【YY医药标准】 ISO/TR 22442-4 :2010 动物源医疗器械 第4部分:传播性海绵状脑病(TSE)因子的去除和/或灭活及其过程确认分析的原则

ICS11.10C.20
中华人民共和国医药行业标准
YY/T0771.4--2015/ISO/TR22442-4.2010动物源医疗器械
第4部分：传播性海绵状脑病（TSE）因子的去除和/或灭活及其过程确认分析的原则Mledical devices utilizing animal tissues and their derivatives-Part 4:Principles for elimination and/or inactivation of transmissible spongiformencephalopathy agents and validation assays for those processes（ISO/TR22442-4：2010,IDT)
2015-03-02发布
国家食品药品监督管理总局
2016-01-01实施
中华人民共和国医药
行业标准
动物源医疗器械
第4部分：传播性海绵状脑病（TSE）因子的去除和/或灭活及其过程确认分析的原则YY/T0771.4—2015/ISO/TR22442-4:2010*
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YY/T0771.4—2015/ISO/TR22442-4:2010YY/T0771《动物源医疗器械拟分部分出版，自前计划发布如下部分：第1部分：风险管理应用；
一第2部分：来源、收集与处置的控制；一第3部分：病毒和传播性海绵状脑病(TSE)因子去除与灭活的确认；一第4部分：传播性海绵状脑病（TSE）因子的去除和/或灭活及其过程确认分析的原则。本部分为YY/T0771的第4部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分等同采用ISO/TR22442-4：2010《动物源医疗器械第4部分：传播性海绵状脑病（TSE）因子的去除和/或灭活及其过程确认分析的原则》。本部分中规范性引用的国际文件有一致性对应关系的我国文件如下：
YY/TC771.1—2009动物源医疗器械第1部分：风险管理应用（ISO22442-1：2007，IDT）YY/T0771.2—2009动物源医疗器械第2部分：来源、收集与处置的控制（ISO22442-2：2007，IDT)
YY/TC771.3—2009动物源医疗器械第3部分：病毒和传播性海绵状脑病（TSE）因子去除和/或灭活的确认（I5O22442-3：2007，IDT）请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分乓国家食品药品监督管理总局提出，本部分宙全三医疗器械生物学评价标准之技术委员会（SAC/TC248）归口。本部分起草单位：国家食品药品监督管理局济商医疗器械质量监督检验中心。本部分主要起草人：刘成虎、由少华、吴平。I
YY/T0771.42015/ISO/TR22442-4:2010某些医疗器械采用动物源性材料。引言
在医疗器械设计和制造中使用动物组织及其衍生物，以提供优于非动物源性材料的性能特征。医疗器械不同，使用的动物源性材料的种类和数量也不同。这些材料可构成器械的主要部分（如牛/猪心脏瓣膜、用于牙科或整形外科的骨替代物、止血器械），可以是产品的涂层或浸渍物（如胶原、明胶、肝素），也可用于器械制造过程中（如油酸盐和硬脂酸盐等动物脂衍生物、胎牛血清、酶、培养基）。本文件是一份为设计和实施确认分析提供建议的技术报告，以帮助确定无活力动物组织来源的医疗器械的加工过程是否可以帮助降低传播性海绵状脑病（TSEs）的医源性传播（iatrogenictransmission)的风险。本文件将传染因子称为“TSE因子”，而不是病毒，以与ISO22442的其他部分保持一致。本文件给出的有关人体组织和TSEs的最新信息，也可类推到其他动物组织。已经无可辩驳地证实，人类TSE克雅氏病（CJD)的医源性传播与外科手术中使用人硬脑膜同种异体移植物（Hannah，E.DBelay，etal.2oo1）和使用人类垂体提取的激素（Mills，J.L.L.B.Schonberger，etal.2001)有关，两者都是无活力组织。最近，在一名血友病患者户检中检测出了变异型克雅氏病（vCJD）的亚临床感染并将其归因为用于该患者治疗的加工的人血浆提取的凝血因子（http：//hpa.orguk/webw/HPAweb&HPAwebStandard/HPAweb_C/1234859690542?p=1231252394302和http：//dh.gov.uk/en/Publicationsandstatistics/Publications/PublicationsPolicyAndGuidance/DH_100357)。