【商检行业标准(SN)】 猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1379.1—2004

猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验

Protocol of the enzyme-linked immunosorbent assay using monoclonal antibody
for the detection of antibodies against classical swine fever virus

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准的附录A为规范性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准由中华人民共和国广东出入境检验检疫局负责起草。

本标准主要起草人：许如苏、郭奕亮、肖德雄。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验

1 范围

本标准规定了单克隆抗体酶联免疫吸附试验(间接法)检测猪瘟抗体的方法。

本标准适用于猪瘟的检查、诊断和疫苗免疫监测。

2 仪器设备

• 2.1 酶标板。
• 2.2 可调移液器。
• 2.3 恒温培养箱。
• 2.4 电子天平；感量 $0.001\text{ g}$。
• 2.5 酶标检测仪。

3 试剂

3.1 诊断试剂：

• 3.1.1 猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原。
• 3.1.2 猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原。
• 3.1.3 标准阴性血清。
• 3.1.4 标准阳性血清。
• 3.1.5 酶标二抗(兔抗猪 IgG-辣根过氧化物酶结合物)。

3.2 被检血清；无溶血、无污染。

3.3 溶液：

3.3.1 试验所需溶液包括：

• —包被液(pH 9.6 碳酸盐缓冲液)；
• —磷酸缓冲盐水(PBS)；
• —磷酸缓冲盐水-吐温(PBS-T)洗涤液；
• —稀释液(PBS-T-BB)；
• —邻苯二胺(OPD)底物液，使用前配制；
• —终止液(2 mol/L H₂SO₄)。

3.3.2 溶液配制见附录 A。

注：诊断试剂由中国兽药监察所生产。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果有其他等效产品，也可按其使用说明书写使用。

4 操作方法

4.1 包被

用包被液将猪瘟病毒(强毒或弱毒)单抗纯化酶联抗原作 100 倍稀释，每孔加入 100 $\mu$L，置湿盒于 $4^{\circ}\text{C}$ 过夜。

4.2 洗板

弃去孔内液体，用洗涤液洗微板三次，每次 3 min～5 min，甩干孔内残液，于滤纸上拍打吸干。