【地方标准】 桑蚕中肠型脓病诊断技术规程

DB51/T1367-2011 桑蚕中肠型脓病诊断技术规程
发布单位：四川省质量技术监督局
实施日期：2012-03-01
起草单位：四川省蚕业管理总站、乐山市蚕种质量检疫检验站、内江市蚕种质量监督检验站
主要起草人：吴钢、张学清、马露芸、颜建平、何东

1 范围
本标准规定了桑蚕中肠型脓病诊断的技术要求，适用于四川省桑蚕中肠型脓病的诊断。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。
- GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法
- DB/T1207 桑蚕血液型脓病诊断技术规程

3 术语和定义
3.1 桑蚕中肠型脓病（质型多角体病）
桑蚕中肠型脓病是质型多角体病毒寄生于桑蚕中肠圆筒状细胞，并在细胞质内形成多角体的蚕病，又称质型多角体病。

4 试剂
4.1 盐酸溶液 [c(HCl)=1 mol/L]
4.2 分析用水按 GB/T6682 规定执行

5 仪器、设备
普通光学显微镜、相差显微镜、冰箱、载玻片、盖玻片、乳钵、乳棒、解剖剪、镊子、吸管、量筒、烧杯、样品袋、冻存管（1.8 mL、5 mL）

6 诊断方法
6.1 肉眼诊断
6.1.1 外观观察
- 群体症状：群体发育显著不齐
- 个体症状：病蚕体躯瘦小，食桑及行动不活泼，常呆伏于蚕座周边或蚕沙中；大蚕病蚕体色灰白，胸部半透明，缩小，吐液及下痫；严重时排便伴乳白色粘液
6.1.2 解剖观察
用手挤压具有上述症状的病蚕尾部，观察是否有乳白色粘液排出；用解剖剪从背中线剪开，观察中肠后部是否有乳白色皱褶
6.1.3 初步诊断
幼虫阶段的蚕出现上述症状，挤压病蚕尾部有乳白色粘液排出，解剖观察中肠后部有乳白色皱褶，可初步诊断为中肠型脓病

6.2 显微镜诊断
6.2.1 样品采集
采集具有个体症状的病蚕，置于样品袋或冻存管中
6.2.2 样品处置
6.2.2.1 样品保存：样品随机分成两份，一份作检样，一份作备样，置于 0℃～4℃ 冰箱中，保存期 30～60 天
6.2.2.2 样品制备：挤压病蚕胸部与尾部，取排泄液和肠液涂抹于载玻片上制成肠液样本；剪取中肠后部小块组织置于载玻片上，滴入 1～3 滴蒸馏水，轻压制成中肠组织样本
6.2.3 显微镜检查
6.2.3.1 直接检查法：将样本置于显微镜（15×40倍或16×40倍）下观察多角体，每个样本不少于 20 个视野
6.2.3.2 多角体与类似颗粒鉴别：用盐酸溶解法，取病蚕中肠组织，蒸馏水清洗后磨碎，涂抹于载玻片，阴干，滴 1～3 滴盐酸溶液，室温放置 3～5 分钟，用蒸馏水洗去酸液后镜检，类似颗粒溶解消失，多角体存在
6.2.3.3 核型多角体与质型多角体鉴别：用焦宁甲基绿染色法，参见 DB/T1207 桑蚕血液型脓病诊断技术规程
6.2.4 判定
镜检发现有多角体存在，呈六角形、不规则四角形及三角形，大小不整齐，可诊断为桑蚕中肠型脓病