应程序为：94C5min，然后94℃30s、58C30S、72℃45s，35个循环，最后72℃延伸2min。
C.3电泳分析
扩增结束后在管中加人上样缓冲液，用含0.5μg/mL溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，用凝胶成像系统照相记录结果。C.4结果判定
如阴性对照和空白对照未出现条带，阳性对照和待测样品均出现预期大小的扩增条带，则可初步判断肠出血性大肠杆菌O157：H7中含有对应的毒素，应进一步进行确证实验。如果待测样品中未出现预期大小的扩增产物，则可判断肠出血性大肠杆菌O157:H7中不含有对应的毒素。5测序
如有必要，可将PCR扩增产物进行序列测定，确定其碱基组成并与已经发表的毒素基因的序列进行比对，判断肠出血性大肠杆菌O157：H7中是否含有以上毒素。
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