【国家标准】 食品添加剂　叶酸

中华人民共和国国家标准

1 主题内容与适用范围

本标准规定了食品添加剂叶酸的技术要求、试验方法、检验规则及标志、包装、运输和贮藏的要求。

本标准适用于化学合成法制得的叶酸，在食品工业中作为维生素类营养强化剂。

2 引用标准

3 化学名称、分子式、结构式、分子量

化学名称：N-[4-[(2-氨基-1,4-二氢-4-氧代-6-嘧啶)甲基]苯甲酰胺]-L-谷氨酸
N-[4-[(Amino-1, 4-dihydro-4-oxo-6-pteridinyl) methyl amino] benzoyl]-L-glutamic Acid

分子式：C₁₉H₁₉N₇O₆

结构式：

分子量：441.40（按 1987 年国际原子量计）

4 技术要求

4.1 性状

本品为黄色或橙黄色结晶性粉末；无臭、无味。在水、乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中不溶，在氢氧化钠和碳酸氢钠的稀溶液中溶解。

4.2 项目和指标

5 试验方法

本标准试验中所用试剂为分析纯试剂,水为蒸馏水或相应纯度的水,溶液为水溶液。

5.1 鉴别

5.1.1 试剂和溶液

氢氧化钠 (GB 629);0.1 mol/L 溶液。

5.1.2 仪器设备

紫外分光光度计,附 1 cm 比色池。

5.1.3 鉴别方法

取样品,加氢氧化钠溶液制成每 1 mL 中含 10 μg 样品的溶液,用紫外分光光度计测定,在 256 ± 2 nm、283 ± 2 nm、365 ± 4 nm 的波长处有最大吸收,吸收度 256 nm 与吸收度 365 nm 的比值应为 2.8～3.0。

5.2 叶酸含量测定

5.2.1 第一法 比色分光法

5.2.1.1 试剂和溶液

氢氧化钠 (GB 629);0.1 mol/L 溶液。

盐酸 (GB 622);2 mol/L 溶液。

锌粉(无砷锌)。

亚硝酸钠 (GB 633);0.1% 溶液。

氨基磺酸铵;0.5% 溶液。

二盐酸萘基乙二胺;0.1% 溶液。

5.2.1.2 仪器设备

分光光度计,附 1 cm 比色池。

5.2.1.3 测定方法

精密量取对照品溶液 B 与样品溶液 B 各 60 mL，分别置 250 mL 具塞锥形瓶中,加锌粉 0.5 g(可稍过量),连续振摇 20 min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,各精密吸取续滤液 2 mL,分别置 10 mL 量瓶中,各依次加水 3 mL,盐酸溶液 1 mL 与亚硝酸钠 1 mL,混匀,放置 2 min,各加氨基磺酸铵溶液 1 mL,混匀,放置 10 min,各加二盐酸萘基乙二胺溶液 1 mL,混匀,放置 10 min,用水稀释至刻度,摇匀。

另精密吸取对照品溶液 A 与样品溶液 A 各 20 mL,分别置 100 mL 量瓶中,各加盐酸溶液 20 mL,用水稀释至刻度,摇匀。各精密吸取 2 mL,分别置于 10 mL 量瓶中,自“依次加水 3 mL”起,依法操作;另取水 2 mL 置 10 mL 量瓶中,自“依次加水 3 mL”起,依法操作,作为空白,用分光光度计测定,以 1 cm 的比色池在 550±1 nm 的波长处测定上述二组溶液的吸收度。

5.2.1.4 计算结果的表示

叶酸含量 $X_1$ (以质量百分数表示)按式(1)计算:

式中: $A_3$ ——用锌粉还原的对照品溶液吸收度;
$A_4$ ——用锌粉还原的样品溶液吸收度;
$A_1$ ——未用锌粉还原的对照品溶液吸收度;
$A_2$ ——未用锌粉还原的样品溶液吸收度;
$m_1$ ——对照品质量, g;
$m_2$ ——样品质量, g;
$X_2$ ——对照品水分含量, %;
$X_s$ ——样品水分含量, %。

注: $X_2$, $X_s$ 按 5.3 测定。

5.2.1.5 允许差

两次平行试验的相对偏差应小于 2%。

5.2.2 第二法 高效液相色谱法

5.2.2.1 试剂

• 磷酸二氢钾(GB 1274)。
• 氢氧化钾(HGB 3006); 0.1 mol/L 溶液。
• 甲醇(HPLC 色谱级)。
• 烟酰胺(药用级)。
• 氨水(GB 631); 0.5% 溶液。
• 叶酸对照品(中国卫生部生物制品鉴定所)。

5.2.2.2 仪器设备

高效液相色谱仪,附十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。

5.2.2.3 系统适用性试验

以磷酸二氢钾 6.8 g 与氢氧化钾液(0.1 mol/L)70 mL,加水稀释成约 850 mL 并调节 pH 至 6.3+0.1,加甲醇 80 mL,用水稀释成 1 000mL 的溶液为流动相;检测波长为 254 nm,叶酸峰和内标物质峰的分离度应大于 1.5。

分离度($R$)按式(2)计算:

式中: $t_{m_2}$ ——叶酸峰的保留时间;
$t_{m_1}$ ——烟酰胺峰的保留时间;
$W_1$ ——叶酸峰的宽度;