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【国家标准(GB)】 转基因产品检测 基因芯片检测方法

本网站 发布时间: 2024-07-18 00:37:20

基本信息

  • 标准号:

    GB/T 19495.6-2004

  • 标准名称:

    转基因产品检测 基因芯片检测方法

  • 标准类别:

    国家标准(GB)

  • 标准状态:

    现行
  • 发布日期:

    2004-04-21
  • 实施日期:

    2004-04-21
  • 出版语种:

    简体中文
  • 下载格式:

    .rar.pdf
  • 下载大小:

    1.48 MB

标准分类号

  • 标准ICS号:

    食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
  • 中标分类号:

    农业、林业>>农业、林业综合>>B04基础标准与通用方法

关联标准

出版信息

  • 页数:

    平装16开 页数:21, 字数:36千字
  • 标准价格:

    14.0 元

其他信息

  • 首发日期:

    2004-04-21
  • 复审日期:

    2004-10-14
  • 起草单位:

    中华人民共和国上海出入境检验检疫局
  • 归口单位:

    cnca 国家认证认可监督管理委员会
  • 发布部门:

    国家质量监督检验检疫总局
  • 主管部门:

    国家质量监督检验检疫总局
  • 相关标签:

    转基因 产品 检测 基因芯片 方法
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标准简介:

标准下载解压密码:www.bzxz.net

GB/T 19495的本部分规定了转基因产品基因芯片检测方法。 本部分适用于用基因芯片对转基因产品的筛选基因、物种结构特异性基因、品系鉴定检测基因和内源基因等的检测。 GB/T 19495.6-2004 转基因产品检测 基因芯片检测方法 GB/T19495.6-2004

标准内容标准内容

部分标准内容:

