【其他行业标准】 抗菌聚氨酯合成革 抗菌性能试验方法和抗菌效果

ICS59.080.40
分类号：Y47
备案号：36744-2012
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T 4341-2012
抗菌聚氨酯合成革
抗菌性能试验方法和抗菌效果
Antibacterial polyurethane synthetic leather-Test for antibacterial activity and efficacy2012-05-24发布
中华人民共和国工业和信息化部2012-11-01实施
本标准依据GB/T1.1一2009给出的规则编制。本标准由中国轻工业联合会提出。QB/T4341-2012
本标准由全国塑料制品标准化技术委员会（SAC/TC48）归口。本标准起草单位：江苏东泰聚合物有限公司、温州人造革有限公司、安徽安利合成革股份有限公司、北京崇高纳米科技有限公司、福建兰峰制革有限公司。本标准起草人：孙剑锋、王为民、张明贤、林建南、李泽国、贾义松。1范围
抗菌聚氨酯合成革一
QB/T4341-2012
一抗菌性能试验方法和抗菌效果本标准规定了关于抗菌聚氨酯合革抗细菌和抗霉菌（以下简称“抗菌”）的术语和定义、分类、要求和试验方法。
本标准适用于对抗菌聚氨酯合成革进行抗菌性能试验和效果评价。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB/T19089-2003橡胶或塑料涂覆织物耐磨性的测定马丁代尔方法GB19489实验室生物安全通用要求FZ/T73023-2006抗菌针织品
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。抗菌或抗细菌antibacterial
采用化学、物理等方法杀灭或妨碍细菌、真菌生长繁殖及其活性的过程。抗霉菌或防霉preventingmildew采用化学、物理等方法杀灭或妨碍霉菌生长繁殖及其活性的过程。抗菌率antibacterialrate
在抗菌试验中用百分数表示微生物数量减少的值。防霉等级mildew-proofscale
在防霉试验中用长霉等级表示防霉效果。4分类
抗菌聚氨酯合成革按对细菌或霉菌作用可分为：抗细菌聚氨酯合成革；
-抗细菌\\抗霉菌聚氨酯合成革。5要求
抗细菌聚氨酯合成革：抗菌率不小于99%，抑菌圈环宽不大于5mm；经马丁达尔法摩擦5000次后抗菌率不小于90%。
抗细菌/霉菌聚氨酯合成革：抗菌率不小于99%，抑菌圈环宽不大于5mm，防霉等级达到1级以上：经马丁达尔法摩擦5000次后抗菌率不小于90%，防霉等级达1级。QB/T4341-2012
试验方法
6.1贴面抗菌聚氨酯合成革的抗细菌性能按附录A规定的贴膜法进行。6.2非贴面抗菌聚氨酯合成革的抗细菌性能按附录B规定的吸收法进行。6.3抗菌聚氨酯合成革抗霉菌（防霉）性能试验按附录C规定的方法进行。抗菌聚氨酯合成革安全性能试验按附录D规定的抑菌圈试验方法进行。6.4
抗菌聚氨酯合成革抗菌摩擦耐久性能试验按附录E规定的方法进行。6.5
A.1试验原理
（规范性附录）
抗细菌性能试验贴膜法
QB/T4341-2012
本方法通过定量接种细菌于试验样和空白样上，用贴膜的方法使细菌均匀接触样品，经过（24土1）h培养后，测得2组样品中的存活菌数，对比并计算出样品的抗细菌率。A.2试验环境
试验采取无菌操作技术，实验室环境应符合GB19489。材料、仪器和设备
A.3菌种、
试验用菌
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）（AS1.89或ATCC6538p)；
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）（AS1.90或ATCC25922)；b）
肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）（AS1.1736或-ATCC4352）。c)
注1：所有菌种或菌株必须由国家相应菌种保藏管理中心提供并在报告中标明试验用菌品种及分类号注2：AS菌种编号为中国科学院菌种保藏中心编号：ATCC菌种编号为美国典型微生物保藏中心编号。A.3.2材料
消毒剂（70%乙醇溶液）、营养肉汤培养基（NB）、营养琼脂培养基(NA)、洗脱液、接种培养液、蒸馏水。
A.3.3仪器和设备
生化培养箱（温控精度士1℃）、冷藏箱（5℃～10℃）、超净工作台（100级）或生物安全柜（二级）、电热干燥箱（室温～200℃.）压力蒸汽灭菌器、平皿试管、移液管（精度士0.01mL）、接种环、酒精灯。
A.4试验准备
A.4.1试验样品制取和制备
A.4.1.1抗菌试验样
直接从聚氨酯合成革制品中裁制待测抗菌样，尺寸为（50土2)mm×（50土2)mm，或满足待测面积不小于(20±1)mm×(20±1)mm。A.4.1.2/空白样
由卫生级高密度聚乙烯（PE-HD）注射成型，尺寸为(50±2)mm×(50土2)mm、厚度为本大于5mm。如果待测样面积小于这个尺寸，则空白样也相应减小，其面积不小于(20土1)mm×(20土1)mm。A.4.1.3试验用覆盖膜
聚乙烯薄膜，厚度为0.05mm～0.10mm，尺寸为(40±2)mm×(40±2)mm；对于小尺寸样品，覆盖膜尺寸为(20±1)mm×(20±1)mm。A.4.2营养肉汤培养基（NB）的制备牛肉膏
大豆蛋白陈10.0g
氯化钠
制法：取上述成分加入1000mL蒸馏水中，加热溶解后，用0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液调节pH为7.0～7.2，分装，于压力蒸汽灭菌器内121℃灭菌20.min。A.4.3营养琼脂培养基（NA）的制备3
QB/T4341-2012
牛肉膏
大豆蛋白陈10.0g
氯化钠
制法：取除琼脂外其他成分溶解于1000mL蒸馏水中，用0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液调节pH为7.0～7.2，加入琼脂，溶解后分装，于压力蒸汽灭菌器内121℃灭菌20min。A.4.4洗脱液的制备
采用0.80%NaC1的生理盐水。为便于洗脱可加入体积分数为生理盐水1/1000的表面活性剂聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80），再用0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液或0.1mol/L盐酸（HC1）溶液调节pH为7.0～7.2，分装，于压力蒸汽灭菌器内121℃灭菌20min。A.4.5接种培养液的制备
用营养肉汤培养基(NB)的生理盐水溶液制备。用于大肠埃希氏菌培养的NB浓度为0.2%：用于金黄色葡萄球菌培养的NB浓度为0.2%～1%；用于肺炎克雷伯氏菌培养的NB浓度为0.2%1%。为便于细菌分散可加入少量表面活性剂聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80）。用0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液或0.1mol/L盐酸（HCI）溶液调节pH为7.0～7.2，分装，于压力蒸汽灭菌器内121℃灭菌20min。A.4.6菌种保藏
将标准菌株接种于营养琼脂培养基（NA）斜面上，在（37土1）℃下培养18h～24h后，在5℃～10℃下保藏（不得超过1个月），作为斜面保藏菌。A.4.7菌种活化
将斜面保藏菌转接到平板营养琼脂培养基(NB)上，在（37土1）℃培养（24土1）h，每天转接1次，不超过2周。试验时应采用3代～14代、24h内转接的新鲜细菌培养物。A.4.8菌悬液的制备
