【国家标准(GB)】 饲料中大豆制品中尿素酶活性的测定

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T8622-2006
代替GB/T8622-—1988
饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定Determination of urease activity in soya bean products for feeds2006-06-09发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局致码防伪
中国国家标准化管理委员会
2006-09-01实施
本标准为GB/T8622—1988《大豆制品中尿素酶活性测定方法》的修订版。本标准与GB/T8622-1988的主要差异如下：改变了尿素缓冲液中磷酸盐的用量；细化了测定过程中的计时步骤；改变了冲洗试管内容物的蒸馏水体积；增加了用指示剂作为终点的判定：增加了试验结果的保留位数，定为小数点后两位；扩大了≤0.2活性单位样品两次试验的允许差，相对相差≤20%。本标准自实施之日起，代替GB/T8622-1988。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准负责起草单位：国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人：马东霞、左江湾、范志影。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T8622—1988。
GB/T8622—2006
1范围
饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定本标准规定了大豆制品及其副产品中尿素酶活性的测定。GB/T8622—2006
本标准适用于大豆、由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。此方法可了解大豆制品的湿热处理程度。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（neqISO3696）3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
大豆制品中尿素酶活性ureaseactivitysoyabeanproducts在30℃土0.5℃和pH7的情况下，每克大豆制品每分钟分解尿素所释放的氨基氮的质量。注：以尿素酶活性单位每克(U/g)表示。4原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃士0.5℃下精确保温30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。5仪器设备
粉碎机：粉碎时应不生强热。
5.2样品筛：孔径200μm。
分析天平：感量0.1mg。
恒温水浴：可控温30℃士0.5℃。5.5计时器。
5.6酸度计：精度0.02，附有磁力搅拌器和滴定装置。5.7
实验室常用玻璃仪器。
6试剂和溶液
试剂为分析纯，水应符合GB/T6682的规定。6.1尿素缓冲溶液（pH7.0±0.1）称取8.95g磷酸氢二钠（Na?HPO,·12H,O），3.40g磷酸二氢钾（KH.PO）溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶在此缓冲液中，有效期1个月。1
GB/T8622—2006
6.2盐酸溶液[c(HCI)=0.1mol/LJ移取8.3mL盐酸，用水稀释至1000mL。6.3氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.1mol/L]称取4g氢氧化钠溶于水并稀释至1000mL，按GB/T601规定的方法配制和标定。6.4甲基红、溴甲酚绿混合乙醇溶液称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇并稀释至100mL，再称取0.5g溴甲酚绿，溶于95%乙醇并稀释至100mL，两种溶液等体积混合，储存于棕色瓶中。7试样的制备
用粉碎机（5.1)将具有代表性的样品粉碎，使之全部通过样品筛（5.2）。对特殊样品（水分或挥发物含量较高而无法粉碎的样品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。
8测定步骤
称取约0.2g制备好的试样（第7章），精确至0.1mg，于玻璃试管中（如活性很高可称0.05g试样），加人10mL尿素缓冲液（6.1），立即盖好试管盖剧烈振摇后，将试管马上置于30℃土0.5℃恒温水浴（5.4）中，计时保持30min士10s。要求每个试样加人尿素缓冲液的时间间隔保持致。停止反应时再以相同的时间间隔加入10mL盐酸溶液（6.2），振摇后迅速冷却至20℃。将试管内容物全部转人小烧杯中，用20mL水冲洗试管数次，以氢氧化钠标准溶液（6.3)用酸度计（5.6)滴定至pH4.70。如果选择用指示剂，则将试管内容物全部转入250mL锥形瓶中加人8滴～10滴混合指示剂（6.4），以氢氧化钠标准溶液(6.3)滴定至溶液呈蓝绿色。另取试管作空白试验。称取约0.2g制备好的试样（第7章）精确至0.1mg，于玻璃试管中（如活性很高可称0.05g试样），加人10mL盐酸溶液（6.2)，振摇后再加入10mL尿素缓冲液（6.1），立即盖好试管盖剧烈振摇，将试管马上置于30℃士0.5℃恒温水浴（5.4）中，计时保持30min士10s。停止反应时将试管迅速冷却至20℃。将试管内容物全部转入小烧杯中，用20mL水冲洗试管数次，以氢氧化钠标准溶液（6.3)用酸度计（5.6)滴定至pH4.70。如果选择用指示剂，则将试管内容物全部转入250mL锥形瓶中加入8滴～10滴混合指示剂（6.4），以氢氧化钠标准溶液（6.3）滴定至溶液呈蓝绿色。9结果计算
9.1大豆制品中尿素酶活性X，以尿素酶活性单位每克(U/g)表示，按式（1)计算。若试样经粉碎前的预干燥处理后，则按式(2)计算：式中：
X=14Xc(Vo-V)
X= 14Xc(V.-V)×(1 - S)
试样的尿素酶活性，单位为活性单位每克（U/g）；氢氧化钠标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L)：空白消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)；试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)；氮的摩尔质量，M（N2）=14g/mol；反应时间，单位为分钟（min）；试样质量，单位为克(g)；
.（1)
S预干燥时试样失重的质量分数，%。计算结果表示到小数点后两位。GB/T8622—2006
9.2重复性：同一分析人员用相同分析方法，同时或连续两次测定活性≤0.2时结果之差不超过平均值的20%，活性>0.2时结果之差不超过平均值的10%，结果以算术平均值表示。GB/T8622-2006
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饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定GB/T8622—2006
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开本880×12301/16印张0.5字数6千字2006年10月第一次印刷
2006年10月第一版
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