GB/194956转基因产品检测》为系列标准,转脂产品检测
GH/T 1$495, -2C04
G3/T :9435,2 -20C4
G3/T \9495. 3 -20C4
-GB/T 19495. 4--2004
GB/T 19495.5 2004
-G3/T 19405. 6-20C4
GB/T 19195. 7—2004
GB/T19495.8—2004
转基因产品检测
转基因产品检测
转基因产品检测
转装国产品检测
转基因产品检测
转基因产品检测
转基医产品检测
通用要求和定义;
实验室技术要求:
核酸提取纯化方法;
核酸定性PCR检测方法;
核酸定量PCR检测方法;
基因心片检测方法;
抽样和制样方法:
蛋白质检浏方法。
术邹分的附录A、附录B、录 C 和附录 L 为规范性萄录,本部分由中华人民共和国国家认证认可监督管评委员会提出关归几。本部分由中华人民共和国质量监督检验检疫总局批准发布。GB/T 19495.6-—2004
本部分主要起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检度局、国家质量监督检验检疫总局或植物检疫实验所,
本部分参与起章单位:北京师范大学,中华人民共和国广东出人境检验检疫局,中华人民共和国辽宇出人境检验检疫局、上海博星基因芯片有限责任公司木部分主要起草人:章桂明、黄文胜、程英豪、覃文、曹际妇、米水芳、冷蹈、缪海诊、会道坚、陈枝、孙增强、月华。
木部分系首次发布的国家标滩。1范围
基因芯片检测方法
转基因产品检测
GB/T 1$495的本部分规定了转基因产品基因芯片检测法。GB/T 19495.6—2004
本部分适用于用基因芯片对转基因产品的筛选基因、物种结构特异性基固、品系鉴定检测基因和内源基因等的检测,
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/!194的本部分的引厌而成为本部分的条款。凡注日期约引用文件。其髓后迟有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不追用十本部分,然而,鼓励根据本部分达戴协设的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不祥H期的引用文件,其最新版本适月于本部分。
(3/T049., 1
GB,T :9495. 2
GB/T 19495. 8—2004
GB/T 19495. 4—-2C04
(GB/T 19495. 5—2004
GB/- 19435. 7—2004
3术语、定义和缩骆语
转基因产品检测
转基因产品检测
转基因产品检测
基因产品检测
转基因产品检视
转基因产品检测
本部分来用示列术谱定义和缩咯语3.·术语和定义
通用费求和定义
实验室设术要求
该酸提取线化方法
核酸定性 PCR检测方法
核酸定量 PCR检测片法
拍样和制栏力法
GB/T19495.1 确这的以及下列大语和定义逅月于 GB/ 19495的本部分。3. 1. 1
基片substrate
基内芯片习月于固定探针的杰质,通常※用综链的“载陂片或其他固休载体”,经过化学修饰制备而成。
基医芯探针DNA microarray probe基医芯片中固定于基质表面、能与样木DNA互补、月于探样本NA后息的核酸分子,系部分菜用寡核昔酸片段作探会。
定探针positiveposition probe是一段与待检基医无关的寡核并酸,通过和标记的定位深计互补链杂交显示借号,用二点样链阵的位置的确定。
阳性质控针positivequality control probe用于详品批提、PCR,始交的反应体系的监控:一按用生物的管家基医案设计阳性质控针,CB/T19495.6—2004
期性质控探针negativeguality control probe是一段与待检基因无关的寡核苷酸,用于基因芯片非将异性杂交背最的监控。3.1.6
基因芯片空自质控点noprobemicroarrayspot由不含核酸的点样液点制而成,用于基因芯片杂交背景的监控。3. 1.7
自标基因探针probe for targel gene压丁检测月标基因序列的探针。3.1.8
sigal noise ratio
信噪比
足兴交信号值与杂交背景值的比值业图像分析软件自动判读3.2缩略语
