【商检行业标准(SN)】 新城疫病毒分离及鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1110—2002

新城疫病毒分离及鉴定方法

Procedure of virus isolation and identification
for Newcastle disease

前 言

SN/T 1110—2002

本标准等效采用国际兽医局的标准《诊断方法和疫苗标准手册》（2000年，第四版），并参考农业部《新城检疫疫技术规范》，结合我们的操作经验编写、制定。

本标准的附录A、附录B均为标准的附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。

本标准起草人：单松华、胡永强。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

新城疫病毒分离及鉴定方法 SN/T 1110－2002

Procedure of virus isolation and
identification for Newcastle disease

1 范围

本标准规定了禽类新城疫病毒(NDV)分离及鉴定方法。

本标准适用于禽类新城疫病毒的分离及鉴定。

2 引用标准

下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修改,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

国际兽疫局《诊断方法和疫苗标准手册》(2000年,第四版)

3 材料准备

所用试剂均为分析纯。

3.1 普通天平、分析天平、普通离心机、V型血凝板、微型振荡器、50 μL可调移液器、恒温箱、超净工作台、塑料采血管等。

3.2 抗生素:青霉素、链霉素、庆大霉素和制菌霉素等。

3.3 9～11日龄无特定病原体(SPF)鸡胚、1日龄SPF鸡和6周龄SPF鸡。

3.4 pH7.0或pH7.4 0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)的配制(见附录A标准的附录)。

3.5 阿氏液(红细胞保存液)的配制(见附录B标准的附录)。

3.6 1%鸡红细胞:采集SPF鸡或无新城疫血凝抑制抗体的成年鸡血,放入等量的阿氏液中,用20倍体积的PBS洗涤3～4次,每次以2000 r/min离心(3～4)min,最后一次5 min,用PBS配成1%悬液。4℃保存悬液,在72 h内使用完。

3.7 拭子准备:将脱脂棉缠于牙签的钝端,使其形成直径0.4 cm的脱脂棉球,然后用牛皮纸包好,每捆10只,121℃高压蒸汽灭菌15 min,备用。或直接购买商品用拭子。

3.8 标准新城疫病毒、标准阳性血清:由指定单位供应。

4 样品采集和制备

4.1 样品采集

4.1.1 活禽采集气管拭子和泄殖腔拭子(沾有粪便);雏禽采集新鲜粪便。

4.1.2 死禽采集口鼻拭子、肺、肾、肠(含内容物)、脾、脑、肝、心等组织,样品可单独采集或者混合,肠内容物常常需单独处理。

4.1.3 病程长的ND病鸡或非典型ND病例可采集骨髓。

4.1.4 将无菌采集的样品装入灭菌的小瓶中,并标记清楚(编号、采样时间),样品立即送实验室处理或于－30℃冷冻保存。