另外，还有角膜移植物传播CJD（Kennedy，Hoganetal，2001）和一些输注浓缩红细胞传播vCJD(Llewelyn,Hewitt et al 2004,Peden,Head et al 2004,Peden,Ritchie and Ironside 2005)的报道。全球范围内已有超过21O名接触牛海绵状脑病（BSE）因子的vCJD病例，其中大部分被认为是食用已感染的牛肉产品所致。虽然，除了已讨论的医源性vCJD感染，尚未识别出通过医用或兽用产品传播BSE因子的报道，然而，没有理由怀使用某一反当动物来源的BSE因子感染的医疗器械可以感架易感者。事实上，已有两个从无活力绵羊组织提取的兽用疫苗向绵羊传播绵羊/山羊TSE痒病的报道（WHO2006）。目前尚未见人类感染痒病因子的报道。在传播性因子的可能分子性质[当前使用最广泛的全-蛋白或“病毒”理论（Prusiner1982）或在传染性因子的复制中不同形式的宿主编码的病毒蛋白的确切作用或疾病的发病机理的优先术语未达成国际共识的情况下，本部分一般采用世界卫生组织《WHO组织感染性TSE分布指南》2006（WHO2006)中推荐的术语。本部分的核心目的是在使用无活力动物组织医疗器械时，为降低偶然性传播TSEs风险方法的有效性确认提供策略。下列文件是有助于正确理解本文件的标准：-ISO22442-1动物源医疗器械第1部分：风险管理应用；-ISO22442-2动物源医疗器械第2部分：来源、收集与处置的控制；ISO22442-3动物源医疗器械第3部分：病毒和传播性海绵状脑病（TSE）因子去除和/或灭活的确认；
ISO14160医疗保健产品的灭菌一次性使用动物源性医疗器械用液体化学灭菌剂灭菌过程的表征、开发，确认与常规控制要求。这些文件中的规范性附录和资料性附录也与本文件的内容直接相关。这些文件中的所有术语适用于本文件。
由于缺乏统一的能可靠去除TSEs的过程步骤，使用低风险来源的动物和组织是非常重要的。虽然还没有直接适用的从使用无活力动物组织加工的医疗器械中降低TSE风险的确认方法，英国I
iiKAoNiKAca
YY/T0771.4—2015/IS0/TR22442-4:2010和美国监管部门已经针对预期从潜在污染TSE因子的人血液中去除TSE因子传染性的器械的确认研究的要点征求了专家建议，而这些建议也可在动物源性组织的评价方法中得到利用。这些要点包括使用已加入TSE的高滴度感染性染毒材料的预评价、选择与感染相关的试验性因子以及采取PrPTSE分析进行接受性研究作为预筛选方案来摒弃不适当的方法。这些方法需在已知的易感试验动物的生物分析中表明病毒感染性显著性降低。为了鉴定某一方法是否可以使用，如果可行，需要用两个TSE因子生物分析组合对该方法进行分析以证实具有的相似的结果。在得出该方法具有充分的可操作性的结论之前，这些准则宜得到满足。想要证实某一方法能降低内源性感染组织TSE的传染性以及证实某一完整的加工过程能去除所有可检测到的传染性，虽然是所期望的，但在当前仍是不可行的。大多数神经系统以外组织中TSE感染性的滴度非常低，而对自然发生的TSE因子易感的动物又非常少，且对新种属不适用等都是方法研究的限制性因素。没有已知感染滴度的标准物质、缺乏感染TSEs的人类和动物的生物学特性的知识，也被认为是开发确认研究的另一障碍(WHO(2006)附录2]。虽然认识到尝试对提高人血源性医疗产品以及其他人组织源兰医疗产品（已被证实有医源性传播的产品）的TSE安全性方法的确认非常渺范，但必须强调不能放弃可能提高动物源医疗器械TSE安全性的新确认方法的努力。如上所述，宜再次提请注意，动物组织与导致任何医源性人TSE感染是不直接相关的（Minor，Newhametal.2004）。然而，食物传染BSE和绵羊组织中提取的兽用疫苗向绵羊传播痒病的实例表明了从动物向人进行医源性TSEs传播的风险，理应得到持续关注。HiiKAoNniKAca
1范围
YY/T0771.4-2015/ISO/TR22442-4:2010动物源医疗器械
第4部分：传播性海绵状脑病（TSE）因子的去除和/或灭活及其过程确认分析的原则为帮助确定无活力动物组织来源的医疗器械的加工过程是否有助于减少传播性海绵状脑病（TSEs）的医源性传播的风险，本部分为设计和开展确认分析提供建议。加工动物组织所使用的TSE去除方法也宜减少通过人源性无活力组织传播TSE感染的风险；本部分不涉及这一方面。一些关于人体组织和TSEs的当前信息可通过类推适用于其他动物组织。本部分不预期为ISO22442-1：2007的附录C中所列出的已识别出的具有TSE因子污染的“可忽略风险”的特定材料提供方法的确认要求。本部分预期用于解释ISO22442系列中最终国际标准草案以及ISO14160标准。本部分是建立在对ISO22442-3中与TSE因子相关的特定讨论的基础之上并努力总结TSE因子去除领域内当前最新技术水平。随着对TSE因子的灭活和去除的深人理解，可行时将会对本文件进行修订。