【YY医药标准】 流式细胞仪

ICS11.100
中华人民共和国医药行业标准
YY/T0588—2017
代替YY/T0588—2005
流式细胞仪
Flow cytometer
2017-12-05发布
国家食品药品监督管理总局
2018-12-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草YY/T0588—2017
本标准在YY/T0588—2005《流式细胞仪》的基础上修订而成，与YY/T0588一2005相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：
修改了规范性引用文件；
修改了“倍体”定义；
修改了“荧光灵敏度”名称及要求，改为“荧光检出限”，增加了其他激光器对应通道荧光素的荧光检出限要求；
修改了“前向角散射光灵敏度”名称，改为*前向角散射光检出限”；修改了“仪器分辨率”要求，去掉半峰宽要求，并规定FSC、FITC、PE的要求，其他荧光素符合制造商要求（见4.5仪器分辨率要求）：修改了“表面标志物检测准确性”要求，增加了CD16/CDs和CD1g的要求；一修改了“表面标记物检测的重复性”要求，将CDs、CD4、CD：阳性百分比结果的变异系数进行分段要求，并增加测量CD1。/CD56及CD1的要求（见4.9表面标记物检测的重复性要求）；修改了“携带污染率”要求，改为不大于0.5%；删除了“仪器功能”；
一增加了GB4793.9、YY0648安全要求内容（见4.14安全）；增加了GB/T18268.1、GB/T18268.26电磁兼容要求内容（见4.15电磁兼容）；一修改了“荧光检出限”试验方法（见5.2荧光检出限）；修改了“荧光线性”试验方法（见5.3荧光线性）；一修改了“前向角散射光检出限”试验方法（见5.4前向角散射光检出限）；修改了“仪器分辨率”试验方法（见5.5仪器分辨率）；修改了携带污染率试验方法（见5.10携带污染率）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家食品药品监督管理总局提出本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136）归口。本标准主要起草单位：北京市医疗器械检验所、贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司、碧迪医疗器械（上海）有限公司、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、艾森生物（杭州）有限公司。本标准主要起草人：宋伟、刘秋月、李为公、吴煦、吴坚。本标准代替了YY/T0588—2005。1
iiiKAoiKAca
1范围
流式细胞仪
YY/T0588—2017
本标准规定了流式细胞仪（flowcytometer，FCM)的术语和定义，产品分类，技术要求、试验方法、标志、标签和使用说明、包装、运输和贮存。本标准适用于临床使用的对单细胞或其他非生物颗粒膜表面以及内部的生物化学及生物物理特性成分进行定量分析和分选（只限于有分选功能的流式细胞仪）的流式细胞仪。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志
GB4793.1测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1部分：通用要求GB4793.9测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第9部分：实验室用分析和其他目的自动和半自动设备的特殊要求
GB/T14710医用电气设备环境要求及试验方法GB/T18268.1测量，控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第1部分：通用要求GB/T18268.26测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第26部分：特殊要求体外诊断(IVD)医疗设备
GB/T29791.3体外诊断医疗器械
制造商提供的信息（标示）第3部分：专业用体外诊断仪器YY0648测量、控制和试验室用电气设备的安全要求第2-101部分：体外诊断（IVD)医用设备的专用要求
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
分辨率resolution
流式细胞仪在测量时所能达到的最大精度3.2