下烈缩峰语适用于本标准
3.2.1cy5 dcTP:cys deoyeylidine tr phosphate,sy5标记的脱氧跑苔三磷酸3.2.2 Nsc.ro sampl
3. 2. 3 NTC:no ternpla
onuroi,空口样本对照。
ontrel.空白模板对照。
3.2.4NC;regative control.阴性对照。3.2.5 PC:positive
econtrol.阳性对照。
防污染措施
按照GB/T 19
5 样与制样
-2004的规定执行
按服GB/71945—2004的姚定执行。6原理
基区芯片这术是将探工DNA有序地固定十玻片或其他固相载体「测试样品的核酸分了经过标记,与固定在载体上的DNA年列中的探针按碱基配对原理同时进行杂交,流去未再补结合的产段,然后递过激光共聚焦荧光检测暴究管对芯片送行扫描,检测杂交信号强度,用算机软件进行数症书比较和分析,从而获取样品分子的数量和序列信息。基因心片技术的操作原理分为厨部分芯片的制备,样本的检测。基因心片范制备:根据需要检测的外源目标基因设计寡核音酸探针,用于制备基因芯片。在制备宴核昔酸探针时,一般在其5”,或3°端进行氢基修饰,以利于其在玻片表面的固定。另外,对疲片丧面进行氨基修饰.然后在氨基修饰后的坡片表面上连接双功能偶联剂,如戊一醛(GA)或对苯异硫氰酸酯PT),制备成基产,探针合成好后,利用(通过)点样仪点焦基片上,寡核苷酸的修饰氨基将与基片主的戊二醛的另一个醛基发生化学反应,或与PDC分一的另学异硫氰基发生类似的反应,从而达到核苷酸交联固定的目的,为了有利于寡核苷酸探分了却标基医片段之间的杂交,通单在所没计的寡核苷探针序列的5端或3端通常要加人,段不直接参与杂交的重复序列,称为壁分十。采用poly(dT)10作为手臀分子。点样完成后要对芯片选行后处理,后处理的三的主要是为了使探针能与载体表面牢固结合,同时,还对载体上未与探针结合的游离活性基团进行阅以避免在杂交过程中非特异性的吸附对实验结果(特别是背景)造成影响,样本的检测:包括日标DNA的标记、杂交和结果判断等部分:测试样本:月标DNA)在酶促反应2
GB/T 19495.6—2034
中通过惨人法或引物修饰等方法法行标证。利用核酸碱基配对的性质将标记的测试样本变性后与点在芯片上的寡核节酸探针特异性杂交,这样芯片上与标记试样本特异性结合的点就会品示信号,通过基函芯片扫描仪检测发中的信号及其强度,根据信号恒当断测试样本中是否存在符定的基函,7试剂
除另作规定外,所有试剂的等级和要求应符合GB/T 19295.2一2C0/中的现定,如未明确期定的:试剂应是分子生物学级的,所有试剂的储存和使用应符合供应商和实验室的要求。7.1 cyE cCTP。
7.2点样液(0.2m2al/L磁酸销)
基因虑片洗说液(G.2%SDS)
基圈志片杂交液(1光SDS
阴性标物质。
阳性标准物质:
琥珀酸酐溶液(0.5
硼氢化钠溶滋(02)
OXSSPE
腌珀酸酐,溶剂为吡咯烷酮·PH8BH,,溶剂为 PBS)。
位辣针頭互补钱
7.9Cy标记的定位
8主要仪器设备
基因芯片点
紫外交联仪
基因扩增仪
基因芯片扫
杂交仪。
清洗槽。
8.7暗室,
9检测
一般性要求
要配备具有分析信噪比的软件
附录A至附录C规定装美因产品筛选检测,物种结构特异性险测利品系鉴定检测的基因芯片检测方法以及各自的适用范围。
测试样品中DNA的捉应照6B/T19495.3-2004中的规定执行/得个测试举品提联时应做两个提取重复。
每批测试实验胃设置对照。对照的设置应符合GB/T19495.2十若有一项不符合者,测试结果应放弃并重傲。9. 2基因芯片检测的种类
2G04中的观定。所有对照的结果振相视试样品的类型和(或)分析检测的要求,转基因产品的基因芯片检测分为,简进检测、物种结构特异性明检测和品系特异性基因检测等。10结果表述
未检出义转基因成分,检测低限为×%。检小义转基因成分,检测保限为%。如果进行了品系检测,则过一步报告该检测样品是X义X转基因品系。
GB/T 19295.6—2004
测试报告
测试报告应等会GB/T19495.1—2C02的观定和G1B/:19495.4中规定的内容,关且至少还应包活以下的附加信息:
-用基因芯片检测方法节依据:
核酸提取方法的依据;
—本标准篇0章点的为容。
A.1范围
陆录A
(规范性阴录)