用接种环从A.5.7新鲜培养物上刮1环2环新鲜细菌，加入培养液中，并依次做10倍梯度稀释至菌液浓度为5.0×105CFU/mL～10.0×105CFU/mL的稀释液作为试验用菌液，按GB/T4789.2规定的方法操作。
A.5试验步骤免费标准下载网bzxz
A.5.1物品灭菌：试验前对覆盖膜、待测抗菌试验样、空白样均应用70%乙醇溶液浸泡，1min后用无菌水冲洗，自然干燥。如不适于用消毒剂处理的样品，可直接用无菌水冲洗。对试验所用到的其他器具可采用高温湿热或干热方法灭菌。A.5.2将待测抗菌试验样和空白样置于已灭菌的平皿中。A.5.3分别取0.2mL试验用菌悬液滴加在待测抗菌样和空白样品上，每组样品做3个平行试验。A.5.4用灭菌镊子夹起灭菌覆盖膜分别覆盖在待测抗菌样和空白样，铺平，使菌液均匀接触样品，盖好平Ⅲ上盖，在（37土1）℃、相对湿度RH大于90%条件下培养（24土1）h。A.5.5取出培养（24土1）h的样品，分别加入20mL洗脱液，反复洗试验待测抗菌样、空白样品及覆盖膜，充分摇匀后，将洗脱液按10倍梯度稀释后接种于营养琼脂培养基（NA）中，在（37土1）℃下培养24h～48h期间进行活菌计数，按GB/T4789.2规定方法测定洗脱液中的活菌数。A.6试验数据处理
A.6.1试验效果应满足以下要求，否则试验无效：a）同一组空白样的3个平行样活菌数值要符合以下要求：最高对数值一最低对数值≤0.2．……．平均对数值
b）空白样的实际回收活菌数量应不低于1.0×10*CFU/片。4
A.6.2抗菌率计算公式为：
式中：
R抗菌率：
×100%
空白样平均回收菌数，单位为(CFU/片)；抗菌试验样平均回收菌数，单位为(CFU/片)。QB/T4341-2012
QB/T4341-2012
B.1试验原理，
附录B
(规范性附录）
抗细菌性能试验吸收法
本方法是将抗菌试验样和空白样接种测试菌，经培养后将残留活菌洗脱下来，通过活菌计数来计算样品抗细菌率
B.2试验环境
试验采取无菌操作技术，实验室环境应符合GB19489。B.3i
试验用菌、材料、仪器和设备
试验用菌
a）金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus）（AS1.89或ATCC6538p）；b）大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）（AS1.90或ATCC25922）；c）肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）（AS1.1736或ATCC4352）。注1：所有菌种或菌株必须由国家相应菌种保藏管理中心提供并在报告中标明试验用菌品种及分类号：注2：AS菌种编号为中国科学院菌种保藏中心编号；ATCC菌种编号为美国典型微生物保藏中心编号。B.3.2材料
营养肉荡培养基（NB）、营养琼脂培养基（NA）、冰冷生理盐水（浓度为0.85%，温度为0℃~4℃）、磷酸盐缓冲液-(PBS，-0.03-mol/LpH7.2～7.4）、蒸馅水。B.3.3主要的仪器和设备
生化培养箱（温控精度土1℃)、冷藏箱（5℃～10℃）、超净工作台（100级）或生物安全柜（二级）、电热干燥箱（室温～200℃）、压力蒸汽灭菌器、锥形瓶或广口瓶（250mL）、试管、移液管（精度±0.01mL）、接种环、振荡器（包含200rpm）、酒精灯。B.4试验准备
B.4.1细菌的预培养
用接种环将符合B.3.1规定的保藏菌种接种到营养肉汤培养基（NB）中，在（37土1）℃，培养（24±1）h。
B.4.2菌悬液制备
将步骤B.4.1预培养试验菌的培养物摇匀，静置15min～20min，用冰冷生理盐水稀释到5.0×10§CFU/mL～10.0×105CFU/mL，制成菌悬液。若试样吸水性差，可在菌液中另加入0.05%（体积）的聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80）。B.4.3磷酸盐缓冲液
