【商检行业标准(SN)】 冬生疫霉病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2617—2010

冬生疫霉菌检疫鉴定方法

Detection and identification of Phytophthora hibernalis Carne

2010-05-27 发布 2010-12-01 实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：吴品珊、杜洪忠、严进。

冬生疫霉病菌检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了植物检疫中冬生疫霉病菌Phytophthora hibernalis Carne 的检疫鉴定方法。

本标准适用于针对冬生疫霉病菌寄主的苗木、枝条、枝叶、果实以及夹带土壤中的冬生疫霉病菌检疫鉴定。

2 原理

根据冬生疫霉病菌在寄主上的症状、形态学特征和 PCR 特异性扩增片段为鉴定依据。该病菌的其他相关资料参见附录 A。

3 仪器

3.1 生物显微镜，体视显微镜。

3.2 光照生物培养箱。

3.3 高压灭菌器。

3.4 高速离心机。

3.5 PCR 扩增仪，电泳仪，凝胶成像仪。

4 试剂、材料和培养基

4.1 试剂

4.1.1 Pimorcin（匹莫霉素），利福平钠盐，苯菌灵，灰霉灵（Iprodione），碳酸钙(CaCO₃)，β-谷甾醇，色氨酸，硫氮，氯化钙(CaCl₂ · H₂O)，次氯酸钠(NaClO)。

4.1.2 琼脂糖，SDS(十二烷基硫酸钠)，Tris-HCl，氯化镁，盐酸，EDTA(乙二胺四乙酸四钠盐)，氢氧化钠，乙酸钠，氯化钠，Tris，CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，TAE，无水乙醇，苯酚，三氯甲烷，异丙醇，SYBR Green Ⅰ核酸染料。

4.1.3 蛋白酶 K，Taq DNA polymerase，dNTPs，DNA 分子量 Marker。

4.1.4 PCR 引物 PHIB1/PHIB2。

4.2 材料

琼脂，V8 液，雪松(Cedrus deodara)松针，柑橘(Citrus spp.)叶片，胡萝卜，玉米油。

4.3 培养基

本标准所用的培养基参见附录 B。