【其他行业标准】 血红蛋白测定参考方法

11.020 C50 WS/T 341—2011 中华人民共和国卫生行业标准 血红蛋白测定参考方法 Reference method for haemoglobinometry in human blood 2011-09-30发布 2012-04-01实施 中华人民共和国卫生部发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。本标准主要起草单位：卫生部临床检验中心。本标准主要起草人：彭明婷、谷小林、李臣宾、施丽飞、陆红、申子瑜。 1 范围 本标准规定了血红蛋白测定参考方法的技术要求。 本标准适用于建立并运行血红蛋白测定参考方法的实验室。 2 术语和定义 2.1 血红蛋白 hemoglobin（HGB/Hb） 存在于血液中的所有血红蛋白衍生物，包括脱氧血红蛋白、氧合血红蛋白、硫化血红蛋白、碳氧血红蛋白和高铁血红蛋白。 2.2 氰化高铁血红蛋白 haemiglobincyanide（HiCN） 血红蛋白（除硫化血红蛋白外）中的亚铁离子被氧化成高铁离子后，与氰离子结合形成的血红蛋白衍生物，即氰化高铁血红蛋白。 2.3 参考方法 reference method 一种可清楚、准确描述并用于特定检测的技术方法，应具有可靠依据并提供足够准确性和精密度的数据，用于评价其他检测方法的有效性。当存在决定性方法时，其准确性应与决定性方法进行比较，并标示不准确度和不精密度。 3 总则 为保证参考方法检测结果的准确性，建立参考方法的实验室应与其他参考实验室进行结果比对。 4 原理 血红蛋白分子中的亚铁离子（Fe2+）在溶液中被高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe3+），形成高铁血红蛋白（Hi），随后与氰离子（CN-）结合生成氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm波长处具有最大吸收峰，其吸光度遵循朗伯-比尔定律，即吸光度与浓度成正比，因此可通过分光光度计测定吸光度计算血红蛋白浓度。 5 一般技术要求 5.1 设备 5.1.1 玻璃器具 试验所用玻璃器具应为A级。 规格要求包括： - 微量加样器或吸量管：100 μL ±0.5 μL、0.5 mL ±0.005 mL - 容量瓶：25 mL ±0.03 mL、100 mL ±0.08 mL、250 mL ±0.12 mL、1000 mL ±0.3 mL 5.1.2 薄膜过滤器 由低蛋白结合和低释放材料制成，半径25 mm，孔径0.20 μm～0.25 μm。 5.1.3 分光光度计 应经计量部门检定合格，狭缝宽度≤2 nm，比色杯内径1.000 cm ±0.002 cm。 5.2 试剂（文-齐氏液，van Kampen and Zijlstra reagent） 5.2.1 组成 KCN、K3Fe(CN)6、KH2PO4（无水）、非离子表面活性剂、临床实验室I级试剂用水（至1000 mL）。 其中KCN为剧毒物质，应严格进行生物安全防护与处理。 I级试剂水要求：细菌数<10 CFU/mL；25℃电阻抗>10 MΩ·cm；硅含量<0.05 mg/L。 5.2.2 性状要求 试剂为清亮淡黄色溶液，不吸收>480 nm光，pH 7.0～7.4，渗透压6～7 mOsm/(kg·H2O)，应能在5 min内使血红蛋白完全转化为HiCN。 5.2.3 保存条件 应存于密封棕色硼硅酸盐玻璃瓶中，室温避光保存，不得冷冻。如出现浑浊需重新配制，每月至少重新配制一次。 5.3 血标本采集 5.3.1 采用真空采血系统采集新鲜静脉血，避免皮肤消毒剂污染，标本不得含肉眼可见凝块或溶血。 5.3.2 使用EDTA抗凝，终浓度3.7～5.4 μmol/mL，可使用EDTA-K2、EDTA-K2·2H2O、EDTA-K3·2H2O、EDTA-Na2·2H2O等不同形式。