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ISO14160含动物源材料的一次性使用医疗器械的灭菌液体化学灭菌剂灭菌的确认与常规控制l(Sterilization of single-use medical devices incorporating materials of animal origin-Validaticn androutine control of sterilization by liquid chemical sterilants)ISO22442-1动物源医疗器械第1部分：风险管理应用（Medicaldevicesutilizinganimaltissuesand their derivatives-Part l:Application of risk management)ISO22442-2动物源医疗器械第2部分：来源、收集与处置的控制（Medicaldevicesutilizinganimal tissues and their derivatives-Part 2:Controls on sourcing,collection and handling)ISO22442-3动物源医疗器械第3部分：病毒和传播性海绵状脑病（TSE）因子去除和/或灭活的确认(Medical devices utilizing animal tissues and their derivatives-Part 3.Validation of the elimination and/or inactivation of viruses and Transmissible Spongiform Encephalopathy(TSE) agents)3术语和定义
ISO22442-1、ISO22442-2、ISO22442-3和ISO14160界定的术语和定义适用于本文件。4TSE因子的去除：基本考虑
4.1总则
4.1.1关于TSEs
牛的海绵状脑病（bovinespongiform encephalopathy，BSE）是目前已知的向人类传播疾病的唯一1
HiiKAoNiKAca
YY/T0771.4—2015/IS0/TR22442-4:2010动物源的TSE（人畜共患传染病）。痒病，虽然有理论上的可能，但根据几百年来的经验，还不被认为是人畜共惠传染病。尽管如此，一些监管部门仍采取了预防政策，禁止使用从具有病史的羊群来源的绵羊源和山羊源的提取注射液（如，1999年6月，FDATSE顾问委员会03号会议的记录，accessed16July2009athttp:/fda.gov/ohrms/dockets/ac/cber99.htm#Transmissible%20Spongiform,Eu-ropean Union Directive from 2003[OJ L 105,26.4.2003 p.18,http://eurlex,europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L：2003:105:0018:0023：EN.PDFJ，和日本177通告http://nihs.g0.jp/cgtp/cgtp/guidline/03052001.pdf)。绵羊和山羊对BSE因子感染的易感性已经引起另一最新的关注（WHO2006）。虽然猪已经在试验中成功感染上BSE因子（Wells，Hawkinsetal.2003；Castilla，Gutierrez-Adanetal.2004），但经口途径不会使它们感染上BSE，并且未发现自然传播的猪TSE。并且，多数监管部门通常对于猪组织不可能是人接触任何TSE因子的来源持有乐观态度。医疗器械的加工中基本上都不使用的其他动物（如，马）组织也是如此。（不会经口感架TSE因子的动物不被欧洲药品评估局（EMEA）认为是“TSE相关动物种属”，在EMEA指南2004的一个注意事项中，这些动物种属的组织在用于人用或兽用医疗产品的制造时被认为是没有TSE风险的http：//emea.europa.eu/pdfs/human/bwp/TSE%20NFG%20410-rev2.pdf.)。4.1.2关于动物组织
当前使用的以无活力动物组织形式制造的医疗器械的实例包括猪心脏瓣膜、牛心包和牛胶原。虽然已证实这些组织中未发现TSE因子（WHO2006），但是动物组织试验在数量上是非常少的，所使用的分析方法的检测灵敏度也有差异。况且，常规屠宰中所收集的任何动物组织都有受到高风险组织污染的机会是可想而知的。需要有从动物户体（尤其是老年动物户体）中去除、隔离和安全处理“特定风险”材料的法规和程序来降低这一风险，但还不能完全将其去除。欧盟委员会最近已经提出《动物副产品风险均衡规则》（见欧盟法规1069/2009），用于阐明和方便在动物源材料的选择中进行风险管理。4.1.3TSE因子感染的组织