sensitivity of fluorescence
荧光检出限
流式细胞仪能检测到的最少荧光分子数。流式细胞仪荧光检出限用MESF（moleculesofequiva-lentsolublefluorochrome）表示，即等量可溶性荧光分子。3.3
散射光scatter
细胞在液流中与激光交会时，向空间360°立体角的所有方向散射光线，称为散射光。3.4
forward scatter,FSC
前向角散射光
在入射光正前方检测到的散射光称为前向角散射光，前向角散射光的强弱与细胞的大小有关。1
HiiKAoNiKAca
YY/T0588—2017
sidescatterssc
侧向角散射光
也称90°散射光。侧向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，对胞质内较大的颗粒也会有反应，可获得有关细胞内部精细结构和颗粒性质的信息。3.6
前向角散射光检出限FSCsensitivity流式细胞仪能够检测到的最小颗粒大小，以前向角散射光最小能检测到的颗粒直径表示。3.7
倍体polity
生物体细胞（包括动物细胞、植物细胞、微生物）的遗传物质含量。3.8
携带污染率
carry-over
分析物被仪器由一个检测样品到下一个样品的携带量：从而错误地引起第二个被测样品分析物浓度的增加。
standardparticle
标准微球
大小一致和（或）标有强度一致、恒定不变荧光素的微球，用于流式细胞仪的校准。4技术要求
正常工作条件
流式细胞仪的正常工作条件应符合如下要求：a）环境温度：按照流式细胞仪说明书的规定：相对湿度：按照流式细胞仪说明书的规定；b）
电源电压：交流220V土22V.50Hz土1Hz大气压力：按照流式细胞仪说明书的规定；d）
防止阳光直射，避免热源。
荧光检出限
流式细胞仪的荧光检出限应符合下列要求：a）流式细胞仪对异硫氰酸荧光素（FITC)的荧光检出限应不大于200MESF；流式细胞仪对藻红蛋白（PE)的荧光检出限应不大于100MESF；b)
流式细胞仪对其他激光器（例如红激光、紫激光、紫外激光、绿激光)所对应通道荧光素（每种激光器至少选择一种荧光素）的荧光检出限应符合制造商声称的要求4.3荧光线性
流式细胞仪荧光强度线性相关系数（r）应不低于0.984.4前向角散射光检出限
流式细胞仪前向角散射光检出限应不大于1um。4.5仪器分辨率
流式细胞仪前向角散射光和荧光信号的荧光通道全峰宽应满足表1要求。2
HiiKAoNiKAca
荧光素
其他荧光素
表1仪器分辨率要求
前向角散射光和侧向角散射光分辨率应可以将外周血中红细胞和血小板分开。4.6.1
要求（CV）
符合制造商要求
4.6.2应可以将外周血白细胞三群（淋巴细胞、单核细胞、粒细胞)分开。4.71
倍体分析线性
YY/T0588—2017
流式细胞仪进行二倍体细胞周期分析时，G2/M与G/G1的平均荧光强度比值应在1.95～2.05范围内。
3表面标志物检测准确性
流式细胞仪检测质控血时，淋巴细胞表面表达的CD、CD、CDs、CD16/CDs6和CDi阳性百分比结果应在给定范围内。
4.9表面标志物检测的重复性
重复检测样品CD：，CD、CDg、CD1s/CDs和CDi，阳性百分比结果的变异系数（CV)应符合：阳性百分比大于等于30%时，CV值应不大于8%；或a
b）阳性百分比小于30%时，CV值应不大于15%。4.10携带污染率
流式细胞仪的携带污染率应不大于0.5%。4.11仪器稳定性
环境温度变化不超过设定温度的5%时，在8h内检测前向角散射光（FSC）及所有荧光通道峰值荧光道数的波动范围应不超过士10%。4.12外观
外观应符合下列要求：
a）仪器外观应整洁，无划痕，文字和标识清晰；b）紧固件连接应牢固可靠，不得有松动。4.13环境试验
应符合GB/T14710中气候环境I组，机械环境I组的要求4.14安全
应符合GB4793.1、GB4793.9、YY0648中适用条款的要求。3
HiiKAoiKAca
YY/T0588—2017
4.15电磁兼容
应符合GB/T18268.1、GB/T18268.26中适用条款的规定。5试验方法
5.1试验条件
按照4.1的试验条件进行，使用与流式细胞仪适配的试剂、质控品及标准微球，并在试验之前按照制造商的使用说明对流式细胞仪进行正确的操作和校准。5.2荧光检出限
将标准微球充分混勾后上机进行试验，收集不少于10000个标准微球，对试验结果进行直方图分析，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微球说明书提供的各个峰的等量MESF数，以及分析得到的各个峰的平均荧光强度，取常用对数（Lg值）做线性回归，空白微球处的平均荧光强度值对应的MESF数的反对数即为荧光检出限。
