【商检行业标准(SN)】 根癌土壤杆菌的检测鉴定方法

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2602—2010

根癌土壤杆菌的检测鉴定方法
Detection and identification of Agrobacterium tumefaciens (Smith et Townsend, 1907) Conn. 1942

2010-05-27 发布 2010-12-01 实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
发布

SN/T 2602—2010

前  言

本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国出入境检验检疫局，中华人民共和国天津出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：房艳、王英杰、张文海、杨明辉、王琴华、刘勇。

根螨土壤杆菌检测鉴定方法

1 范围

本标准规定了进出口植物检疫中根螨土壤杆菌的检验鉴定方法。

本标准适用于进出口植物及其产品上根螨土壤杆菌的检测鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 4789.28-2003 食品卫生微生物学检验 染色体法、培养基和试剂制

3 原理

根螨土壤杆菌 Agrobacterium tumefaciens (Smith et Townsend 1907) Conn. 1942。病原微生物界（Prokaryotes），细菌门（Gracillites），肠杆菌纲（Enterobacteria）、土壤杆菌属（Agrobacterium）。该病菌的形态特征、生物学特性、生化特性、致病性以及 PCR 特异性反应等是本标准检验鉴定的依据。

4 仪器和用具

生物显微镜、体视显微镜、超净工作台，恒温水浴锅、光照恒温培养箱、振荡器、高压灭菌器、培养皿（直径 7.5 cm）、恒温水浴锅（30℃~90℃）、高速冷冻离心机（18 000 r/min以上）、PCR-电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像分析系统、微量可调加样器（2 μL, 10 μL, 20 μL, 100 μL, 200 μL, 1 000 μL）。

5 主要试剂

双蒸水、无菌水（H₂O）、甘露醇、酵母粉、硫酸镁（MgSO₄·7H₂O）、琼脂糖、甘油、尿素、盐酸、次氯酸钠、Z-戊酸乙酯（EDTA）、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、十二烷基硫酸钠（SDS）、核酸酶 P1、溴化氰、对硝基苯酚、N-乙酰-D-葡萄糖胺、L-半乳糖、β-N-乙酰己糖胺、磷酸氢二钾（K₂HPO₄）、磷酸二氢钾（KH₂PO₄）、硫酸镁（MgSO₄·7H₂O）、氯化钠（NaCl）、氢氧化钠（NaOH）、氯化钾（KCl）、10×PCR 缓冲液、10×dNTPs 溶液、琼脂糖、牛肉浸膏、盐酸二甲基砷酸酯、95%乙醇等。

6 检测鉴定方法

6.1 病原菌的分离

6.1.1 根螨土壤杆菌的分离

对植株进行分离时应选用病瘤或疑似病瘤，最好选用白色幼嫩瘤。先将瘤体或疑似瘤体洗净，入...