【国家标准(GB)】 饲料中硒的测定方法2,3--二氨基萘荧光法

中华人民共和国国家标准
饲料中硒的测定方法
2,3-二氨基萘荧光法
Method for the determination ofselenium in feedstuffs--- (DAN)fluorometrt1主题内容与适用范围
本标准规定了用2,3-二氮基萘(DAN)荧光法测定饲料中硒的方法。GB/T 13883—92
本标准适用于配合饲料、预混合料、浓缩饲料和单一饲料中硒的测定。在萃取液中检测范围为0.001~0. 1 μg/mL(以 Se 计)。
2引用标准
GB1.4标准化工作导则化学分析方法标准编写规定GB6682实验室用水规格
3方法原理
先将试样中有机物破坏，使硒游离出来，在微酸性溶液中硒(IV)和2,3-二氨基萘(DAN)生成4,5苯基苯并硒二唑，用环已烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取，用荧光光度计测定其荧光强度。4试剂
实验室用水应符合GB6682中二级用水的规格，使用试剂除特殊规定外，应为分析纯。4.1高氯酸优级纯（pl.67g/mL）。4.2硝酸优级纯（pl.42g/mL）。4.3环已烷p0.778~0.80g/mL。
4.4盐酸优级纯（1+3)。
4.5 盐酸 c(Hcn)==0. 1 mol/l。4.6氨水p0.90g/mL。
4.7盐酸羟胺-乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液称取10gEDTA溶于500mL水中，加入25g盐酸羟胺使其溶解，用水稀至1000mL。4.82,3-二氨基萘(DAN)溶液
称取DANo.1g于150mL烧杯中，加入100mL0.1mol/L盐酸使其溶解，转移到250mL分液漏斗，加入20mL环已烷（4.3）振荡1min，待分层后弃去环已烷，水相重复用环已烷处理2～3次。水相放入棕色瓶中上面加盖3mm厚的环已烷，于暗处保存，此液可使用数周。4.9硒标准贮备溶液
称取硒粉（纯度99%以上）25mg（精确至0.01mg），入100mL烧杯中，加入10mL硝酸加热溶解，冷至室温，用水转移至1000mL容量瓶中并稀至刻度,摇匀,此液 1mL含25.00μg的硒。国家技术监督1992-11-24批准
1993-06-01实施
4.10硒标准工作溶液
GB/T 13883—92
吸取（4.9)溶液1.00ml.、入50mL高型烧杯中按分析步骤消化至高氯酸冒烟5min，取下稍冷，加1mL水和1mL盐酸（4.4）摇匀，放置10min用盐酸（4.5)转移至250mL容量瓶中并稀至刻度摇匀，此液1.00mL含硒0.1μg。
4.11甲酚红
0.4g/L水溶液，称取0.1g甲酚红入400mL烧杯中，加少许水加氨水（4.6)使其溶解用水稀至250mL，摇匀。
5仪器、设备
5.1荧光光度计
激发波长365~385nm，荧光发射波长520～525nm，1cm石英比色杯。5.2实验室用样品粉碎机
标准分析筛孔径（0.42、0.25mm）。5.3分析天平分度值0.0001g。
5.4可调温电炉（600W）或电热板（3000W）。5.5高型烧杯50mL和相应大小的表面血。5.6具塞比色管　50mL。
5.7刻度吸量管22ml、10mL。
6试样的制备
取已粉碎至0.42mm的试样40~50g入250mL烧杯中加水至能搅动的糊状，在搅拌器上搅10~15min，倒在小糖瓷盘中铺平，放入烘箱70℃烘干，粉碎机上磨至0.25mm，混匀装入密封容器中备用，防止试样成分变化。
7分析步骤
7.1试样测定（配合饲料、浓缩料、单饲料）称取已制备好的试样约1g，精确至0.0001g（≤0.4μgSe），放入50mL高型烧杯中，用少量水润湿试样加硝酸（4.2)10mL，轻摇烧杯使试样散开，加盖表面血放到电热板（5.4）上低温加热见反应开始（泡沫开始上冒），切断电源或取下待剧烈反应缓解（气泡不上涌）后再放到电热板上煮沸至硝酸体积减少到5mL左右,取下稍冷加入5mL高氯酸（4.1)继续加热至剧烈小气泡冒完，高氯酸冒烟；取下稍冷，用水吹洗表面皿和杯壁，去掉表面Ⅲ，将烧杯置电热板上先低温蒸发水分，再升温至高氯酸冒烟并保持5～10min，取下稍冷，加入1mL水和1mL盐酸（4.4），摇匀，放置10min，水稀至30mL左右，加二滴甲酚红（4.11）,用氨水（4.6)中和至黄色，再用盐酸（4.4)中和至橙色（pH1.5~~2），加入3mL盐酸羟胺溶液（4.7）摇匀，用盐酸（4.5）转移到50mL比色管中（5.6），加2mLDAN溶液（4.8），盖好塞子，摇匀，松动塞子，置于100℃水中保持5min。取出放入冷水中迅速冷却至室温，用盐酸（4.5）稀至50mL，加5mL环已烷（4.3）振荡1min，静置分层后，用吸管小心吸取上部环已烷入1cm石英杯中，置入荧光光度计内于激发波长375～380nm，发射波长520~525nm测其荧光强度，在标准曲线上查得试料中硒的含量。
同时做空白试验（消化时应戴防护眼镜）。7.2高含量硒样品（预混合料）的测定对于每千克含硒在1mg以上含有机物的样品，按（7.1)进行至加入1mL水和1mL盐酸（4.4)摇匀，放置10min后将消化液稀释至足够体积，然后取部分溶液（Se≤0.4uμg)进行测定。对于以石粉为载体的预混料，称取1～5g样品（精确到0.0001g），于250mL烧杯中，加入20mL水和25mL硝酸183
GB/T 13883-92
（4.2）（逐滴加入硝酸至气泡不发生后再全部如入），盖表面Ⅲ，置电热板上煮沸低温沸腾30期n，取下冷却，用水转移到100~500mL容量瓶中稀释至刻度，摇匀，取部分澄清液（Se≤0.4μg）入50mL高型烧杯中，加入5mL高氯酸（4.1），以下按7.1加高氯酸后程序进行。7.3工作曲线的绘制
取0.00,0.50,1.00，1.50，2.00,3.00mL硒标准溶液（4.10），分别入50mL具塞比色管中，加人3ml盐酸羟胺溶液（4.7）、2滴甲酚红指示剂（4.11），以下按7.1用氨水中和起操作进行，以硒量为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制工作曲线。8分析结果计算和表述
硒的含量(mg/kg）按下式计算：Se(mg/kg)=
式中：mt——自工作曲线上查得的硒量，μg；V。-试液的总体积,mL
V,--—分取试液的体积,mL；
mo-—试料的质量，g。
所得结果应表示至三位小数：0.001mg/kg。9允许差
m,V。
室内每个试样应称两份试料进行测定，以其算术平均值为分析结果，其间分析结果的相对偏差应不大于下表所列允许差。下载标准就来标准下载网
硒含量，mg/kg
>0.100~0.200
>0.200~0.400
附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部、农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验测试中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人邹大琼、詹志春、吴芳桂。184
允许偏差，%
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