无水磷酸氢二钠2.83g
磷酸二氢钾
制法：将各成分加入到1000mL蒸馏水中，待完全溶解后，用0.1mol/LNaOH溶液或0.1mol/LHCI溶液调节pH为7.0～7.2，于压力蒸汽灭菌器内121℃灭菌20min。B.4.4试验样品准备
a）试验样从经抗菌处理的待检样品上直接剪取；b）空白样从50g/m2的普通聚丙烯非织造布上直接剪取；试验样和空白样的用量由样品的材料类型和材质决定，以吸入（1.0土0.1）mL的菌液不溢出为c）
宜（一般使用直径50mm的圆样片）。记录使用的样品数6
B.4.5物品灭菌
QB/T4341-2012
样品消毒方式根据制件材料不同，可选择高压蒸汽灭菌、间隙蒸汽灭菌或其他灭菌方式，但不得影响其抗菌性能和于扰检测结果，并在报告中注明所使用的消毒方法。对试验所用到的其他器具可采用高温湿热或干热方法灭菌。
B.5试验步骤
B.5.1样片
将灭菌的抗菌试验样和空白样分别放到250mL无菌锥形瓶或广口瓶中；每组样品做3个平行。B.5.2接种
分别用移液管吸取B.4.2中制备的菌悬液（1.0土0.1）mL滴加到抗菌试验样和空白样上，保证菌液均匀分布，菌液不可接触瓶壁，塞紧塞子/盖，防止蒸发。B.5.3静置培养
将接种后的样品在(37士1)℃静置培养18h～24h。B.5.4洗脱
静置培养后，向盛有样品的瓶中分别加入100mL磷酸盐缓冲液，放置5min，置振荡器上，以200r/min的转速充分振荡1min，做梯度稀释；分别吸取1mL，倾注营养琼脂培养基平板，在（37土1）℃下培养24h～48h期间进行活菌计数，按照GB/T4789.2规定方法测定洗脱液中的活菌数。B.6试验数据处理
B.6.1空白样静置培养后的实际回收活菌数值应在1.0×10*CFU/mL以上，否则试验无效，B.6.2抗菌率计算公式为：
式中：
R-抗菌率
B- A×100%
—空白样平均回收菌数，单位为(CFU/片);B
一抗菌试验样平均回收菌数，单位为(CFU/片)。(A.3)
QB/T4341-2012
C.1试验原理
附录C
（规范性附录）
抗霉菌性能试验方法
本方法规定将一定量的孢子悬液喷在抗菌试验样和培养基上，通过直接观测长霉程度来评价聚氨酯合成革中使用的具有抗霉菌功能的材料的抗需菌性能。C.2试验环境
试验采取无菌操作技术，实验室环境应符合GB19489。C.3菌种、材料、仪器和设备
试验菌种
黑曲霉(Aspergillusniger)）
土曲(Aspergillus terreus)
宛氏拟青霉(Paecilomyces Varioti)绳状青霉(Penicilliumfiunicolosum)出芽短梗霉(AureobasiumPullulans)球毛壳（Chaetoomiumglobsum）菌
AS3.4463等同ATCC6275
注1：所有菌种或菌株必须由国家相应菌种保藏管理中心提供并在报告中标明试验用菌品种及分类号。注2：AS菌种编号为中国科学院菌种保藏中心编号；ATCC菌种编号为美国典型微生物保藏中心编号。C.3.2材料
消毒剂（70%乙醇溶液）、洗脱液、营养盐液体培养基、营养盐液体琼脂培养基、马铃薯-葡萄糖琼脂培养基（PDA）。
C.3.3主要设备和仪器
C.3.3.1恒温恒湿培养箱［（28土1）℃、相对湿度RH不小于90%]、冷藏箱（5℃～10℃）、超净工作台（100级）或生物安全柜（二级）、电热干燥箱（室温～200℃）、压力蒸汽灭菌器、离心机、生物光学显微镜。
C.3.3.2血球计数板、灭菌喷雾器（喷壶）（雾化压强110kPa）、灭菌平皿、灭菌试管、灭菌移液管、灭菌离心管、灭菌锥形瓶、接种环、酒精灯。C.4试验准备
C.4.1试验样品制备
C.4.1.1试验样
直接从聚氨酯合成革制品中裁制待测抗菌样，尺寸为(50土2)mm×(50土2)mm，或满足待测面积不小于(20±1)mm×(20±1)mm。
C.4.1.2空白样
