【国家标准】 液相色谱与原子荧光光谱联用仪性能测试方法

ICS 71.040
CCSN04
中华人民共和国国家标准
GB/T44147—2024
液相色谱与原子荧光光谱联用仪性能测试方法
The method of performance testing for liquid chromatography coupled atomicfluorescencespectrometer
2024-06-29发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2025-01-01实施
GB/T44147—2024
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作指导第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
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1范围
液相色谱与原子荧光光谱联用仪性能测试方法
本文件描述了液相色谱与原子荧光光谱联用仪性能测试的方法。本文件适用于液相色谱与原子荧光光谱联用仪性能的测试。2规范性引用文件
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GB/T 4842
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T32267分析仪器性能测定术语JJG1151液相色谱-原子荧光联用仪3术语和定义
GB/T32267、JJG1151界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1
基线漂移baselinedrift
在规定的工作条件下和时间内，基线的缓慢变化。[来源：GB/T32267—2015,2.20]3.2
分离度resolution
相邻两色谱峰的分离程度，即两个组分保留时间之差除以其平均峰宽值。[来源：GB/T32267—2015,7.47,有修改]3.3
长期稳定性long-term stabilityn
仪器在较长时间内不同时段，在规定的时间内连续测量同一样品的结果的稳定程度。注：一般以测定值结果的合并相对标准偏差表示。[来源：GB/T32267—2015,6.30]4试剂和材料
4.1盐酸(HCI)：优级纯。
4.2硝酸(HNO3)：优级纯。
4.3氢氧化钾(KOH)：分析纯。
GB/T 44147—2024
4.4硼氢化钾(KBH4)：分析纯。
4.5磷酸二氢铵(NH1H2PO4）：分析纯。4.6氨水(NH3·H2 O)：分析纯。4.7水：符合GB/T6682中规定的实验室一级水。4.8试验用标准储备溶液，均使用标准物质/标准样品进行逐级稀释。砷酸根[As(V]、亚砷酸根[As(III))、一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)、砷甜菜碱(AsB)、砷胆碱(AsC),制备方法按附录A。4.9氩气：符合GB/T4842要求，体积分数≥99.99%。4.10载流：盐酸与水按体积比5：95混合均匀。量取50mL盐酸，缓缓加入950mL水中。4.11还原剂：硼氢化钾-氢氧化钾溶液，称取5.0g氢氧化钾溶于约200mL水，加入20.0g硼氢化钾并使之溶解，用水稀释至1000mL,摇匀，用时现配。4.12流动相包括以下3种：
a）等度流动相：磷酸二氢铵溶液（15mmol/L)：称取1.70g磷酸二氢铵，溶于1000mL中，以氨水调节pH至6.0,经0.45μm水系滤膜过滤后，于超声波清洗器中超声脱气30min；流动相A:磷酸二氢铵溶液(2mmol/L)：称取0.23g磷酸二氢铵，溶于1000mL水中，以氨水b)
调节pH至8.5,经0.45μm水系滤膜过滤后，于超声波清洗器中超声脱气30min；流动相B:磷酸二氢铵溶液（60mmol/L)：称取6.90g磷酸二氢铵，溶于1000mL水中，以氨c
水调节pH至8.0,经0.45μm水系滤膜过滤后，于超声波清洗器中超声脱气30min。5仪器
5.1分析天平，准确度级别为I级，实际标尺分度值不大于0.1mg。5.2砷(As）原子荧光专用空心阴极灯。5.3超声波清洗器：功率P≥500W,超声频率40kHz～130kHz。溶剂过滤器：抽气速率不小于30Lmin。5.4
55微孔滤膜：水相0.45μm
5.6进样阀：带100μL定量环。
强阴离子交换色谱柱。
微量进样针或液相自动进样器：进样量大于100pL。5.8
6工作条件
6.1环境温度：15℃~30℃。