转基圆植频及其产品筛选检测的基因芯片检测方法GB/T 19495.6—2004
本对艮规定了转斯固懂物及其产品筛选检测的基尿心片检浏方!本附录适用于转煤圈大豆、转基丙玉米、转基因油菜、转基因番茄和转基因棉花及其加工产品十转基因成分的定性筛选检测。
A.2原理
通过多重PCR扩增和基因芯片技犬,可以定性筛选检测转基因大豆、转基因玉米、转基固油菜、转甚因番茹和转基因棉花及其加工产品中转基因成分,4.3检测
A.3.1检测基因
本方法检测转基因植物及其品的CeMV 35S启动了、NOS终止子.NOS启动子、CaMV35S终止7FMV 35S启动了、Bar、FAT、NPTI、CaMV-CP基因和18s rRNA。其中,CaMV-CP是用于判断CaMV35S启动了阳性是否是山丁待检样品受到了花郁菜花叶病毒污染所致,以防假阳性的出现,18s rRXA 作为阻性对照,
A.3.2检测灵敏度
方法哟检测灵敏度为0.5%。
A.3.3主要试剂
A.3.3. 1引物和深针
筛选基检测新用引物序列乱探针序列以皮阻性对照引物序列利探针序列分别见衣A.和表A.2.
表A.1筛选检测基因的引物序列和探针序列基因
CaMV355
启动了
CaMv sos
启动子
正向引物
反向引物
正向引物
反向引物
正向引物
反问引物
5'-AGA CTC GC AAG AGT -CA TAG AGA-3?5'-GCA AIG GAA TCCGAG GAG GT-3:5'-NH:-DO.y(d-).-TCC ICC ACC ATG -TG ACG AAG-3.5'-CCC AGA TAA GGG AAT TAG GG: TC-3' 5'-CCC TGG AIT TTG GTT TTA GGA AT-3S' NH: pcly&dT). GAA ACC C? AG~ ATG TAT TTG TAT TTG TAA-3'5' GAA CCG CAA CGA TTG AAG GA-3*5* TGG ATA CCG AGG GGA ATT TAT G-3S'-NH--UUly(dT)-GAC CTT AGG CGA CTT TTG AAC G-3:扩器片段
长/bp
GB/T 19495.6—2004
FMV35s
CaMV-CP
18sRNA
正向引物
反向引物
正向引物
反向引物
正向引物
反向引物
正向引物
反向引物
正向物
发向礼物
正向手场
拍向引断
反向引物
表A.1(续)
G'-TGA ATC CTG TTG CCG GTC TT-3:5'-AAA TGT ATA ATT GCG GGA CTC TAA TC-35'-NIL-Poly(dT)-GAT GAT TAT CAT ATA ATT-35'CAG GAT TCC AGA TTG GGT TCA-3\5' CTT TTG CCT AAT GGTTTG CAG AC-3\E'-NH:-POydT1-AAA ACC AAG AAG GAA CTC CCA TC 35'-GGAAGG CAC TGG CTGCTA TIG-3'5 GAT STTFCG CTT GGT GGT CG-3PO1y(dT)-GCT CCT GCC GAG AAA GTA TCC-3T CCA CGC TCT ACA CCCAC-3'
5'AAA CGC ACG TCA TCC CAG TT 37-NHPOIT-CTGTGOCTC CAG GGA CTT CA-35'-GAC AGA GCC ACA AAC ACC ACA A3!5'-CAA TOG TAA GCG TTC CTA GCG T 3?5'-NH-POlyEdT),-GOC ACA ACA CCC TCA ACC TCA 35'-GGGACC AAA
TTATTGATCTAA COT CT-31
ATCGGTT TCGTCTT-3'
5'-TCT COT GAA
5'-NHe-podT>1-
TAO CGA CGA CTC GA-
TATGACAAG
阳性对照(18srRNA)引物序列和探针序列列
SGAGAAACGGCTACCACA
DOGCCATCCCAAAGTCCAA-8
NPOEdTn-CGCGCAAATTACCCAATCCTGKCA C-S多重PCR反应体系
多重 PCR反应体系见表 A.
多重PCR反应体系
试剂名称
10×PCR缓冲液(不含Mg+)
氨化镁溶液
G(AGU)TP
Gye dca