QB/T4341-2012
卫生级高密度聚乙烯（PE-HD）注射成型，尺寸为(50士2)mm×(50士2)mm。如果试验样面积小于这个尺寸，则空白样也相应减小，其面积应不小于(20土1)mm×(20土1)mm。C.4.1.3阴性控制样品
(25±1)mm×(25±1)mm无菌滤纸。C.4.2洗脱液的制备
聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80）、N-甲基乙磺酸（N-methyltaurine）和二辛磺化丁二酸钠（DioctylSodiumSulphosuccinate），以上润湿剂任选一种，制成含0.05%润湿剂的水溶液，调节pH为6.06.5，于压力蒸汽灭菌器内121℃灭菌20min。C.4.3无机营养盐培养液的制备
磷酸二氢钾（KH2PO4）
硫酸镁（MgSO47H20）
硝酸铵（NH4NO）
氯化钠（NaCI）
硫酸亚铁（FeSO4:7H2O）
硫酸锌（ZnSO47H20）
硫酸锰（MnSO4H2O）
磷酸氢二钾（KHPO4）
制法：取上述成分加入1000mL0.05%润湿剂水溶液中，加热溶解后，用0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液调节pH为6.0～6.5，分装，于压力蒸气灭菌器内121℃灭菌20min。C.4.4无机营养盐琼脂培养基的制备在1000mL无机营养盐液体培养液中加入15g琼脂，加热至熔化，用0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液调节pH为6.06.5，分装，于压力蒸气灭菌器内121℃灭菌20min。C.4.5马铃薯-葡萄糖琼脂培养基（PDA）的制备马铃薯用水洗净，去皮切成小块。称取200g，加1000mL蒸馏水，加热煮沸1h。然后用双层纱布挤出滤液，将滤液加蒸馏水至1000mL，加入葡萄糖20g，琼脂20g，加热熔化，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH为6.0～6.5，于压力蒸气灭菌器内121℃灭菌20min。C.4.6菌种保藏
将标准菌株分别接种在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基（PDA）斜面上，在28℃～30℃培养7d～14d后，在5℃～10℃保藏（不得超过4个月），作为保藏菌。C.4.7菌种活化
将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中，培养7d～14d，使生成大量孢子。未制备孢子悬液时，不得拔去棉塞。每打开1支只供制备1次悬液，每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子。C.4.8孢子悬液制备
在上述PDA斜面培养基中加入少量无菌蒸馏水，用无菌接种环轻轻刮取表面的新鲜霉菌孢子，将孢子悬液置于250mL锥形瓶内，然后注入40mL洗脱液。锥形瓶中加入直径5mm的玻璃珠10粒～15粒与孢子混合，具塞后置水浴振荡器中不断振荡使成团的孢子散开，然后用单层棉纱布过滤以除去菌丝。将其装入灭菌离心管中，用离心机分离沉淀孢子，去上清液。再加入40mL洗脱液，重复离心操作3次。用营养盐液体培养基稀释孢子悬液，用血球计数板计数，制成浓度为0.8×10°spores/mL～1.2×10°spores/mL的霉菌孢子悬液。
6种霉菌均用以上方法制成孢子悬液，将6种孢子悬液等量混合在一起，充分振荡使其均匀分散。混合孢子悬液应在当天使用，若不在当天使用应在3℃～7℃保存，并在4d内使用。C.4.9平板培养基制备
灭菌平皿中注入营养盐液体琼脂培养基，厚度3mm～6mm，凝固后待用（48h内使用）。9
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。