【水产行业标准(SC)】 无公害食品腹泻性贝类毒素的测定生物法

ICS67.050
中华人民共和国水产行业标准
SC/T3024—2004
腹泻性贝类毒素的测定
Deternination of diarrhoea shellfish poison2004-01-07发布
生物法
Bioassay
2004-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准参考了日本厚生省推荐使用的腹鸿性贝类毒素的测定方法本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人共和国农业部提出。SC/T3024—2004
本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所。本标雅主要起草人：王联珠、袁骐、李晓川、冷凯良，陈亚翟、蒋玫1范围
腹泻性贝类毒素的测定，生物法本标雁规定了腹泻性贝类毒素（DSIP）的测定方法生物法本标准适用于较体动物贝类可食部分中腹泻性类毒素（ISP）的测定，2原理
SC/T3024-2004
用内酮提取贝类中毒素，冉转移至乙醚中，经减压浓缩蒸于后，再以1%吐温-60生理盐水溶解残留物，注射小鼠，观察存活情况，计算其毒力：3试剂和材料
3.1丙（分析纯)。
3.2乙醚（分析纯)。
3.31%叶温60生理盐水；称取1.0g叶溉60，溶于生理盐水（0.8%NaCI）中，并定容至100.0mL.
4仪器和设备
4.1旋转蒸发器.
4.2均质器www.bzxz.net
4.3磨口烧瓶：圆底、500rL、100mL：4.4布氏漏斗：争100mm
4.5分液漏斗：具塞、500mL：
4.6犬平：感民0.1号
4.7刻度试管：10 rnL，具寒
4.8冰箱：0℃5C和～15t～-20t.4.9注射器：1mL，
4.10注射器针头：8
4.11小鼠：体重为16 g~20 g的αICR系雄性小鼠，5检样的制备
5.1生鲜带壳的贝类
a）清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来质，仔细取出贝肉，切勿削破肉体；
h）收集贝肉，沥水5 min，捡出碎壳等杂物，迅速冷陈，贮藏备用；c）注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化育囊，组织旱暗绿色或褐绿色），开尧前不能加热或用麻酵剂：
5.2冷冻贝类
在室温下，使冷冻的样品（带壳或去壳的）呈半冷冻状态，按5.1方法清洗、再壳、淋洗、SC/T3024--2004
取肉。
5.3取样
a）前以切取中肠腺的！类（扇贝，贻贝、牡蛎等），称取200g贝肉后，行细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细切混合作为检样，注意不要使中肠内容物染案板；h）对于尚未确定部位葬性的贝类皮不易切取中肠腺的小型贝肉，可将全部以肉细切、混合，竹为检样；
c）为避免毒案的危害，应戴于套进行检验操作，移液管等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中漫泡1h以1、以使毒素分解；废弃的提取液等也应用5%的次氟酸钠溶液处理。
6提取
6.1取5.3a）处理的中肠腺，或5.35）处理的200g贝肉管于均质杯内，均质2mim。6.2加3倍量丙翻，与样品充分搅拌均句后，用布氏漏斗抽滤并收集提取液。对残渣以检样两倍量西酮再次抽滤两砍，合并抽滤液6.3将抽提液移人500mL的磨口烧瓶，减压浓缩（旋转蒸发，56℃）去除内、直至在液体表面分离比油状物，
6.4将浓缩液移人分液斗内，以100tril～200mL乙醛和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振（不能生成乳独液），静置分层后，去除水层（下层），用相当乙醚半的蒸水洗乙醚层两次，再将乙醚层移人250mlL的磨口烧瓶巾，减压浓编（旋转蒸发器，35℃）去除乙醚：6.5以少量乙醚将浓缩物移人10 ml磨烧瓶中，再次减压浓缩去除乙醛。6.6以1%吡激60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL。此时1m1.试液相当于20g去壳贝肉的重晟，以此愿浮波作为试验原液6.7以试验原液注射小鼠，24h内3只均死亡时，需将试验原液进步稀释，再注射小鼠。稀释前，施先振使游液成均匀悬浮液，再取部分誠液以1%叶温-60生理盐水稀释。7小殿试验
7.1以振满器使试液或H稀释液成为均句的悬浮液7.2将每只小鼠称重，每三只小鼠为--组，分别将1ml.试液注射到小鼠腹腔中，7.3同时，另圾！小鼠作为对照组，注射1mL1%吐温-60生理盐水于腹腔中。7.4观察自注射开始到24h后的小鼠存活情况，求出组三只中死亡两只及两只以上的最小注射量。
7.5，小鼠注射腹泻性贝持后的症状为运动不活泼，大多呼吸异常，致死时间长。8结果计算和表述
8.1毒力的计算
使体重16 g20g的小鼠在24h死亡的毒力为1个小鼠单位（MU)：样品中DSF毒力的计算，按表1选择24h内死亡两只及两只以上鼠的最小注射量及最大稀释俯数逊行计算：
8.2注射量与毒力的关系
注射量与毒力的关系见表1
试验液
2倍稀释液
2倍稀释液
4倍稀释液
4倍稀释液
8倍稀释液
8倍稀释液
16倍稀释液
16停稀释液
表1注射最与毒力的关系
注射虽
”以中肠腺为检样时，射当于含有中肠腺的去壳灭肉α.检伴
SC/T3024—2004
SC/T3024—2004
附录A
【资料性附录】
本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因装A，为本标推与日本厚生省标准的技术差及原因一览表表A.1本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因尽标握的准条
封南，薛言，标准的全文
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技术性孕异
原方法标限的格式与此完不间
文宁叙述中有部分改动。将源支中州大段文学修改为读条数述
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标窄格试采用 GH/1 1.1—2!H)的规定按 GB/T 1,1--2000 的要求，将标准浆文细化,使其有逻辑性、更有条理，使用使其清楚说明萨收稀料村的情况，便于试验时的操释\，现改为“以试验原液法射鼠附，24 h内3！只均死引，需将试验原滋法一步释，诱射作鼠”
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