【国家标准】 鲜河豚鱼中河豚毒素的测定

中华人民共和国国家标准

GB/T 5009.206—2007

鲜河豚鱼中河豚毒素的测定

Determination of tetrodotoxin in fresh pufferfish

中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会  发  布

前 言

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。

本标准主要起草人：计融、李凤岑、王健伟、罗雪云、江涛、韩春卉、张靖。

鲜河豚鱼中河豚毒素的测定

1 范围

本标准规定了鲜河豚鱼中河豚毒素(tetrodotoxin,简写为TTX)的测定方法。

本标准适用于鲜河豚鱼中 TTX 的测定。

本标准对 TTX 的检测限为 $0.1 \text{ }\mu\text{g/L}$，相当于样品中 $1 \text{ }\mu\text{g/kg}$ 的 TTX，标准曲线线性范围为 $5 \text{ }\mu\text{g/L} \sim 500 \text{ }\mu\text{g/L}$。

2 原理

样品中的河豚毒素经提取、脱脂后与定量的特异性酶标抗体反应，多余的游离酶标抗体则与酶板内的包被抗原结合，加入底物后显色，与标准曲线比较来测定 TTX 含量。

3 试剂

除 TTX 标准品外，实验所用的化学试剂均为分析纯。

1. 抗河豚毒素单克隆抗体：杂交瘤技术生产并经纯化的抗 TTX 单克隆抗体。
2. 牛血清白蛋白(BSA)。
3. 人工抗原：牛血清白蛋白-甲醛-河豚毒素连接物(BSA-HCHO-TTX)，$-20^\circ\text{C}$保存，冷冻干燥后的人工抗原可室温或 $4^\circ\text{C}$ 保存。
4. 河豚毒素标准品：纯度 98%。
5. 乙酸($\text{CH}_3\text{COOH}$)。
6. 氢氧化钠(NaOH)。
7. 乙酸钠($\text{CH}_3\text{COONa}$)。
8. 乙醚。
9. $N,N$ 二甲基甲酰胺。
10. 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)：$4^\circ\text{C}$ 避光保存。
11. 辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗 TTX 单克隆抗体：$-20^\circ\text{C}$保存，冷冻干燥后的酶标抗体可室温或 $4^\circ\text{C}$ 保存。
12. 碳酸钠($\text{Na}_2\text{CO}_3$)。
13. 碳酸氢钠($\text{NaHCO}_3$)。
14. 磷酸二氢钾($\text{KH}_2\text{PO}_4$)。
15. 磷酸氢二钠($\text{Na}_2\text{HPO}_4 \cdot 12\text{H}_2\text{O}$)。
16. 氯化钠(NaCl)。
17. 氯化钾(KCl)。
18. 过氧化氢($\text{H}_2\text{O}_2$)：$4^\circ\text{C}$ 避光保存。
19. 纯水(Milli Q系统净化)。
20. 吐温-20(Tween-20)。
21. 柠檬酸($\text{C}_6\text{H}_8\text{O}_7 \cdot \text{H}_2\text{O}$)。
22. 98%浓硫酸($\text{H}_2\text{SO}_4$)。