各正向和反向引物
PCR皮应体系终浓度
XPCR.锻冲液
1. 5 mmcl/L
0. 2mmol/l.
0. c2 mmzol/l
0. co2 mmot/1.
名 0.3 umol/L
扩增片段
长度/bp
宁增片段
长度/bp
Tag酶
UNG酶
DNA模板
双蒸水
试剂名称
表A.3(续)
注:反体系中冬试剂的量可根据反应位系的总体积进行活当调整A.3.4多重PCR扩增
a.3.4.:多重PCR反应参数
GB/T 13495.6—2C04
PCR反显体系终浓度
补定反应总体积到 50 以
多重PCR反应参数为:50℃5min;94℃5mm94℃13.55℃10s,72℃30s.35个循环:72℃l0 nC保存。
注:不同符击因扩增仪育根据秘馨的要求将反应参数做适当的调整。A.3.4.2筛选检测多重PCR
将衰A.和A.断列的扩增饰选检测基因和阳性对照的引物同时加人多重PCR反应体系中(则表A.3),按A.3.4多重PCR的反应警数进行反应。A.3.5PCR产物的沉定
将多重PCR应产物加2倍体积的无水乙醇1/10体积的3mol/1.乙酸钠(1I5.2),置于-20T℃上.供基闪芯片杂交检侧月。
避光沉淀30mi
A.3.6杂交
A.3. 6. 1 杂交
物经130001/mm15mim离心,齐上清,避光晾,加经55%预热的杂交液6ml.,混沉淀洁PCH
勾5℃3m#0
5min后全部转移到芯片的点样区域,加荒玻片,在杂交舱电加几满水,以保持湿度。将芯片放入杂交舱,密封杂交舱,然后放进50℃水浴内保温11。A.3.6.2洗片S
打开杂交舱,最出芯片,用0.2%SDS冲掉盖玻片,然后把芯片放人感有0.2SDS的染色缸,放置5mii.用双蒸水冲洗二遍。室湿避光十燥。A.3.7扫描检测
放人扫插仪内扫摧,并分析结果,控制扫描仪的款件应具有信噪比分析功能。将杂交后的基因芯
A.3.8扫描结的判定
首先阴性质控探针桑交
比均值等于小于3.5,基丙芯片空白质控点杂交信比均值等丁小于3.5.阳性质控探计杂交信噪影子5.6判定为杂交合格,在此基础上,月标基因探针杂交信噪沟值大于等三5.0定为旧性信号,在3.5与5.0之间判定为可阳性,小手等于3.5判定为限性。4.3.9可疑数据的确证
对于可疑内数据,确证实验按照GB/T13495,52004中规定的方法执行。A.4结果报告
检出×××基因,定位探针杂交点、芯片空白质控点、阴性质控探针杂交点阳性质控探←杂变点范检测,结果止常
未检出×头基因,定位探针杂交点、芯片空白质控点、房性质控探针杂交点、阳性质控探针杂交点的检测结果正常。
如果DNA样本没有检测出阳性质控探针杂交信号,应重复一次,者结果相同,则判定实验不成功GB/T19495.6—2C04
附录B
(规范性对录)
转基因植物及其产品物种结构特异性基因的基区芯片检测方法B.1范围
本附录观定了转基因殖物及其心品的物种缩构特异性茶因的是因芯片检测方法。本附录适,于转基固大H.(GTS40-3-2)、转基因兴3t176、T3t1:、MON310、GA21、CBH351、T25)、转华因油菜(抗草甘麟、抗草丁麟和雄性不背抗草丁)和转因棉花(MON531)及其让工产品凸作物种类组成的物种结构特异性基因的定性检測。B.2原理
通过多重PCR扩增动基[芯片技术,可以检测转基因人豆(CTS4032)、转基医玉米(BI176.t11、MONS10,GA21、CBHI351、T25)、转基因油菜(恢蓝甘麟、抗草T磷和姚性不育抗丁麟)和转基因棉花(MONS31)及其加工产品中白单一作物种英组成的物乱结构特异性基凶。B.3检测
B.3.1、检测基因
本方法检测转基因人豆(GTS 49-3-2)及产品宁的 I.ectin、CaMV 35S启动子,NOS繁止了和CP4-FPSPS 基因;转基因玉米(Bt176、B:_1MON810,GA21、CBH351、T25)&其 产 品 中的 Zeir、CaMV 35S启动子,CaMV 35S终止子,NOS终上子,na=、Cry9C,PAT 和 CzylA(b)基因;转基因油菜(抗草甘继、抗丁瞬却性不行抗草丁麟)改其虽户的 Fb、CaMV 3ES启动子、NOS 整止了、FMV 35S启动子GOX、EPSPS、PAT、Bar、Bernas 和 Bare:ar 甚国;转因榈花(MONE3I)及基产:品中的 CaMV 35S 动,NOS终子,NPTIⅡ 利 CryIA(e)基因,B.3.2检测灵敏度
