【国家标准(GB)】 饲料中霉菌总数的测定

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T13092—2006
代替GB/T13092-1991
饲料中霉菌总数的测定
Enumeration of molds count in feeds2006-06-09发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
数码防病
2006-09-01实施
中华人民共和国
国家标准
饲料中霉菌总数的测定
GB/T13092—2006
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2006年10月第一版
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2006年10月第一次印刷
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本标准是对GB13092—1991《饲料中霉菌的检验方法》的修订。本标准与GB13092—1991相比主要差异如下：补充规定了检验程序中磨碎的细度；-补充并规范“设备和材料”的具体规格；GB/T13092—2006
根据GB/T4789.2—2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》修改了“计算方法”；为了与国际及国内的统一，将菌总数的单位修改为：cfu每克（或每毫升），即cfu/g（mL）。自本标准实施之日起，GB13092—1991同时废止。本标准的附录A为规范性附录。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）。本标准主要起草人李丽蓓、饶正华、杨曙明、苏晓鸥。本标准于1986年首次发布，1991年第一次修订。1范围
饲料中霉菌总数的测定
本标准规定了饲料中霉菌总数的测定方法。本标准适用于饲料中霉菌总数的测定。2规范性引用文件
GB/T13092—2006
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.2—2003，食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
霉菌总数molds count
饲料检样经处理并在一定条件下培养后，所得1g检样中所含霉菌的总数。4原理
根据霉菌生理特性，选择适宜于需菌生长而不适宜于细菌生长的培养基，采用平血计数方法，测定霉菌数。
5设备及材料
5.1分析天平：感量0.001g。
5.2恒温培养箱：(2528)℃±1℃。5.3冰箱：普通冰箱。
5.4高压灭菌器：2.5kg。
5.5水浴锅：（45~77)℃±1℃。5.6振荡器：往复式。
微型混合器：2900r/min。
5.8灭菌玻璃三角瓶：250mL，500mL。5.9灭菌试管：15mm×150mm。
灭菌平皿：直径90mm。
灭菌吸管：1mL,10mL。
灭菌玻璃珠：直径5mm。
灭菌广口瓶：100mL，500mL。
灭菌金属勺、刀等。
GB/T13092—2006
6培养基和试剂
除特殊注明，所用试剂均为分析纯；水符合GB/T6682-1992三级水规格。6.1高盐察氏培养基：制备方法见附录A。6.2稀释液：称取氯化钠8.5g，溶于1000mL蒸馏水中，分装后，121℃高压灭菌30min。6.3试验室常用消毒药品。
测定程序
霉菌测定程序见图1。
块状饲料、颗粒饲料
谷物何料、原料
25g+225mL稀释液，振荔荡30min傲成儿个适当倍数的释释液
粉状饲料
选择3个稻释度，各以1mL加入灭平皿内每皿加入适量高盐察氏培养基
（25~28）℃±1℃培养1周
存菌计数
图1雾菌测定程序
8试样的制备
按照GB/T14699.1方法进行采样，采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，粉碎过0.45mm孔径筛，用四分法缩减至250g。样品应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。
9分析步骤
GB/T13092-—2006
9.1以无菌操作称取检样25g（或25mL)，放人含有225mL灭菌稀释液的玻璃三角瓶中，置振荡器上，振摇30min，即为1：10的稀释液。9.2用灭菌吸管吸取1：10稀释液10mL，注人带玻璃珠的试管中，置微型混合器上混合3min，或注人试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子分散开。9.3取1mL1：10稀释液，注人含有9mL灭菌稀释液试管中，另换一支吸管吹吸5次，此液为1：100稀释液、
9.4按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适稀释度，分别在作10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿，然后将凉至45℃左右的高盐察氏培养基注人平皿中，充分混合，待琼脂凝固后，倒置于(25～28)℃士1℃恒温培养箱中，培养3d后开始观察，应培养观察一周。10计算
10.1通常选择霉菌数在10个～100个之间的平血进行计数，同稀释度的2个平血的霉菌平均数乘以稀释倍数，即为每克(或每毫升)检样中所含霉菌总数。10.2稀释度选择和霉菌总数报告方式按表1表示。表1稀释度选择和霉菌总数报告方式例次
稀释液及葡菌数
多不可计
多不可计
多不可计
多不可计
多不可计
多不可计
稀释度选择
选10~-100之间
均在10~100之间比值≤2取平
均在10～100之间比值2取较
均>100取稀释度最高的数
均<10取稀释度最低的数
均无菌落生长则以<1乘以最低稀释度
均不在10～100之间取最接近10
或100的数
注：efu/g(mL)与个/g(mL)相当。两稀释液
霉菌总数/
[efu/g(mL)]
110000
报告方式/
[efu/g( mL)]
GB/T13092—2006
A.1成分
硝酸钠
磷酸二氢钾
硫酸镁（MgSO,·7H20)
氯化钾
硫酸亚铁
氯化钠
蒸馏水
附录A
（规范性附录）
高盐察氏培养基
1000mL
加热溶解，分装后，121℃高压灭菌30min。必要时，可酌量增加琼脂。GB/T13092-2006
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书号：155066·1-28133
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