6.2相对湿度：小于80%。
6.3供电电源：交流(220土22)V,频率(50土1)Hz，并有良好接地。6.4室内明亮且无日光直射、整洁、无尘、无腐蚀性气体，有良好的通风装置。6.5无影响仪器使用的振动和电磁干扰。7性能指标的测定
7.1试验条件
7.1.1在试验前将仪器预热30min并调整至最佳工作状态。7.1.2设置负高压为200V～500V。7.1.3灯工作电流为20mA～120mA。2
7.1.4液相泵流量为0.5mL/min~5.0mL/min。
7.1.5所有性能指标的测定均在同一试验条件下完成。7.2基线漂移及噪声
GB/T44147—2024
进等度流动相、载流及还原剂，连续测量30min。将30min内测定结果的荧光强度初始值、最大值和最小值、最大相邻峰-峰值，按公式(1)计算出结果表示基线漂移。按公式(2)计算出结果表示基线噪声。
×100%
式中：
式中：
基线漂移；
30min内测得荧光强度最大值；
30min内测得荧光强度最小值；
荧光强度的初始值。
基线噪声；
N—30min内测得最大相邻采样点的差值。7.3最小检测量
7.3.1试剂
×100%
10ng/mL的As(I)、DMA、MMA、As(V)混合标准溶液，按A.4制备。7.3.2试验程序
高压输液泵流量1.0mL/min，等度流动相淋洗至基线稳定，对40ng/mL试样（进样量100μL)进行测量，采集色谱图，记录色谱图中4个组分的峰高。按公式(3)分别计算4个组分的最小检测量(ng）。2NeV
式中：
第i个(i为1～4)组分的最小检测量，单位为纳克(ng);--30min内测得最大相邻采样点的差值；标准溶液的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);第i个(i为1～4)组分的色谱峰高(mV);进样体积，单位为微升（μL)。重复性和长期稳定性
7.4.1试剂
100ng/mL的As(III)、DMA、MMA、As(V)混合标准溶液，按A.4制备。7.4.2重复性试验程序
高压输液泵流量1.0mL/min，等度流动相淋洗至基线稳定，对100ng/mL试样（进样量100μL)进3
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行连续7次重复测量，记录As(III）峰高值（或峰面积值），记录各个峰保留时间。将保留时间代入公式(4)计算结果表征为定性重复性，将As(III)峰高(或峰面积)测试数据代入公式(4)计算结果表征为定
量重复性。
(1,-1)
式中：
定性或定量重复性；
第i次测得的保留时间或峰高(或峰面积)；X100%
1一一7次测量保留时间或峰高(或峰面积)测量值的算术平均值；n-
测量次数，n=7。
7.4.3长期稳定性试验程序
（4）
高压输液泵流量1.0mL/min，等度流动相淋洗至基线稳定，对100ng/mL试样（进样量100μL）进行测量，采集色谱图，记录色谱图中As(IIl）的峰高值（或峰面积值)，每间隔15min进行一次测试，连续测试次数大于11次，将As(IⅢl)峰面积(或峰高)测试数据代入公式(5)计算结果表征为长期稳定性。E-i)
式中：
长期稳定性；
I,—第i次测量As(II）的峰高（或峰面积)；X100%
i——n次测量As(IIl)的峰高(或峰面积)测量值的算术平均值，n=11。7.5线性
7.5.1试剂
As(III)、DMA、MMA、As(V)混合标准溶液，按A.4制备。7.5.2试验程序
高压输液泵流量1.0mL/min，等度流动相淋洗至基线稳定，按A.4中配置的质量浓度进行测量（进样量100μL)。分别对标准样品中每一浓度点进行3次平行测定，取算术平均值后，按一元线性回归方程求出工作曲线的相关系数r。
7.6分离度
7.6.1试剂
试剂1:100ng/mL的As(Il)、DMA、MMA、As(V)混合标准溶液，按A.4制备。试剂2:100ng/mL的As(IIl)、DMA、MMA、As(V)、AsB、AsC混合标准溶液，按A.5制备。7.6.2
等度分离度试验程序
高压输液泵流量1.0mL/min，等度流动相淋洗至基线稳定，对100ng/mL试样1（进样量100 L
进行测量，As(III)、DMA、MMA、As(V)采集完成后，分别记录各个相邻组分的保留时间与峰底宽，共
3组，按公式(6计算等度分离度。式中：
R=2L(R),-I(R,),
第i组(i为1～3)的等度分离度；GB/T44147—2024
第i组相邻两个色谱峰中保留时间大的组分的保留时间，单位为分(min); t(R);
分(min); W
分(min);