组织可以通过两种途径受到TSE因子的污染：a）某一组织在TSE疾病过程中被感染，或b）从已感染的组织传染递到其他组织。（例如，与神经系统、组织中的淋巴细胞或血液接触的组织）。
第二种或“外源性”TSE因子污染可能发生在对已感染组织的收集过程中，或是从以前操作中受到TSE因子污染的器具或表面。对其加以区别的重要性有以下几个理由：内源性感染的组织（除在已感染的动物体内发现具有较高传染性的中枢神经系统组织外)通常含有非常少量的TSE因子，因此，从逻辑上难以开发出去除内源性传染源的确认方法的适用模型。外源性污染的确认方法更容易通过人为地将组织加人已知来源、生物学特征和传染性含量（用易感动物体内滴定量来定义）的TSE因子加以模拟。有多种可在啮齿类动物体内繁殖成高滴度的痒病因子的病毒株和一种BSE中派生的因子株（301V)已在对外源性感染材料的模型化中得到应用（见ISO22442-3：2007的C.1和ISO22442-3：2007的附录D)。确认研究中模型因子的选择受到以下考虑的限制：a）虽然组织中实际未被通过的TSE因子被认为与确认性灭活/去除研究的目的最具有“相关”性，但这一因子的传染性滴度通常是未知的并且低于那些适用于啮齿类动物的因子（Wells2007)；和
b）BSE因子以及啮齿类动物BSE因子中提取的病毒株的处置，监管部门可能会要求难以广泛获得的高防护性研究设施。通常情况下，用适用于啮齿类动物的痒病因子进行研究被认为是可接受的。切记，有报道称不同的TSE病毒株对灭活程序的抗性是不一致（Peretz，Supattaponeetal.2006)。
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5去除TSE因子的潜在方法
5.1传染性灭活方法
5.1.1总则
YY/TC771.4—2015/ISO/TR22442-4:201C多数监管部门建议，宜尽可能灭活潜在污染源材料的TSE因子而不是简单地将其与其他原材料分离。残留活性因子的存在可能会引起某一组织源性产品的后期机会性污染，并污染加工设施和非一次性使用器具的持续性感染危险。但不幸的是，大多数已知的能有效灭活TSE因子的物理和化学方法都过于苛刻通常会损害组织的功能特性。对于一次使用后不能毁环或应与潜在污染性材料的直接接触的设施和加工器具的清洁，可靠地灭活TSE因子的去污染方法优先于简单去除TSE因子的方法。5.1.2灭活TSE传染性的物理方法5.1.2.1高温
当已感染痒病的啮齿类动物来源的组织悬液被迅速加热并持续性搅动时，其传染性（Rer1984；Rohwer1984)在几分钟内就能迅速降低至分析的检出限以下。但含TSE因子的浸渍物和干操的制品则在长时间热处理后仍具有一定的传染性（Asher.Pcmerayeal.1985：A3her，Fomerayetal1987：Taylor，Fraseretal.1994）。干热灭活TSE因子没有湿热叉活有教（Taylor2001)L的确，育宽需关于采用干热法对携有外科医源性CJD的器具灭菌后出现传播的报道（Mevin，MicMenemyetal1Foncin，Gachesetal.1930)]，在一系列研究中甚至发现，病三子在低于60c℃的供籍中烧成图东后仍有少量的传染性（Br3wn.Liberski，etal199o），而老更高的宽下产育发班壁病因子活性（w-Rauetal.2004）。组织器械不可能经受使TSE因子灭活的热处理而不丧光其功能。曾有人建议，为了充分去除TSE因子的污染，宜在2MF120baz）的三方条件下，在透气生期就菌器中蒸汽灭菌至少13min，这已经被证明是无效的Tayloralcde193。wo的一个空调会（WorldHealthOrganization1999）警告这种处理不可能去除已波TS三污染的干性组织表面的TSE污染。美国CDC的一位顾问警示，当污染的表面未经过面底的清洗时，许多病原体在热处理和化学处理中可以存活，所以应对重复性使用的医疗器械的关键表面进行底情洗（RutalaW，FDATSEAdvisoryCommittee,17July2003accessed16July200gathttp://fca.gov/chrms/dcckets/ae/c3/slides/3969s1.htm）；但是，该顾问（Rutala2010）又指出，外科仪器带来的医源性传播CJD的情况是极为罕见的（自1980年以来未见相关医疗文献报道），说明，现行的外科仪器的消毒和最终灭菌的标准方法对充分去除CJD因子以降低风险至检测不到的水平可能是有效的。这种观察到的功效可能是清洗和湿热灭活的综合作用，并三实验室中已证明了单独使用任一种方法的潜在功效都是不够的（Bundesgesundheitsbl-Gesundheitsforscn-Gesundheitsschutz200l，UKDepartment of Health2009).
