【农业行业标准(NY)】 动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱质谱法

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中华人民共和国农业行业标准
NY/T468—2006
代替NY/T468-2001
动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱/质谱法
Determination of residual clenbuterol in animal tissuesgaschromatography/massspectrometry2006-01-26发布
2006-04-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心。NY/T468—2006
本标准主要起草人：吴银良、刘素英、单吉浩、李艳华、王海、李卫东、薛毅、尤华、侯东军、刘勇军、蔡英华、杨红菊。
1范围
NY/T468-2006
动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱/质谱法本标准规定了以气相色谱/质谱（GC/MIS）法测定动物组织中盐酸克伦特罗残留的方法。本标准适用于动物肝组织中盐酸克伦特罗的测定。方法的检出限为2.0μg/kg。2原理
对样品在碱化的条件下用乙酸乙酯提取，合并提取液后，利用盐酸克伦特罗易溶于酸性溶液的特点，用稀盐酸反萃取，萃取的样液pH调至5.2后用SCX固相萃取小柱净化，分离的药物残留经过双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱仪测定。3试剂和材料
3.130mmol/L盐酸：用蒸馏水稀释30mL1mol/L盐酸溶液至1L即成。3.2甲醇：分析纯。
3.34%氨化甲醇：用甲醇稀释4mL氨水溶液（比重0.88g/mL）至100mL3.4乙酸乙酯：分析纯。
3.510%碳酸钠溶液：称取10g无水碳酸钠溶解于90mL蒸馏水中即成。3.6双三甲基硅烷三氟乙酰胺，BSTFA。3.7甲苯：分析纯。
3.8SCX小柱：supelclean，LC-SxSepPak小柱500mg，3mL3.9盐酸克伦特罗标准溶液
3.9.1储备液：精确称取适量的盐酸克伦特罗标准品，用甲醇配成浓度约1mg/mL的标准储备液，储于冰箱中。有效期3个月。
3.9.2工作液：将储备液用甲醇稀释成浓度为10赠/L~2000的克伦特罗标准溶液，存放在冰箱中备用。
4仪器及设备
4.1聚四氟乙烯离心管，50mL，具塞。4.2具聚四氟乙烯拧盖的试管。
4.3匀质器。
4.4机械真空泵。
4.5旋涡混合器。
4.6恒温箱，精度为±3℃
4.7离心机。
4.8气相色谱/质谱联用仪（GC/MS联用仪）。5分析步骤
5.1提取
NY/T4682006
称取（5土0.05）g动物肝组织样品于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加人15mL乙酸乙酯，再加人3mL10.0%碳酸钠溶液，然后以10000r/min以上的速度匀质60s，盖上盖子以5000r/min的速度离心2min，吸取上层有机溶剂于离心管中，在残渣中再加人10mL乙酸乙酯在旋涡混合器上混合1min，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。在收集的有机溶剂中加入5mL0.10mol的盐酸溶液，旋涡混合30s，以5000r/min的速度离心2min，吸取下层溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。5.2净化
SCX小柱依次用5mL甲醇，5mL水和5mL30mmol/L盐酸活化，然后将5.1中萃取液上样至固相萃取小柱中，依次用5mL水和5mL甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用5mL4%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。5.3测定
5.3.1衍生化
在50C水浴中用氨气吹干上述洗脱液，加人100L甲苯和100μLBSTFA，试管加盖后于旋涡混合器上震荡30s，在80℃的烘箱中加热衍生1h（盖住盖子），同时吸取0.5mL标准工作液加人到4.5mL4%氨化甲醇溶液中，用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束冷却后加人0.3mL甲苯转人进样小瓶中，进行气相色谱/质谱分析。
5.3.2GC/MS测定参数设定
色谱柱：HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm（内径）0.25μm（膜厚）；进样口：220℃；
进样方式：不分流；
进样体积：1μL；
柱温：70℃（保持0.6min），以25C/min升温至200c（保持6min），以25/min升温至280C（保持5min）；
载气：氨气；
流速：0.9mL/min（恒流）；
GC/MS传输线温度：280C：
溶剂延迟：8min；
EM电压：高于调谐电压200V：
离子源（EI)温度：200℃；
四极杆温度：160℃；
选择离子监测：（m/z）86，212，262,277。5.4定性定量方法
5.4.1定性
样品峰与标样的保留时间之差不多于2，并人工比较选择离子的丰度，其中试样峰的选择高子相对强度（与基峰的比例）不超过标准相应选择离子相对强度平均值的±20%（m/z262）和土50%（m/z212,277)。
5.4.2定量方法
选择试样峰（m/z86）的峰面积进行单点或多点校准定量。当单点校准定量时根据样品液中盐酸克伦特罗含量情况，选择峰面积相近的标准工作溶液进行定量，同时标准工作溶液和样品液中盐酸克伦特罗响应值均应在仪器检测线性范围内。6分析结果的表述
试样中盐酸克伦特罗的含量按式(1)计算2
式中：
7精密度
试样中克伦特罗残留含量，单位为微克/千克（g/kg）；样液中经衍生化盐酸克伦特罗的峰面积；标准工作液中经衍生化盐酸克伦特罗的峰面积：标准工作液中盐酸克伦特罗的浓度，单位为微克/升（/L)样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：最终样液所代表的试样量，单位为克（g)。NY/T468—2006
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%3
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