荧光线性
将标准微球充分混勾后上机进行试验，收集不少于10000个微球，流式细胞仪运用直方图对试验结果分析，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微球说明书提供的各个峰的等量MESF数，以及分析得到的各个峰的平均荧光强度，以MESF数（y）和平均荧光强度（a）的线性回归，计算相关系数（r）。5.4前向角散射光检出限
将标准微球充分混匀后上机进行检测，检查直方图上显示的峰值信号，及显示峰值信号的标准微球直径。
5.5仪器分辨率
将标准微球充分混匀后上机进行试验，计算出各荧光通道标准微球全峰宽的CV值，结果应符合4.5的要求。
5.6前向角散射光和侧向角散射光分辨率5.6.1在装有1mL鞘液的试管中加入5uL枸橡酸钠抗凝全血，混匀后，上机检测，检查前向角散射光和侧向角散射光点图是否可以将血小板和红细胞分开。5.6.2取100μLEDTA抗凝全血，溶解红细胞后上机检测，检查前向角散射光和侧向角散射光点图是否可以将白细胞三群（淋巴细胞、单核细胞、粒细胞）分开。5.7倍体分析线性
使用经过荧光染色的标准细胞株或标准细胞核，上机检测G./G期及G2/M期的平均荧光强度，计算2个平均荧光强度的比值。
5.8表面标志物检测准确性
使用已标记好CD：、CD、CDg、CD1/CD5和CD1的质控细胞上机测试，重复测定5次，依次记录每次检测的CD3、CD4、CD：、CD16/CD5和CD1g阳性值的百分比，并分别计算平均值。4
HiiKAoNiKAca
5.9表面标记物检测的重复性
YY/T0588—2017
按照5.8的方法进行试验，重复测试10次，按照式（1)分别计算CD，CD4，CD：CD1/CDs和CD1阳性百分比结果的变异系数(CV）。CV
式中：免费标准bzxz.net
变异系数；
标准差；
测量值的平均值。
5.10携带污染率
×100%
使用浓度为（5000～10000）个/uL的标准微球上机进行测试，至少收集100000个标准微球，连续测试3次，计算标定区域的颗粒数，分别记为H-1、H,-2、H,-3；再进行空白数量测试（收集30s），连续测试3次，计算标定区域的颗粒数，分别记为L,-1、L,-2、L1-:；按照此程序循环3次，再按式（2)计算携带污染率（C,），取最大值。所得结果满足4.10的要求。L-l-L= ×100%
H:-3-L:
式中：
C第i次循环的携带污染率值；
i=1～3。
5.11仪器稳定性
将标准微球充分混匀后上机进行试验，测试完成后，利用直方图分析试验结果，计算标准微球的平均荧光强度值（FL1）；连续开机8h后，在相同流式细胞仪设置和荧光道数的条件下重复前述试验步骤，得到标准微球的平均荧光强度值（FL，）；按式（3)计算FL1、FL2的偏差值（B）。FLa -FLz ×100%
式中：
-0h标准微球平均荧光强度值；
5.12外观
-8h后标准微球平均荧光强度值。在自然光下以正常视力或矫正视力目视检查，应符合4.12的要求。5.13环境试验
按照GB/T14710中适用条款的试验方法进行5.14安全
按照GB4793.1、GB4793.9、YY0648中适用条款的试验方法进行。5.15电磁兼容
按照GB/T18268.1.GB/T18268.26中适用条款的试验方法进行。·（3）
YY/T0588—2017
标签、标记和使用说明
应符合GB/T29791.3的规定。
包装、运输和贮存
流式细胞仪的包装、贮运图示标志应符合GB/T191的规定7.1
包装所使用的图示标志应符合GB/T191的规定。包装应能保证分析仪免受自然和机械性损坏。包装箱内应附有使用说明书。
2运输
按照制造商规定的要求进行运输。7.3贮存
按照制造商规定的要求进行贮存6
参考文献
[1]YY/T1184—2010
流式细胞仪用单克隆抗体试剂
YY/T0588—2017
YY/T0588-2017
中华人民共和国医药
行业标准
流式细胞仪
YY/T0588—2017
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）网址：spc.org.cn
服务热线：400-168-0010
2017年12月第一版
书号：1550662-32220
版权专有
侵权必究
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。