5.1.2.2射线
TSE因子对紫外线和电子束灭活都具有抗灭活性（Alper，Haigetal.1966；Latarjet，Mueletal1970;Latarjet1979)。
5.1.3灭活TSE传染性的化学方法5.1.3.1碱性水解处理
目前已知，NaOH接触处理（≥1N，特别是在高温条件下）在从水性悬液和表面干燥的组织3
HiiKAoNiKAca
YY/T0771.4—2015/ISO/TR22442-4.2010（tissuesdriedontosurfaces）（Taylor2000）中去除传染性是有效的并且在实验室处理TSE因子中被广泛使用（Brown，Rohweretal.1984，Baron，Safaretal.2001）。NaOH引起的危害是众所周知的[腐蚀性，特别是加热的时候，并且与铝接触时可能会发生爆炸（httP：//certified-lye.com/safetyhtml)]。NaOH对灭菌器的腐蚀性似乎被夸大了，其实只要不使溶液直接接触灭菌器的关键表面，这个问题就能得以解决，（BrownandMerritt2003Brown，Merrittetal.2005）。明胶（gelatins)制造中广泛使用的Ca(OH)，虽然辅以加热非常有效，但从染毒后的动物骨制品中去除痒病和BSE传染性方面，远不如NaOH处理有效（Grobben，Steeleetal.2005；Grobben，Steeleetal.2006a;Grobben,Steele et al.2006b)。许多碱性配方（碱性化学物的混合物）被声称与低浓度碱溶液具有相同的灭活效率。这些不同配方的溶液的作用，取决于配方、温度和特定产品的浓度。这些处理对组织是低破坏性的，但未见有将它们的灭活效率和高浓度碱处理的灭活效率进行比较的研究。5.1.3.2酸处理
曾经通过接触浓缩的甲酸（Brown，Liberskietal.1990）和最近通过接触含有十二烷基硫酸钠的乙酸溶液（Peretz，Supattaponeet al.2006)，TSE因子可被大部分灭活，但不能完全灭活。5.1.3.3卤化物和其他氧化剂处理目前已知，次氯酸钠（浓度≥5%的家用氯漂白剂）从痒病污染的悬液和表面（Taylor2000）去除TSE传染性是有效的并在不考虑其对金属腐蚀作用时广泛使用（BrownandMerritt2003；Taylor2004）。氯胺和其他卤化物的灭活效率较低（Asher1986）。液体过氧化氢在去除TSE因子污染方面也缺乏实用性（Taylor2004），尽管在低温气体状态下可能会更有效（Langeveld，Wangetal.2003；Fichet，Comoy et al.2004, Yakovleva,Janiak et al.2004; Yan,Stitz et al.2004,Fichet,Antloga et al.2007).5.1.3.4酚类消毒剂处理
有报道称一种有专利权的酚消毒剂可将已污染的悬液中的痒病传染性去除至检出限水平（ErnstandRace1993，RaceandRaymond2004）。只用酚处理不能去除传染性（Asher，Gibbsetal.1986）。5.1.3.5蛋白酶处理
广泛接受的病毒理论促成了对几种蛋白酶处理对TSE因子的传染性作用的研究，各研究结果不同(Langeveld,Wang et al.2003,Fichet,Comoy et al.2004,Yakovleva.Janiak et al.2004, Yan,Stitz et al.2004，Jackson，McKintoshetal.2005）。如前所述，彻底清洗在去除表面的传染性中无疑是重要的（RutalaandWeber2004；），蛋白酶处理可能有利于彻底清洗过程。蛋白酶是否还能通过裂解蛋白而对TSE因子灭活具有特定作用还不太清楚。5.1.3.6胍类和其他离液的化学处理已发现，用胍类（Manuelidis1997）和其他离液化学物（Prusiner，Grothetal.1993）可降低传染性。一些报道表明，当离液化学物去除后明显的灭活是可逆的（Prusiner，Grothetal.1993McKenzie，Bartzetal.1998)。
5.1.3.7综合处理bZxz.net
