【SN商检标准】 蜜蜂囊状幼虫病检疫技术规范

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3990—2014 蜜蜂囊状幼虫病检疫技术规范 Quarantine protocol for sacbrood disease of bees 2014-11-19发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2015-05-01实施 发布 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郑腾、张体银、李宋钰、张志灯、宋战的、王武军、白泉阳、王伟利。 1 范围 本标准规定了蜜蜂囊状幼虫病的临床诊断方法和实验室诊断方法。本标准适用于蜜蜂囊状幼虫病的临床诊断与检疫鉴定。 2 规范性引用文件 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 临床诊断 3.1 箱外观察法：蜜蜂外出活动采集时可见异常幼虫，需进一步检查蜂群。 3.2 蜂群检查法：打开蜂箱检查封盖子脾，可见死亡幼虫数量多于健康幼虫，出现“花子脾”现象，即卵、小幼虫、大幼虫及封盖子不规则分布，巢房盖被咬开，部分幼虫头部上翘呈“头”状，脾面出现大量透明液体。病虫可通过镊子夹取，表现为乳白色至褐色变化，末端呈囊状结构，干燥后形成黑褐色鳞片状物，通常无黏性、无臭味，形如“龙船状”。依据上述特征可进行初步诊断，必要时进行实验室确诊。 3.3 鉴别诊断：需与美洲幼虫腐臭病区分。囊状幼虫病由病毒引起，美洲幼虫腐臭病由细菌引起，两者均可导致封盖幼虫死亡，但特征不同（见表1）。囊状幼虫病通常无臭味，虫体无黏性；美洲幼虫腐臭病具有腐败鱼腥臭味，虫体黏性强，可拉丝，干枯后形态不同且更易与巢房分离或不易分离。 4 实验室诊断 4.1 设备、材料和试剂 4.1.1 设备：包括梯度PCR扩增仪、台式冷冻高速离心机、微量移液器（100μL～1000μL、20μL～200μL、2μL～20μL、0.5μL～10μL）、电泳系统、凝胶成像系统、电子天平（感量0.01g）、防护用具（蜂帽、防蛰手套、养蜂工作服及喷烟器）。 4.1.2 材料与试剂：包括RT-PCR检测引物（扩增片段约469bp）、DEPC水、无水乙醇、dNTPs、琼脂糖、溴化乙锭、电泳缓冲液、加样缓冲液、DNA纯化回收试剂盒等；蜜蜂囊状幼虫病病毒标准株由指定单位提供；试验用水应符合GB/T6682三级水要求。 4.2 采样、送样和处理 4.2.1 幼虫样品采集与处理：在具有典型临床症状的蜂群中，可无菌割取带病虫或死虫的巢脾，或无菌挑取单个病虫若干用于检测。