【商检行业标准(SN)】 栎树猝死病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2080—2008

栎树猝死病菌检疫鉴定方法

Identification of Phytophthora ramorum Werres, De Cock & Man in't Veld

2008-04-29 发布2008-11-01 实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准附录 A、附录 B、附录 C 和附录 D 为资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。

本标准起草人：吴品珊、严进、廖太林、巫燕。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

栎树猝死病菌检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了植物检疫中栎树猝死病菌的检疫鉴定方法。

本标准适用于针对栎树猝死病菌寄主的苗木、原木、树皮、枝条、枝叶等植物部分及其土壤和介质，以及木材、木包装和木制品的入境检疫。

2 原理

2.1 分类地位

英文名：pathogen of sudden oak death, pathogen of ramorum leaf blight
学名：Phytophthora ramorum Werres, De Cock & Man in't Veld

栎树猝死病菌（Phytophthora ramorum），也称多枝疫霉，属真菌界（Fungi），卵菌门（Oomycota）卵菌纲（Oomycetes），腐霉目（Pythiales），腐霉科（Pythiaceae），疫霉属（Phytophthora de Bary）。

Phytophthora ramorum 可侵染多种林木和花卉植物，造成栎树等树木猝死（Sudden Oak Death，简称 SOD），以及杜鹃、荚蒾等花卉枝叶枯萎（Twig Blight of Rhododendron）。

病菌在世界上的分布和寄主植物参见附录 A 和附录 B。

2.2 鉴定原理

根据栎树猝死病菌在寄主上的为害症状、形态学特性、巢式 PCR 特异性扩增片段作为鉴定依据。

3 仪器和用具

3.1 仪器

1. 生物显微镜，体视显微镜。
2. 光照生物培养箱。
3. 高压灭菌器。
4. 高速离心机。
5. PCR 扩增仪，电泳仪，凝胶成像仪。

3.2 用具

1. 塑料盒。
2. 黑光灯（18 W, 320 nm～380 nm）。
3. 塑料研杵，移液器。

4 试剂和培养基

4.1 试剂

1. 琼脂粉，V8 液，胡萝卜，杜鹃叶片。
2. 50%匹马霉素，氨苄青霉素钠盐，利福平钠盐，五氯硝基苯，碳酸钙。
3. SDS, Tris·HCl, 氯化镁, 盐酸, EDTA, 氢氧化钠, 乙酸钠, 氯化钾, Tris, CTAB, TBE, 无水乙醇, 苯酚, 溴化乙锭(EB), 三氯甲烷, 异丙醇, 异戊醇。
4. 蛋白酶 K, Taq 聚合酶, dNTP, DNA 分子量 Marker(100 bp)。
5. 巢式 PCR 引物 Phyto1/Phyto4、Phyto2/Phyto3。