有限的经验认为，用不同化学方法与物理方法相结合，对TSE-灭活可能比单独用一种方法处理更有效（Fichet，Comoyetal.2004）。潜在有效的综合处理的实例有NaOH并伴随加热（Taguchi，Tamaiet.al.1991）、中性洗涤剂中煮沸处理（Taylor2004）以及洗涤溶液中加乙酸处理（Peretz，Supattaponeet4
YY/T0771.4—2015/ISO/TR22442-4:2010al.2006）。通过使用加盖的容器来使NaOH与灭菌器内表面隔离，可以减少其对灭菌器的潜在损害(BrownandMerritt2003;Brown,Merrittetal.2005)。5.1.3.8已研究过的无活力组织源性医疗器械中去除TSE因子的潜在过程我们尚不清楚TSE因子的实验性确认在降低染毒后传染性方面是否与降低组织来源的医疗器械中所用的任何方法相似。只知道一项使用NaOH从仓鼠硬脑膜去除痒病因子的研究（DiringerandBraig1989）和一项在用痒病因子实验性染毒的肉类产品经高温和高压后还保持其美味的研究（Brown，Meyeretal.2003)；这两项处理（导致传染性实质性降低的同时）都没能将染毒后的痒病传染性降低到检出限以下水平。
注：当前，医学文献中报道的用于无活力人组织来源器械的灭菌的方法有很多种（包括有/无辐射防护剂的射线和不同的化学清洗剂和消毒剂，其中包括清洁剂、过氧化氢，酒精、酸化液（McAllister，Joyceetal.2007）和NaOH处理（Hannah，Belayetal.2001)】：这些程序中至少有一些似乎损害了器械的功能特性（McAllister，Joyceetal.2007）。某些方法已被声称能大幅降低添加菌株（FDA推荐的外科植人性人体细胞、组织和组织源性产品的无菌保证水平[SAL]为10-\，能承受灭菌过程的植人性医疗器械的SAL为10-\）5.1.3.9无效处理
尚未发现环氧乙烷气体、酒精、含汞消毒剂和其他一些通常用于表面消毒和灭菌的处理方法对TSE因子的去除有作用；这些处理方法的研究已受到了限制（Asher1986）。乙醛不仅无法灭活TSE因子，而且还会稳定TSE因子的传染性（TaylorandMcBride1987，Brown，Liberskietal.1990）。英国政府公布的文件中列出了更多无效的处理方法(DoHACDPTSEWG-annexC)。5.2去除TSE传染性而不是将其灭活的方法虽然如色谱法、沉淀、过滤和将各部分分开的物理方法能降低复杂的生物混合物（如血液及其成分以及血浆和血浆成分（Foster2004)）中TSE传染性的总量，但不太可能用于从完整的无活力组织中选择性去除TSE传染性。
6从使用无活力动物组织的医疗器械中去除TSE因子方法的实验性确认6.1总则
虽然已经有少量降低（如果不能去除）人类无活力组织中外源性污染TSE因子的研究，但几乎未见直接从动物源组织中去除TSE因子污染的研究。正如ISO22442系列标准中所述，更适宜降低风险的方法是仔细选择低风险来源的动物和组织以及良好的加工过程（GMPs）以降低外源性污染神经组织和在较小程度上污染淋巴组织以及肠组织的机会（McAllisterandJoyce2007）6.2为设计TSE过程的确认研究对产品家族给出定义美国医疗仪器促进协会AAMITIR37：2007第4章对产品家族给出的定义宜适用于本文件。这些定义用于评价从使用无活力动物组织的医疗器械中消除/去除TSE因子确认分析。试验性确认所选择的产品宜尽可能与所关注的制造产品相近，并被一名或多名专家顾问认定为是一个产品家族中的可接受的真实代表（AAMITIR37：2007中4.2.34.3.4所定义的主产品、等同产品或模拟产品）。6.3为确立和验证TSE因子的感染剂量进行的产品选择和试验AAMITIR37：2007的第5章中关于从使用无活力动物组织的医疗器械中消除/去除TSE因子确认分析的评价所描述的内容宜适用于本文件。这些内容包括试验产品抽样条件属性的考虑、样品份额、YY/T0771.4—2015/ISO/TR22442-4.2010多批次考，以及试验产品浸提液的分析（直接对整个动物样品进行分析不可行时）等。宜注意的是，无论是用抗PrPTSE-蛋白酶的初步免疫分析还是（尤其是）随后在动物体内的生物学分析，相对于细菌和真菌的培养，TSE因子分析的技术难点更高、更耗时（生物分析需要几个月或几年时间）和更昂贵，这应在选择重复性试验的数量时予以考虑。6.4TSE因子染毒材料
