【商检行业标准(SN)】 出口水果中赤霉素残留量检验方法

中华人民共和国进出口商品检验行业标准

SN 0350—95

出口水果中赤霉素残留量检验方法

Method for the determination of gibberellic acid residues in fruits for export

中华人民共和国国家进出口商品检验局 发 布

中华人民共和国进出口商品检验行业标准

出口水果中赤霉素残留量检验方法 SN 0350—95

Method for the determination of gibberellic
acid residues in fruits for export

1 主题内容与适用范围

本标准规定了出口水果中赤霉素残留量检验的抽样、制样和荧光分光光度测定方法。
本标准适用于出口柑桔中赤霉素残留量的检验。

2 抽样和制样

2.1 检验批

以不超过1500件为一检验批。
同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

2.2 抽样数量

2.3 抽样方法

按2.2规定的抽样品数随机抽取，逐件开启。每件至少取500g。作为原始样品，原始样品总量不得少于2kg。加封后，标明标记，及时送实验室。

2.4 试样制备

将所取混合原始样品缩分出1kg，取可食部分，经组织捣碎机捣碎，均分成两份，装入洁净容器内，作为试样。密封，并标明标记。

2.5 试样保存

将试样于-18℃以下冷冻保存。
注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

以丙酮提取样品中赤霉素，然后用乙酸乙酯提取，再用缓冲溶液反提取后，在薄层层析板上除去干扰物质，最后用荧光分光光度法测定。

3.2 试剂和材料

3.2.1 丙酮：分析纯。

3.2.2 乙酸乙酯：分析纯。

3.2.3 硫酸：优级纯。

3.2.4

硫酸溶液：50%(V/V)。

3.2.5

乙醇；分析纯，。

3.2.6

甲醇：分析纯，

3.2.7

缓冲溶液(pH7)：溶解6.7g分析纯磷酸二氢钾和1.2g分析纯氢氧化钠在1 000mL蒸馏水中。

3.2.8

展开剂：氯仿-乙酸乙酯-冰乙酸(10+4+1.6)。

3.2.9

乙醇-硫酸溶液：(9+1)。

3.2.10

硫酸溶液：85%(V/V)，将85mL硫酸缓慢加入15mL蒸馏水中。

3.2.11

硅胶G；薄层层析用。

3.2.12

赤霉素标准品：纯度≥95%。

3.2.13

赤霉素标准溶液；准确称取适量的赤霉素标准品，用甲醇配成浓度1.00mg/mL的标准储备溶液，根据需要再配成适当浓度的标准工作溶液。

3.3

仪器和设备

3.3.1

荧光分光光度计：备有10mm石英池。

3.3.2

锥形瓶；具磨口塞，500mL。

3.3.3

组织捣碎机。

3.3.4

布氏漏斗。

3.3.5

振荡机。

3.3.6

圆底烧瓶：1 000mL，

3.3.7

酸度计。

3.3.8

旋转蒸发器。

3.3.9

分液漏斗；250mL。

3.3.10

涡旋混合器。

3.3.11

离心管：具磨口塞，5mL、10mL。

3.3.12

紫外灯；发射波长365nm。

3.3.13

硅胶薄层板的涂布：在20cm×20cm玻璃层析板上将硅胶G(硅胶-水=1+3)涂布成0.3mm的薄层板，自然干燥30min。于110℃烘箱中活化1h，冷却后放置于干燥器中备用。

3.3.14

微量注射器；25μL。

3.4

测定步骤

3.4.1

提取

称取试样100g(精确到0.1g)于锥形瓶内，加20mL蒸馏水和125mL丙酮，振荡30min。混合物经布氏漏斗抽滤；试样和残渣放回锥形瓶中，再用125mL丙酮重复振摇15min，再以铺有新滤纸的布氏漏斗抽滤。用50mL丙酮洗涤锥形瓶并倒在滤渣上，抽滤，再用100mL丙酮洗涤残渣并过滤。

3.4.2

净化

将丙酮-水提取液收集于1 000mL圆底烧瓶中，在30℃水浴上，用旋转蒸发器减压蒸发至丙酮完全除去。剩下的试样水溶液用折叠滤纸过滤，用50mL蒸馏水洗涤烧瓶并通过同一滤器过滤，再用2×10mL蒸馏水洗涤滤纸。将滤液转入烧杯中，滴加50%的硫酸溶液，调至pH为2.5±0.2。将试样定量转入250mL分液漏斗中，以少量蒸馏水洗涤烧杯，然后用3×50mL乙酸乙酯提取，收集乙酸乙酯提取液于第二个分液漏斗中。再用3×50mL pH7的缓冲溶液提取，弃去乙酸乙酯相。收集缓冲溶液提取液于250mL烧杯中，用50%的硫酸溶液调至pH2.5±0.2，再将溶液转入第三个250mL分液漏斗中，用3×50mL乙酸乙酯提取，收集乙酸乙酯相，并通过折叠滤纸滤入250mL圆底烧瓶中，于30℃水浴中旋转蒸发至干。准确加入1.0mL乙酸乙酯以溶解残留物。立即转入5mL离心管，冰浴冷却5min，以2 500r/min离心5min。