本方法的检测灵敏度为(.5%。
H.3.3主要试刻
R.3.3.1引物和探针
转禁因大豆物利结构特异生珠因检测新用引物序列和探印序列见表.。转基因玉米物和结构特异性基因检测所月引物序死和探针序列见表3.2,转基因油菜物种结构特异生基因检测所用引物序列知探计序列见表.3。转基因梯花物种结树特异性苯固检测所用引物序列和探钳序列见表3.4。阳性对照的引物和深外衰 13. 5。表 B.1转基囚大豆物种结构特异性基因检测的引物序列和探针序列生因
Loctin
正问引物
反向引物
SCAA GTC GTC CCT GIT GAG TTI G 3:E'-GCT GCT GGA GGC ATC ATA GGT-3:S'-NH2-FOly(dTn-TCT ATC AGA\CC ATC AAA ACG ACG3广塔片段
长度/p
CaV sis
终上子
正问引物
反向引物
正向引物
反向引物
正向引物
CP4-EFSPS
反向引物
表B.1(线)
5'-AGA CTG GCG AAC AGT TCA TAC AGA-3*5'-GCA ATG GAA TCC GAG GAG GT 3'E\-NHa-8Cly(CT). TGC TCC ACC ATG T-G ACG AAG-3'-TGA ATC C-G ITG CCG GTC TT-3S'-AAA TGT ATA ATT GCG GGA CTC TAA TC-3S'-NH--POly(dT6-GAT GAT FA- CAT ATA ATT-3S'-AGA GCC GTG GAT AGA TIA AGC AAG35'-AGA CCG CCG AAC ATG AAE GA-35'-NH: POly(dT)u-GGA AAG GCC AGA CGA TTT GC-3'表B.2
CaMV35S
启动了
GaMY 35s
终止了
终止+
Cry lA (b)
正向引物
反引物
正尚引物
反向引物
正向引物
反向引物
正向引物
反向引顿bzxz.net
正向引物
反向引物
正向引物
反高引物
上司引物
向引物
GB/T 19495.6—2004
扩塔六段
长度/F
转基因示米物种结构特异性基因检测的引物序列和探针序列房
#:-CCA AGA ACT GGA ICA ACG GT AG-3'S-GAS AAG CCG GIC GAG GTAGAT AG-S'5:-NH-POI(dT).-TTC GG CTC TAA CIT GCT TCC G-S5'-AGA CTG GCG AAC AGT TCA TAC AGA 3*E'-GCA ATG GAA TCC GAG GAG GT-R?5'-NH: [0.(d-).-TGC TCC ACC ATG -TG. ACG AAG-3?5'.CCCAGATAAGGGAAT TAG GGT TC3'-CCC TGG ATT TTG GTT TTA GGA AT-$5'-NH:-FGi长度/bp
GB/T 19495.6—20C4
CaMV J5s
启动子
FMV 35S
启动子
终止子
Barnase
正间引物
反而引物
表B.2(续)
5'-CIG CIG CTG CIG AAG GAT GC 35'-CCC TGC GGA ACT GGT GGT AG 3'5'-NH:-P0ly(CT):a-CAA GTA CAC CAA GTA C'G CGA GAC C-3'转基因准莱物种结构特异性基因检测的引物序列和探针序列表B.3
正向引物
反向引物
正向引物
反向引物
正向引物
反向于物
正向引物
反向引物
正向引物
反向引额
正向引碗
反向密
正尚引物
反向引物
5'-CCT CAC CTC AGC CAC GAA TCS5GTC TGT GTT TGA AGC TCA TAC CCA-S:Epoly(dT)u-TGC TAC TCG TTT CCC GCT CA-sGAGA CTG GCG AAC AGT TOA TAC AGA-3'GCAATG GAATCC GAG GAG GT R'
-NIL-POLy(dT)H-TGC TCE ACC ATG TTG ACG AAG-3S'-CAG CAT ICG AGA TTG GCT TCA-s?5'-CTT TTG GCI AAI GGT TTG GAG AC3*-AAA ACC AAG AIG GAA CTC CCA TCs*-NI-poly(T)