少量但越来越多的证据表明，虽然所有TSE因子都具有大部分共同的生物学特性和物理特性，包括对各种灭活处理具有罕见的抵抗力，但各病毒株之间的抵抗力还是有显著差异的（Taylor2000）（Peretz，Supattaponeetal.2006）。这似乎说明在研究中要选择一个感染上一株对灭活程序具有较高抵抗力而不是较低抗力的TSE因子的组织，前提是该染毒材料与制造过程具有相关性。虽然用最坏情况不切实际地代表制造情况可能会有争议，但是各种确认模型都通常要求用含有高浓度TSE因子（通常指的是已感染的脑组织悬液、片段或浸渍物)的组织作为染毒材料。必须认识到，这些材料大部分是用已感染上与该啮齿类动物相应病毒株的TSE因子（特别是痒病因子）的啮齿类动物的脑组织制备而成，这些组织可能在病毒因子的数量或生物学特性和物理特性或基质（组织的来源）的某些特性上都不能与自然感染的组织完全相似。但是，通常情况下，因为以下几种原因，除了用啮齿类动物相应的TSE因子病毒株对啮齿类动物大脑染毒之外，其他从原材料中去除TSE因子的确认过程都还不可行。a）天然感染组织中TSE因子的滴度通常是未知的，可获得的啮齿类动物对野生型分离（fieldisolates）（非常少见）TSE因子感染的易感性也是未知的。其他组织中PrPTsE（通常检测不到）的滴度和传染性都低于脑组织。从天然感染动物的组织中制备的经过充分表征的标准对照材料还不能广泛获得。b）
除了少数研究实验室以外，通常无法获得与野生型分离的TSE因子具有一致易感性的转基因c
小鼠（或其他啮齿类动物一如，欧洲银行田鼠（Nonno，DiBarietal.2006)）。6.5生物分析动物的可获得性（普通小鼠和转基因小鼠、其他啮齿类动物、农场动物）适合于TSE因子（通常来源于绵羊痒病的病毒株但最近也可以从BSE获得）的啮齿类动物已经在调查各种实验性染毒的原材料或中间体中的传染性去除方法的初步研究之中得到应用。痒病因子适宜于仓鼠的263K病毒袜（Nazor2005）和与金黄色地鼠分析中相似的病毒株（Peretz，Scottetal.2001）是非常有用的。在普通小鼠体内分析中适宜于BSE因子病毒株的301V小鼠可能更能预视牛组织中BSE因子的行为（Grobben，Steeleetal.2005）。通过基因工程技术繁育的表达蛋白基因（PRNP)中其他种属的氨基酸序列的转基因小鼠在有些情况下可能是有用的但也会引起许多间题。a）过表达病毒蛋白质的小鼠在试验以后会患有组织病理学上与TSEs相似的非传播性神经系统疾病，有时会干扰传染性分析的解释（Nazor，Seward，etal.2007）。b）当前，多数品系的PRNP-转基因小鼠只能通过从开发者处馈赠的途径获得。与某些普通品系小鼠相比，虽然某些品系可能会具有更高的敏感性，但表达牛PRNP氨基酸序列小鼠的优越性至今尚未得到严格证实（人源性TSE因子很少向普通小鼠传播疾病，并且因为使用非人灵长类进行分析已经变得越来越不可能，所以表达人PRNP氨基酸序列的转基因鼠似乎为传染性的分析提供了最实际的手段）。如上所述，欧洲银行田鼠对许多TSE因子具有高易感性（Cartoni，Schininaet al.2005,Nonno,Di Bari et al.2006, World Health Organization 2006;Cartoni,Schinina et al.2007),但是，它们比小鼠对BSE因子和新发现的病因子的Nor98病毒株显示出相对较低的敏感性，并且，在任何情况下，群居的田鼠都无法广泛获得。用相同种属的易感动物中分析出自然感染的动物来源的材料进行去除动物源TSE因子的传染性方法的研究是否最为适宜可能还存在争议；虽然已在小牛特中（WorldHealthOrganization2006：6