第i组相邻两个色谱峰中保留时间小的组分的保留时间，单位为第i组相邻两个色谱峰中保留时间小的组分的峰底宽，单位为第i组相邻两个色谱峰中保留时间大的组分的峰底宽，单位为分(min)。7.6.3梯度分离度试验程序
梯度分离度试验的梯度洗脱程序参见表1。表1梯度洗脱程序
流动相A/%
流动相B/%
时间/min
高压输液泵流量1.0mL/min，
梯度流动相A淋洗至基线稳定，按表1梯度洗脱程序对100ng/mL试样2(进样量100pL)进行测量，AsC、AsB、DMA、MMA、As(II)、As(V)采集完成后，分别记录各个相邻组分的保留时间与峰底宽，共5组，按公式(7)计算梯度分离度。Ra
式中：
t(R2);
2[r(R,),-t(R,),
第i组(i为1～5)的梯度分离度；第i组相邻两个色谱峰中保留时间大的组分的保留时间，单位为分(min); t(R, ),
分(min);
第i组相邻两个色谱峰中保留时间小的组分的保留时间，单位为第i组相邻两个色谱峰中保留时间小的组分的峰底宽，单位为分(min);第i组相邻两个色谱峰中保留时间大的组分的峰底宽，单位为分(min)。...... (7)
GB/T44147—2024
A.1玻璃器血的处理
附录A
(规范性）
液相色谱与原子荧光光谱联用仪测试用标准溶液的制备A.1.1将所用的玻璃器血用清水冲洗干净，然后用(3+7)硝酸浸泡24h。A.1.2用清水冲洗于净后，再用实验室一级水冲洗3次～4次，A.1.3洗净的玻璃器血干燥后备用。A.2标准储备溶液
选用以下标准物质/标准样品：砷酸根[As(V)]、[As(III)]、砷甜菜碱(AsB)、砷胆碱(AsC)。A.3标准使用液的制备
As(V(1
一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)、亚砷酸根ug/mL,以As计)标准使用液的制备：用移液器准确吸取A.2中As(V）标准储备溶液配制成1μg/mL的标准使用液，用水稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。A.3.2
MMA(1Pg/mL,以As计)标准使用液的制备：用移液器准确吸取A.2中MMA标准储备溶液μg/mL的标准使用液，用水稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。配制成1
制成1
DMA（1
pg/mL，以As计)标准使用液的制备：用移液器准确吸取A.2中DMA标准储备溶液配μg/mL的标准使用液，用水稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。As(III)(1
pg/mL,以As计)标准使用液的制备：用移液器准确吸取A.2中As(III)标准储备溶液配制成1μg/mL的标准使用液，用水稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。pg/mL，以As计)标准使用液的制备：用移液器准确吸取A.2中AsB标准储备溶液配制A.3.5AsB(1
成1μg/mL的标准使用液，用水稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。AsC(1pg/mL,以As计)标准使用液的制备：用移液器准确吸取A.2中AsC标准储备溶液配制A.3.6
成1μg/mL的标准使用液，用水稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。检测技术指标用标准溶液
As(V)、As(III)、MMA、DMA混合标准溶液的制备见表A.1。表A1As(V)、As(II)、MMA、DMA混合标准溶液的制备配制4种混合
溶液的质量浓度
加入1pg/ml
As (III)的体积
加入1pg/mL
As(V)的体积
加入1pg/mL
MMA的体积
加入1pg/ml
DMA的体积
实验室一级水
稀释至体积
5梯度分离度用标准溶液
AsB、AsC、As(V)、As(III)、MMA、DMA混合梯度标准溶液的制备见表A.2。表 A.2 AsB、AsC、As(V)、As(Il)、MMA、DMA配制6种混合
加入1 pg/m加入1 pg/mL
溶液的质量浓度
AsC的体积
AsB的体积
GB/T 44147—2024
混合梯度标准溶液的制备
加入1pg/mL
加入1pg/mL
As (II)的体积As (V)的体积
加入1pg/mL
MMA的体积
实验室一级水
加入1pg/mL
DMA的体积
稀释至体积
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