S'-TGA ATCCIG
TTG CCG GTC TT-3
5'-AAATGTATA ATT GCGGGACTC TAA TC-31-GAT GATTAT CAT ATAATT-3'
5'-NH--poly(dl)m
5'-GCT CCA CGC TE
ACA CCC AG-3
G'-AAA CCC ACG TCA TGC CAG TT-3?-NH-Foly(dT)w-CTGTGO
CTC CAG GGA CTT CA 3'
GAC AGA GCC ACA AAC ACC ACA A-STCG TAA GCG TTC CTA GCC T-3:GNH PON(dT)s-GCC ACA ACA CCC ICA ACC TCA-G'-AGTCG CTG GTC TCA. CTG CTG-3S'-GGA CSG AAA CCC ATC CAC TT-I?'-NH2-μly(dT)1-GCTCCTGCCAGTTOTGAAGAAC-35'-GGG TCT TGT TGG TGTTTA CGATT-35' TGT AGG TGA TTG GCG TIC GAC-3'5'-NH--ly(ET): GAG AGA AGC GTG ACC A-35' TCC GTT TGT TTA CTG GTG CTT G3'5' GAG GGC TTG TGC TTC TGA TTT T-35'-VH-roly(dT)1e-GTC TGA AGA TAA TCC GCA ACC C-3起增片段
长度/
扩增片鼓
长发/bp
Barstar
CaMV 35s
启动子
终让了
Cty :A (e)
18rRNA
B, 3. 3. 2
正向引物
反向引物
表B.3(统)
S AAC AAA TCA GAA GTA TCA GCG ACC T S:5'-AAC TGC GTG CAT -CC AAA ACG-S' NH2-P0ly(ET)1-ACC TGG ACG CTT TAT GGG ATT-3表B.4
正引物
反向引物
正向引物
反问引物
正尚引物
支向可
GB/T 19495.6--2004
扩增片轰
转基因棉花物积结构特异性基因检测的引物序列和探针序列序
5'-ACA CTG GCG AAC AGT TCA TAC AGA-3*GCAATE GAA TCC GAG GAG GT 3'PolyGT)te-TGG TCC ACC ATG TTG ACE AAG3IGA ATC CTG TTG CCG GTC TT B6
5-AAA TGT ATA ATT GCG GGA CTC TAA TC-3'-NH-PCIY(GT)-GAT GAT TAT CAT ATA ATT 3.5: GGA AGG GAC TOG CTG CTA TTG 3:TT TCG CTI GGT GOT CG 3*
5'GATG
S'-NH:POYIdTAOCCCCT GCC GAGAAAGTA TCC 3'5? AGA CTC AAC AGC AGT GGA AAT AAC A-35'-GTG AAT AGG GGT CAG AGA AGO AIA-3,5°NH2-po.(dT)
TCY GGT AGA TGT GGAICG GAA GT3.阳性对照(18srRNA)引物序列和探针序列列
GAGAAACGGCTACCACA
正向引物
反向引物
OTGCCATCCCAAAGTCCAA-S
FOLY(dT)1-CGC GCA AAT TAC CCA ATC CTG ACA C-3?多重PCR反应体系
多重 PCR反应体系见表 B.6
武剂名效
28×PCR缓冲液(不含Mg+)
氯化镁溶液
d(AGU)TF
Cy5-dCTp
各正向和反向引物
表 B.6多重PCR反应体系
PCR发应体系落浓度
1XPCR 铵冲液
1. 5 mnel/L
0.2mnoi/L
0.52mmol/L
0. c02 mmol/L
午3.3umol/L
扩增片段
长度bp
于增片段
长度/bp
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GB/T 19495.6-2004 转基因产品检测 基因芯片检测方法
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