YY/T0771.4—2015/ISO/TR22442-4.2010Masujin，Matthewsetal.2007）和痒病在绵羊中对BSE致病性分析开展了少量的调查（Hadlow，Raceetal.1979；Hunter，Fosteretal.2002；HunterandHouston2002；Hunter2003)，但是在大动物中研究TSE传染性的去除通常是不现实的。6.6细胞培养法分析传染性的发展潜力几种细胞系已被报道描述可支持所选择的TSE因子的繁殖（Klohn，Stoltzeetal.2003；KociskoMorrey et al.2004, Kocisko,Engel et al.2005, World Health Organization 2006, Liu,Sun et al.2008).虽然这些细胞不能显示出公认的细胞病变效应，但能够检测出PrPTSE。据报道，这样的细胞培养分析比在原始感染组织中直接检测PrPTSE更灵敏得多。不幸的是，细胞培养分析还没有被开发用于BSE因子、分离自隔离种群的绵羊痒病因子或人源性TSE因子的检测。另外，PrPTSE结果假阳性已成为一个问题（Vorberg，Rainesetal.2004）。因此，开发可靠并敏感的以细胞培养为基础的动物TSE因子的分析方法将非常有利于动物源材料中TSE因子去除方法的确认。6.7PrPISE和传染性分析之间的相关性虽然通常会在含有TSE传染性的组织和组织浸提液中检出PrPTSE，但也有许多在含有大量传染性的材料中无法检测出PrPTsE的报道（Lasmezas，Deslysetal.1997，Manuelidis，Fritchetal.1997;Manson,Jamieson et al.1999;Race,Meade-White et al.2002;Barron,Campbell et al.2007;Piccardo.Mansonetal.2007)。并且，已经在TSE因子含量在检出限以下的组织中发现了具有PrPTsE特性的免疫反应性蛋白。一些研究者已经宣称从没有接触过TSE因子的动物组织中产生TSE传染性是有可能的(Yuan,Xiao et al.2006，Deleault,Harris et al.2007，Castilla 2008;Jacks0n et al.2009)这些混乱的局面垂需得到澄清（Aguzzi2007），但在解释PrPTsE分析结果时对此予以注意。虽然有些报道声称PrPTsE几项新方法比啮齿类动物生物分析传染性的方法更为灵敏（Safar，Cohenet al.2000,Safar,Scott et al.2002;Lee,Long et al.2005,Safar,Geschwind et al.2005,Castilla,Saa et al.2006;Soto，Estradaetal.2006），但这些研究还需由独立方在设盲和随机研究中进行比对验证。6.8传染性降低到检出限以下
只有采用了经足够多的重复试验和分析而每一试验都能确保其结果具有可重复性的可靠方法，分析所估计出的传染性数量的降低才有价值。正如对其他传染性因子的传染性降低的估计那样，当采用不同分析方法的结果时，尤其是当传染性降低少于1000倍的情况时，应对此特别予以注意。出于这原因，有些监管部门推荐，对任一个声称降低污染风险的加工方案宜采用两个基于不同的化学-物理原理“正交性”（Trejo，Hottaetal.2003)并确认过的传染性降低过程。对于生物制品，FDA推荐在声称某一加工方法可将某一特定病原体污染的风险降低至某一可接受水平之前，两个过程中的任一个降低染毒的传染性至少10000倍（Farshid，Taffsetal.2005）。6.9支持传染性降低不是依据分析性能的变异来确定重复确认的次数某一试验中重复试验和重复分析的次数在很大程度上取决于分析和所研究的过程的变异性。所提供的方法宜为可靠的，能表明确认试验宜是在加工规模和加工过程中可能遇到的所有条件下（pH、离子强度、温度和有机负载）进行的。6.10用各生产步骤对PrPISE和传染性的降低能力确认对整个过程确认的要求在开始的材料中加人相应的TSE传染性后，清除其实质性的数量，从而在终产品中得到彻底的不可检测的感染性，以验证整个制造过程中的有效性，这种方法特别令人放心，但是，如此的验证，因为如下的几个原因而难以实施。原始材料中输人的传染性可能是适度的，但从原始材料到最终产品间的各
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